轻链light chain，L，重链heavy chain , H， 可变区variable region , V，恒定区constant region , C
决定簇互补区（complementarity-determining region,CDR），骨架区framework region，糖基化 位点CHO，补体结合位点
3.2 第二代抗体
单克隆抗体（monoclonal antibody），是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特 定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗 体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖
能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。
抗体融合蛋白，将抗体与其他效应蛋白基因融合，构建融合表达 载体，然后再合适的表达系统生产的融合蛋白。
种类： 重组免疫毒素 抗体-酶 抗体-细胞因子 抗体-超抗原 免疫粘连素
抗体分子 效应蛋白
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3.3.2 基因工程抗体抗体-双特异性抗体
双特异性抗体的应用: 免疫诊断 肿瘤放射显影 肿瘤药物杀伤 肿瘤的免疫杀伤
3.3.3 基因工程抗体抗体-抗体偶联物
抗体偶联物，为提高药物作用的特异性，将抗体与“弹头”药物偶联在一起。
3.3.3 基因工程抗体抗体-抗体偶联物
3.3.4 基因工程抗体抗体-抗体融合蛋白
3.3.2 基因工程抗体抗体-小分子抗体
小分子抗体，分质量较小的具有抗原结合功能的分子片段。
种类： Fab抗体 Fab fragment Fv片段 Fv fragment 单链抗体single chain Variable fragment ,ScFv
3.3.2 基因工程抗体抗体-小分子抗体
小分子抗体特点： 1）可原核表达，制备简单，成本低 2）分质量小，易于穿透组织屏障，进入病灶部位， 3）不与Fc受体结合,更能集中到靶部位 4）体内半衰期短，利于体内毒性物质的清除和降 低放射免疫显像的本底。 5）可与多种药物及放射性同位素偶联 6）免疫原性低
2.抗体结构
抗体与抗原表位结合高变区（HVR）示意 图（G表示相对保守的甘氨酸）
3.抗体种类
3.1 第一代抗体 多克隆抗体（polyclonal Ab） 3.2 第二代抗体 单克隆抗体（monoclonal Ab） 3.3 第三代抗体 基因工程抗体抗体（genentic engineering Ab)
PCR
VH
VL
酶切、克隆
表达载体
ScFv的构建
3.3.2 小分子抗体- Fv片段
Fv片段，由 VH和VL组 成 ， 是 抗 体 的 抗 原 结 合部位，分子量只有 完整分子1/6。
特点，与ScFv相同。
3.3.2 基因工程抗体抗体-双特异性抗体
双特异性抗体，是含有 2 种特异性抗原结合位点的人工抗体。
3.3 第三代抗体-基因工程抗体抗体
基因工程抗体抗体种类：
嵌合抗体 chimeric Ab 小分子抗体 mini molecular Ab 双特异性抗体bispecific Ab 抗体偶联物Ab conjugate 抗体融合蛋白Ab fusion protein
3.3.1 基因工程抗体抗体-嵌合抗体
3.1 第一代抗体
多克隆抗体（polyclonal antibody）,
当将抗原注射入实验动物体内时，一系列抗 体生成细胞会不同程度的与抗原结合，受抗 原刺激后在血液中产生不同类型的抗体，这 种由一种抗原刺激产生的抗体称为多克隆抗 体。
3.1 第一代抗体
优点：来源广泛，制备容易 缺点 ：特异性不高，容易发生交叉反应，不宜大量制备 应用：疾病的被动免疫治疗，实验室免疫学实验
3.3.2 小分子抗体- Fab抗体
Fab 抗体分子的制备
P VH CH1
P
VL CL
免疫球蛋白 基因载体的构建
H链表达载体
L链表达载体
抗 体 纯 化
VH
VL
共转染细胞
CH1 -S-S- CL
抗体分泌细胞
Fab 抗体分子
3.3.2 小分子抗体- ScFv抗体
ScFv抗体 ，由抗体轻、重链可变区基因拼接后表达形成的重组蛋白，分子量只有完整分子1/6。 特点，是具有完整抗原结合部位的最小片段，能微生物发酵生产，对实体瘤穿透力强，是用作 生物“导弹‘理想的材料，用它研制双功能抗体、催化抗体、免疫毒素、抗体融合蛋白具有广 泛的应用前景。
嵌合抗体（ chimeric atibody ），是利 用DNA重组技术，将异源单抗的轻、重链 可变区基因插入含有人抗体恒定区的表达 载体中，转化哺乳动物细胞表达出嵌合抗 体，这样表达的抗体分子中轻重链的V区 是异源的，而C区是人源的，这样整个抗 体分子的近2/3部分都是人源的。
特点：其具有鼠源抗体结合抗原 的特异性和亲和力，同时降低了 鼠源抗体对人体的免疫原性。
抗体类型及特点
1.抗体
抗体(antybody,Ab)，具有抗体活性的血清蛋白称为免疫球蛋白，是由机体的 B淋巴细胞在抗原的刺激下分化、分裂而成的一组特殊球蛋白。
类型： 免疫球蛋白G（IgG） 免疫球蛋白M（IgM） 免疫球蛋白A（IgA） 免疫球蛋白D（IgD） 免疫球蛋白E（IgE）
2.抗体结构
特点：一个位点可与靶细胞表面抗原结 合， 另一个位点则可与载荷物如毒素、 酶、细胞因子、放射毒素等耦合，能在 靶细胞和功能分子（细胞）之间架起桥 梁，激发具有导向性的免疫反应。
3.3.2 基因工程抗体抗体构
3.3.2 基因工程抗体抗体-双特异性抗体
双特异性抗体代表类型及结构
3.3.2 小分子抗体- ScFv抗体
ScFv抗体基因的构建一般采用从杂交瘤细 胞提取mRNA，反转录成cDNA，通过PCR 扩增其VL及VH基因，再用人工合成的寡核 苷酸序列即接头把VL的C端与VH的N端或 VH的C端与VL的N端连接，即成单链抗体 基因。
VH
VH引物
VL
接头DNA
变性、复性
VL引物
3.3.2 基因工程抗体抗体-小分子抗体
小分子抗体的制备： 酶消化法 细菌表达（常用） 酵母表达 哺乳动物细胞表达 昆虫细胞表达 植物细胞表达
3.3.2 小分子抗体- Fab抗体
Fab抗体 ，由一条完整的轻链和重链 Fd 段通过一个链间二硫键连接组成一个异二聚体。 特点：保持了天然抗体Fv片段，结构稳定，出现最早，研究彻底。多用于抗体偶联物。
3.2 第二代抗体
优点：纯度高、特异性强、效价高、少或无血清交叉反应 缺点 ：作为药物可导致人抗鼠（兔）抗体反应 应用：疾病诊断，被动免疫，生物导向药
3.3 第三代抗体-基因工程抗体抗体
基因工程抗体（genetic engineering antibody）， 将制备 单抗的细胞工程技术与生产重组分 子的基因工程技术和蛋白质工程技 术结合起来，对编码抗体的基因按 不同需要进行加工改造和重新组装， 转染适当的受体细胞后表达出抗体 分子，这种经基因重组的抗体称为 基因工程抗体。