落地生根水提物对H22肝癌小鼠免疫功能的影响分析
发表时间：2019-12-12T12:48:00.970Z 来源：《医药前沿》2019年32期作者：杨志杰樊星花梁宇红[导读] 目的：探讨落地生根水提物对H22肝癌小鼠免疫功能的影响。
（广西医科大学第四附属医院暨柳州市工人医院药学部广西柳州 545005）【摘要】目的：探讨落地生根水提物对H22肝癌小鼠免疫功能的影响。
方法：建立H22荷瘤小鼠模型，随机分为空白组、阳性组（5-FU）、模型组、水提物低剂量组（4g/kg生药量）、中剂量组（8g/kg生药量）及高剂量组（16g/kg生药量）共6组，每组10只。
阳性组按20mg?kg-1腹腔注射5-FU，模型组、空白组灌服等体积生理盐水，连续给药15天。
进行碳廓清试验，计算抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数和肝脏指数。
结果：落地生根水提物中、高剂量组可明显抑制H22实体瘤生长（P＜0.05），抑瘤率分别为65.68%和74.56%。
中、高剂量组可显著增高碳廓清指数（P＜0.05）与脾脏指数（P＜0.05），仅中剂量组对胸腺指数有显著增高作用（P＜0.05），落地生根水提物对肝
脏指数无影响。
结论：落地生根水提物对H22荷瘤小鼠的免疫系统有一定的保护作用，能调节巨噬细胞吞噬功能的作用，增强机体的免疫功能，提高抗肿瘤能力。
【关键词】落地生根水提物；H22；免疫功能；小鼠【中图分类号】R964 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2019）32-0206-03 落地生根Bryophyllum pinnatum (L.f.) Oken为景天科(Crassulaceae)落地生根属(BryophllurnSalisb)植物，在广西、广东、云南、福建和台湾等地区广泛分布，别名为花蝴蝶、倒吊莲、土三七、叶生根、番鬼牡丹、叶爆芽、天灯笼、枪刀草、厚面皮、著生药等，全草入药，性酸、寒[1]。
除具有观赏价值外，还具有药用价值，可治创伤出血、疔疮、乳腺炎、跌打损伤吐血、热性胃痛、关节肿痛、急性中耳炎、皮肤溃疡等[2]。
在国外，落地生根广泛分布于非洲、美洲热带以及印度和澳大利亚，作为传统药物用于腹泻、呕吐、镇痛、抗炎、抗病原微生物、利什曼病及抗变态反应等[3]。
本实验就落地生根对H22肝癌小鼠免疫功能影响做研究，尝试对落地生根水提物抗肿瘤的作用进行初步探讨。
1.资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1细胞株及动物小鼠H22肝癌细胞由广西医科大学药理学教研室提供，经本实验室传代保存。
昆明种小鼠60只，体质量18～22g，雌雄不拘，由广西医科大学实验动物中心提供。
试验动物使用许可证 SCXK2009-0002。
1.1.2药品与试剂落地生根采取于广西来宾市忻城县，经河池学院化学与生物工程学院邓晰朝副教授鉴定为鉴定景天科(Crassulaceae)落地生根属(BryophllurnSalisb)植物落地生根Bryophyllum pinnatum (L.f.) Oken。
氟尿嘧啶注射液（5-FU），天津金耀药业有限公司，批号1504261。
一得阁墨汁购于一得阁墨业有限责任公司。
1.2 仪器
多功能提取浓缩机组(上海顺仪实验设备有限公司)；分析天平(日本岛津公司)；DRAGON LAB移液器(20～200μL)( 大龙兴创实验仪器（北京）有限公司)；酶标仪（美国伯乐BIO-RAD公司）。
1.3 药材提取
取6100g落地生根干药材，加10倍量蒸馏水，回流提取3次，每次1小时，过滤，合并3次滤液，浓缩成浸膏，浸膏量为1246.8g，置于4℃冰箱，待用。
1.4 造模、分组及给药
取冻存的H22肝癌细胞，复苏为0.9%氯NaCL溶液混悬，小鼠腹腔注射，连续传两代。
无菌条件下取H22肝癌小鼠腹水，稀释成含量为1×107?mL-1的细胞悬液后于小鼠右侧腋窝皮下接种，小鼠接种肿瘤细胞悬液后称体重，随机分为空白组、阳性组（5-FU）、模型组、水提物低剂量组（4g?kg-1生药量）、中剂量组（8g?kg-1生药量）及高剂量组（16g?kg-1生药量）共6组，每组10只。
空白组为正常小组，阳性组按20mg?kg-1给予5-FU腹腔注射，模型组、空白组灌服等体积生理盐水。
各组均于接种后24小时开始给药，每天1次，连续15天。
1.5 小鼠碳廓清实验
末次给药24小时后,尾静脉注射以生理盐水稀释4倍的印度墨汁,每10g体质量注射0.1mL，墨汁注入后立即计时，于注入墨汁后第2（t1）、10min（t2），分别从内眦静脉丛取血20μL，加入到2mL 0.1% Na2CO3溶液中，摇匀。
以0.1% Na2CO3溶液作空白对照，用酶标仪在600nm波长处比色测定光密度值（OD）。
将小鼠处死，取肝、脾，称质量，计算吞噬指数（a)。
吞噬指数计算方法：K=（lgOD1-lgOD2)/(t2-t1).吞噬指数（a)=体质量×K1/3（肝质量+脾质量）。
1.6 瘤重、胸腺指数、脾脏指数、肝脏指数的测定
分别称取小鼠体重，脱颈椎处死小鼠，剥离肿瘤组织，取小鼠脾脏、胸腺和肝脏，精密称定，计算抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数和肝脏指数：肿瘤抑制率（%）={1-（平均实验组瘤重/平均对照组瘤重）}×100%；胸腺指数=胸腺质量/体重；脾脏指数=脾脏质量/体重；肝脏指数=肝脏质量/体重。
1.7 统计学处理
采用SPSS22.0统计软件进行数据分析，所有数据均以-x±s表示，两组间差异比较采用t检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。
2.结果
2.1 抑瘤作用
研究结果显示，与模型组比较，落地生根水提物中、高剂量组可明显抑制小鼠H22实体瘤生长（P＜0.05)，抑瘤率分别为65.68%和74.56%，与5－氟尿嘧啶作用相当，见表1。
表1 落地生根水提物对小鼠瘤重及免疫脏器指数的影响。