不同产地红参中总皂苷及人参皂苷Ｒｇ１、Ｒｅ、Ｒｂ１的含量比较【摘要】目的测定不同产地红参中总皂苷及人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量。
方法利用紫外分光光度法、高效液相色谱法比较不同产地红参中总皂苷及人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量。
结果不同产地的红参总皂苷及人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量相差相对较大。
结论应该重视红参的种植、采收、加工炮制等的进一步规范化研究。
【Abstract】Objective To compareginsenosides and ginsenosideRg1、Re、Rb1 contents of Red ginsengof different origins.Methods The content of ginsenosides was determined by UV and ginsenosideRg1，Re，Rb1by HPLC.Results The content of ginsenosides and ginsenosideRg1，Re，Rb1of different origins were relatively diffenent.Conclusion We should pay more attention to the standard research of agricultural and processing of red ginseng.【Key words】Red Ginseng；Ginsenosides；Ginsenoside Rg1、Re、Rb1红参(Radix et Rhizoma Ginseng Rubra)为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的栽培品经蒸制后的干燥根及根茎，具有大补元气，复脉固脱，益气摄血之效，临床上用于体虚欲脱，肢冷脉微，气不摄血，崩漏下血；心力衰竭，心源性休克。
红参中主要含有:皂苷类、挥发性成分、脂溶性成分、多糖等，其中皂苷类为主要活性物质基础之一，但市场上的红参中皂苷类成分含量差异相对较大，本实验采用紫外分光光度法、高效液相色谱法比较不同产地红参中总皂苷及人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量。
1 仪器与试药仪器:Agilent 1100型液相色谱仪(美国惠普公司)；UV-2401型紫外分光光度计(日本岛津公司)；电子天平(Mettler Toledo AG285)；KQ-500E型医用超声清洗器(昆山超声仪器有限公司)；数显恒温水浴锅HH-4(常州国华电器有限公司)。
试剂:乙腈、甲醇为HPLC级，其余试剂均为AR级。
对照品:人参皂苷Rg1(11857-200203)、人参皂苷Re(0764-200107)、人参皂苷Rb1(110765-200205)由中国药品生物制品检定所提供。
红参药材:分别购自辽宁抚顺、吉林靖宇、吉林集安。
2 方法与结果2．1 不同产地红参中总皂苷的含量测定[1]采用比色法测定红参总皂苷的含量，方法:精密吸取人参皂苷Re对照品、红参提取样品适量，置10 ml具塞试管中，水浴挥干，精密加入5%香草醛-冰醋酸溶液0．2 ml，再精密加入高氯酸溶液0．8 ml，混匀，置60℃水浴中15 min，取出，立即放入冰浴中2 min，精密加入冰醋酸5 ml，混匀，置UV-2401紫外扫描仪器上，结果:人参皂苷Re对照品和红参样品在547 nm处有最大吸收，确定547 nm为红参总皂苷的检测波长。
2．1．1 对照品溶液及标准曲线的制备称取人参皂苷Re对照品适量，精密称定，加甲醇溶解制成浓度为1．012 mg/ml的对照品溶液，精密吸取对照品溶液50、75、100、125、150 μl按测定项下操作，于547 nm处测定吸收度，以吸收度(A)为纵坐标，对照品的量(mg)为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为:Y=4．318 2X-0．001 9，r=0．999 8。
实验结果表明人参皂苷Re在0．050 6~0．151 8 mg范围内呈现良好的线性关系。
2．1．2 精密度试验取人参皂苷Re对照品液100 μl，按样品测定项下操作，连续测定6次，求得平均吸收度0．435，RSD为0．59%。
2．1．3 样品稳定性试验取红参供试品溶液分别在0、0．5、1、1．5、2、2．5、3 h进行测定，计算平均吸收度0．521，RSD为0．94%，结果表明样品在3 h内稳定。
2．1．4 重复性试验称取6份红参各0．5 g，精密称定，按供试品项下操作，制得供试品溶液，进行测定。
计算求得平均含量为2．45%，RSD为1．33%。
2．1．5 红参总皂苷加样回收率试验称取红参样品粉末(过四号筛)约0．25 g各6份，精密称定，分别加入1．012 mg/ml人参皂苷Re标准品液6 ml，按供试品项下操作并按含量测定方法进行测定，计算加样回收率为99．42%，RSD 为0．78%。
见表1。
2．1．6 供试品溶液的制备及样品中总皂苷的含量测定取样品粉末(过四号筛)约0．5 g，精密称定，置离心管中，加甲醇约20 ml，超声(功率250 W，频率20 kHz)提取3次，20 min/次，离心，分离甲醇并蒸干，残渣加10 ml水超声溶解，转移至分液漏斗中，加水饱和正丁醇振摇提取3次，20 ml/次，合并正丁醇液，移至分液漏斗中，加入氨试液洗涤2次，每次20 ml，弃去氨试液，分取正丁醇提取液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10 ml量瓶内，摇匀，滤过，作为供试品溶液。
精密吸取供试品液、对照品液、甲醇各100 μl，分别置3支具塞试管中，挥去甲醇，精密加入5%香草醛-冰醋酸溶液0．2 ml，再精密加入高氯酸溶液0．8 ml，混匀，置60℃水浴中15 min，取出，立即放入冰浴中2 min，精密加入冰醋酸5 ml，混匀，以上述甲醇管为空白，按照分光光度法，分别在547 nm波长处测定吸收度，计算，即得。
见表2。
2．2 不同产地红参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量测定[2]2．2．1 色谱条件色谱柱:KromasilC18(4．6 mm×250 mm，5 μm)；流动相:以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表3进行梯度洗脱；检测波长为203 nm；流速为1．0 ml/min；柱温为30℃；进样量为10 μl。
2．2．2 对照品溶液的制备取人参皂苷Rg1、Re、Rb1标准品适量，精密称定，分别配成人参皂苷Rg1为0．804mg/ml、人参皂苷Re为0．628 mg/ml、人参皂苷Rb1为0．976 mg/ml的混合标准品溶液，摇匀，即得。
2．2．3 供试品溶液的制备取红参粉末(过四号筛)约1 g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流3 h，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入具塞锥形瓶中，精密加入水饱和的正丁醇50 ml，密塞，放置过夜，超声处理(功率250 W,频率50 kHz)30 min，滤过，精密吸取续滤液25 ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2．2．4 线性关系的考察精密吸取对照品混合溶液，加甲醇制成人参皂苷Rg1为0．080 4、0．160 8、0．241 2、0．321 6、0．482 4 mg/ml，人参皂苷Re为0．062 8、0．125 6、0．188 4、0．251 2、0．376 8 mg/ml，人参皂苷Rb1为0．097 6、0．195 2、0．292 8、0．390 4、0．585 6 mg/ml的混合对照品溶液，在上述色谱条件下，精密吸取10 μl注入液相色谱仪，以峰面积积分值为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，见图1，回归方程为:人参皂苷Rg1为Y=3502．96X-11．481 1，r=0．999 9；人参皂苷Re为Y=2794．198 7 X-1．662 2，r=0．999 9；人参皂苷Rb1为Y=3690．379 9X+0．340 5，r=0．999 9。
实验结果表明人参皂苷Rg1在0．804~4．824 μg、人参皂苷Re在0．628~5．024 μg、人参皂苷Rb1在0．976~5．856 μg范围内呈现良好的线性关系。
2．2．5 精密度试验精密吸取人参皂苷Rg1、Re、Rb1混合对照品溶液10 μl，连续进样6次，以峰面积计算精密度，分别为:人参皂苷Rg1为831．63，RSD为0．48%；人参皂苷Re为525．42，RSD为0．14%；人参皂苷Rb1为1082．18，RSD为0．08%。
结果表明仪器稳定。
2．2．6 稳定性试验精密吸取红参供试品10 μl，分别于0、4、8、12、16、20 h注入液相色谱仪。
见图2。
求得平均峰面积，分别为:人参皂苷Rg1为718．82，RSD为0．27%；人参皂苷Re为298．08，RSD为0．49%；人参皂苷Rb1为736．87，RSD为0．16%。
结果表明样品在20 h内稳定。
2．2．7 重复性试验平行称取6份红参样品1 g，精密称定，按供试品项下操作，制得供试品溶液，精密吸取10 μl，注入液相。
计算求得平均含量，分别为:人参皂苷Rg1为0．212 3%，RSD为0．97%；人参皂苷Re为0．106 9%，RSD为0．42%；人参皂苷Rb1为0．215 2%，RSD为0．95%。
2．2．8 加样回收率试验称取已知含量的红参样品0．5 g，精密称定，精密加入混合对照品溶液1 ml，按供试品项下操作并按含量测定方法进行测定，计算平均加样回收率，分别为:人参皂苷Rg1为99．31%，RSD为0．27%；人参皂苷Re为99．11%，RSD为0．54%；人参皂苷Rb1为98．42%，RSD为0．55%。
2．2．9 不同产地红参样品中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量测定分别称取不同产地红参样品1 g，精密称定，按供试品液项下处理，按上述色谱条件分离，进样10 μl，测定峰面积，计算含量。
见表4。
3 讨论3．1 研究表明红参的主要成分是皂苷类及多糖类成分，现版药典也是以其所含人参皂苷Rg1、Re、Rb1作为药材的质量控制标准。
本研究表明不同产地的红参均能达到2005版《中国药典》红参项下含量的要求，但含量的差异比较大，笔者认为与其种植、采收、加工炮制等有关。
应该重视红参的种植、采收、加工炮制等的进一步规范化研究。
3．2 本文还建立了红参中总皂苷的含量测定方法，对不同产地红参中的总皂苷进行了测定，结果含量均在2．30%以上，2005版《中国药典》红参项下规定人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的总量不得少于0．25%,人参皂苷Rb1不得少于0．20%。
说明药典规定的这三种单体皂苷在红参中只是一小部分，若要客观全面的控制红参的质量，建义是否可以对人参总皂苷加以控制。