考虑 2, 4 - D 溶于有机溶剂 ,不溶于水 ,化学 性质稳定 ,而其钠盐则可溶于水 ,所以选用氢氧化
第 2期 彭 姝等 :豆芽中三种常见激素的高效液相色谱检测法
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钠溶液 (0101 mol/L )作为提取剂 。将 2, 4 - D 转 化为钠盐 ,溶于水中 ,高速离心分离 ,上清液用磷 酸调 pH至 215,将钠盐还原成弱酸 2, 4 - D ,此时 2, 4 - D 从水相中析出 。有报道称可利用二氯甲 烷液 - 液萃取 ,但实际操作中发现该法乳化现象 比较严重 ,回收率不高 。故考虑先用蛋白沉淀剂 处理 ,后再通过液 - 液萃取提取 2, 4 - D ,提取度 比较高 ,但是多次萃取操作繁琐 、试剂消耗量大 。 而用 ODS - C18 SPE柱萃取 ,用水淋洗后再用流 动相洗脱 ,不仅具有较理想的净化效果和回收率 , 而且试剂消耗少 ,操作简单 、快捷 。2, 4 - D 为有 机弱酸 ,所以流动相体系应为酸性 ,以 pH 310为 佳 ,试用了冰乙酸和磷酸 ,结果冰乙酸对基线影响 较大 ,噪声较多 ,而磷酸较理想 。
酸化甲醇溶液 :每 100 m l甲醇 +水 ( 60 + 40, V /V )中加入乙酸 50μl,混匀 。
固相萃取小柱 : ODS - C18 SPE柱 ,用时先经 10 m l甲醇洗脱活化 ,再用 10 m l水洗去残留甲 醇 ,保持萃取柱湿润状态待用 。 21212 色谱条件 检测器 :紫外检测器 ;色谱柱 : kromasil C18 ( 25010 mm ×416 mm ×5 μm ) ; 柱 温 : 35℃;检测波长 : 267 nm;流动相 :甲醇 + 115% 磷酸溶液 (40 + 60) ;流速 : 110 m l/m in;进样量 : 10 μl。 21213 样品前处理方法 称取捣碎混匀的豆芽
目前国家标准中还没有豆芽的卫生标准 ,也 没有针对豆芽中激素残留检测方法的国家标准和 三种激素残留的高效液相色谱检测法 。目前有关 这三种激素的残留控制 、检测方面鲜有报道 ,且有 些检测方法繁琐 、不够准确 。
本文对豆芽中三种常见激素残留的高效液相 色谱检测法进行了系统研究 ,并对市售豆芽中的 激素进行了检测和评价 ,以期为质监部门检测豆 芽中激素残留及制定相关标准提供一定依据 。
氢氧化钠溶液 ( 0101 mol/L ) :称取 0140 g氢 氧化钠 (AR ) ,溶于水并稀释至 1 000 m l。
亚铁氰化钾溶液 : 称取 1016 g亚铁氰化钾 [ K4 Fe (CN ) 6 ·3H2 O ]溶于少量水中 ,并用水稀释 至 100 m l。
乙酸锌溶液 : 称取乙酸锌 [ Zn ( CH3 COO ) 2 ]
关键词 :高效液相色谱 ;豆芽 ; 2, 4 - D; 6 - BA; GA3 中图分类号 : X836102∶Q503 文献标识号 : A 文章编号 : 1001 - 4942 (2010) 02 - 0095 - 04
豆芽富含多种维生素 、矿物质和蛋白质 ,深受 消费者喜爱 。但目前我国豆芽生产主要是家庭作 坊孵化式 ,设备简陋 ,卫生很难保障 ,尤为严重的 是在豆芽生产过程中添加激素催发豆芽生长 ,造 成安全隐患 。
样品 10 g于 50 m l聚丙烯离心管中 ,加入 15 m l 酸化甲醇 ,振荡 10 m in,超声提取 15 m in,然后以 11 000 r/m in离心 10 m in,上清液转入 100 m l蒸 发瓶中 ,残渣再用 15 m l酸化甲醇溶液提取 ,再次 离心 ,合并上清液 。上清液用旋转蒸发仪蒸发 ,以 去除甲醇 ,剩余水相以 3 m l/m in的流速通过活化 的 ODS - C18 SPE 柱 ,用少量水洗蒸发瓶入 SPE 柱 。先用 310 m l水洗去水溶性杂质后 ,再用甲醇 洗脱并定溶至 310 m l,过 0145 μm 滤膜后 ,供液 相色谱分析 。 213 赤霉素 GA3 的检测方法 21311 标 准 溶 液 配 制 称 取 GA3 (含 量 ≥ 9910% ) 011000 g,甲醇溶解后用 50%甲醇稀释至 浓度为 1100 mg /m l的工作液 ,然后用流动相分别 稀释到 0、100、200、400、500、600μg /m l,作为标准 曲线用工作溶液 。 21312 色谱条件 检测器 :紫外检测器 ;色谱柱 : kromasil C18 (25010 mm ×416 mm ×5 μm ) ;柱 温 : 35℃; 检 测 波 长 : 210 nm; 流 动 相 : 甲 醇 + 115%磷酸溶液 (40 + 60) ;流速 : 110 m l/m in;进样 量 : 10μl。 21313 样品前处理方法 称取捣碎混匀的豆芽 样 品 50 g 于 锥 形 瓶 中 , 加 入 100 m l 冷 甲 醇 (4℃) ,低温振荡 20 m in,超声 15 m in,放入 4℃冰 箱中提取 2 h,上清液过定量滤纸 ,滤液入梨形瓶 中 , 40℃水浴浓缩至 20 m l,再加入 50 m l冷甲醇 , 振荡超声 , 4℃提取 2 h,全部过定量滤纸 ,滤液入 同一蒸发瓶中 , 40℃水浴浓缩 ,直至难以继续浓 缩 ,上旋转蒸发仪 40℃继续浓缩至近干 ,用甲醇 定容至 5 m l。过 0145μm 滤膜后 ,供液相色谱分 析。
3 结果与分析
311 豆芽样品中 2, 4 - D 的检测结果 将绘制标准曲线用的 2, 4 - D 工作溶液由低
到高每个浓度进样 3次 ,以峰面积 (A )的平均值 对 浓 度 ( C ) 绘 制 标 准 曲 线 。回 归 方 程 : A = 1190057 ×10 - 4 C,绝对系数 R2 为 019999683。
采用甲醇 +水 ( 75 + 35,用磷酸调 pH 值至 310)作为流动相 ,检测波长为 282 nm ,将豆芽样 品经过提取 、除蛋白 、固相萃取净化后 ,经过 0145 μm 滤膜过滤进样 。 2, 4 - D 标准溶液在 41696 m in出峰 ,峰形尖锐 ,无杂峰干扰 (图 1、2) 。添加 回收率为 86160% ,本方法检出限为 0105 mg / kg。
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山 东 农 业 科 学 2010年
2210 g溶 于 少 量 水 中 , 然 后 加 入 3 m l 冰 醋 酸 (AR )并加水稀释至 100 m l。
固相萃取小柱 : ODS - C18 SPE柱 ,用时先经 10 m l甲醇洗脱活化 ,再用 10 m l水洗去残留甲 醇 ,保持萃取柱湿润状态待用 。 21112 样品前处理 称取捣碎混匀的豆芽样品 20 g于 100 m l容量瓶中 ,加入 40 m l氢氧化钠溶 液振摇 ,然后分别加入亚铁氰化钾溶液和乙酸锌 溶液各 5 m l,混匀 ,超声提取 30 m in,用氢氧化钠 溶液稀释至刻度 ,过滤 。取 15 m l滤液用浓磷酸 调 pH至 215,然后以 3 m l/m in的流速通过活化 的 ODS - C18 SPE柱 。先用 310 m l水洗去水溶性 杂质后 ,再用甲醇洗脱并定溶至 310 m l,过 0145 μm 滤膜后 ,供液相色谱分析 。 21113 色谱条件 检测器 :紫外检测器 ;色谱柱 : kromasil C18 (25010 mm ×416 mm ×5μm ) ;柱 温 : 35℃;检测波长 : 282 nm; 流动相 : 甲醇 +水 ( 75 + 35, 用 磷 酸 调 pH 值 至 310 ) ; 流 速 : 110 m l/m in;进样量 : 10μl。 212 6 - BA 的检测方法 21211 标准溶液的配制及 SPE柱活化 6 - BA 标准溶液 :称取 6 - BA (含量 ≥9910% ) 011000 g (精确到 011 mg) ,用甲醇溶解并稀释至浓度为 1 mg /m l的储备液 ,保存于 4℃冰箱 。吸取浓度为 1 mg /m l的储备液适量 ,用流动相 (甲醇 + 115%磷 酸溶液 , 40 + 60)稀释至浓度为 1010 μg /m l的工 作溶液 。吸取浓度为 1010 μg /m l的工作溶液适 量 ,用流动相分别稀释到 0、01080、01320、01400、 01750、21000μg /m l,作为标准曲线用工作溶液 。
1 仪器与试剂
日本岛津 LC - 20AT高效液相色谱仪 、德国 Sigma台式高速冷冻离心机 、超声波清洗仪 、旋转 蒸发仪 、水浴锅 、固相萃取仪 。
磷酸 (分析纯 ) 、甲醇 (色谱纯 ) 、氢氧化钠 (分 析纯 ) 、亚铁氰化钾 (分析纯 ) 、乙酸锌 (分析纯 ) 、 冰乙酸 (分析纯 ) 、C18固相萃取柱 。
实验用水 :电导率 < 110高纯水 。
2 检测方法
211 2, 4 - D 的检测方法 21111 标准溶液的配制及萃取柱活化 2, 4 - D 标准溶液 :称取 2, 4 - D (含量 ≥9910% ) 1010 mg, 用甲醇溶解并稀释至浓度为 10010μg /m l的储备 液 ,保存于 4℃冰箱 。用甲醇 +水 ( 75 + 35,用磷 酸调 节 pH 值 至 310 ) 流 动 相 分 别 稀 释 到 0、 01200、01400、11000、21000、101000 μg /m l, 作为 绘制标准曲线用工作溶液 。
收稿日期 : 2009 - 11 - 05 基金项目 :泰安市科技局 2008年科技引导计划项目 。 作者简介 :彭 姝 (1984 - ) ,女 ,助理工程师 ,主要从事食品检验工作 。 E - mail: peng1984 shu@1261com 3 通讯作者 :高艾英 ,女 ,工程师 。 E - mail: aygao@1261com
乙腈体系要好 。分别选用甲醇 +乙腈 + 011%乙 酸 (60 + 5 + 35)和甲醇 ∶115%磷酸溶液 (体积比 为 40∶60)为流动相进行比较 ,发现两者均有较 理想的分离效果 。但考虑到甲醇 + 115%磷酸溶 液 (40 + 60)配制比较方便 ,且磷酸的噪声比乙酸 小 ,所以本试验选用甲醇 + 115%磷酸溶液 ( 40 + 60)为流动相 。