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!"H5IJ 由本所提供。多药耐
药 细 胞 株 GH5IJ K L<: 由 本 所 自 美 国 纽 约 >%3/’5E$66$.&’- 癌症研究所引进冻存。 GH5IJ 细胞用 含 !JZ 小牛血清，链 :89P5!IQJ （ =&C#3）培养基 （ 霉素及青霉素各 !JJ + K B%）于 "R[ 、 TZ <\D 培养 箱中培养。 GH5IJ K L<: 培养条件与 GH5IJ 相同， 仅 培 养 基 中 另 加 !"- K B% L<:， GH5IJ 及 GH5IJ K L<: 细胞每 " 天换药一次。 GH5IJ K L<: 于实验前 脱药培养 Q 代。所有实验均取指数生长期细胞进 行。 !" # 主要试剂 藻红蛋白 （ 8]） 标 记 85-2 单 克 隆 抗 体 ^P<D （ ， 阴 P-=D/， PBB+’36$#*） 8] 标记 P-=D/ （ PBB+’36$#*） （ 性对照。鼠抗人 9:8 多克隆抗体 <%3’$ _<:H5!， ， 鼠 抗 人 H:8 K 9L8 ‘a9]NF HM;\:M?\:P]>Pb>） （ 单 克 隆 抗 体 <%3’$ MC5D !J"D ， b]\ 9M:c]:> ， 鼠 抗 人 ;<:8 单 克 隆 抗 体 （ ]d85"Q， Pb<） ， 兔抗人 =>?5! 多克隆抗体（ 北京中山生物 >Mb;P\） 技术有限公司 ） 。鼠抗人 C#%5D 单克隆抗体 （ <%3’$ ， 鼠抗人 C/1 单克隆抗体 （ S"5S;， PBB+’36$#*） <%3’$ ） （ ，鼠抗人 ， 单克隆抗体 QO!! PBB+’36$#* C/, 8bP9 ， 羊 抗 人 C#%51 多 克 隆 抗 体 "TDI， PBB+’36$#*） （ 。此外， 固定打孔试剂盒、 TTI"I，;N 公司） OP?< 标 记羊抗鼠 P-=、 OP?< 标记羊抗兔 P-= 的阴性对照均 购于 PBB+’36$#* 公司。
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SDT R7:=%UV! ，8W X76:%;<:=$ $ ，RWQ RV0%57:=! ，SDT K7:=%Y7:=" ， L4ZL K07%9V" ，GD4Z 87" ，SDQZL X7:%Y7! !" #$%&’()$*( +, -$)&(+.+/01 23$ 45’6( 7,,5.5&($8 -+6%5(&. +, 9++:3+; <*5=$’65(01 >5&*/6? @*6(5(?($ +, -$)&(+.+/01 9?A3+? B!CDDE1 F" G" H35*& B" #$%&’()$*( +, -$)&(+.+/01 23$ 45’6( 7,,5.5&($8 -+6%5(&. +, I&*J5*/ K$85:&. <*5=$’65(01 I&*J5*/ B!DDBL1 F" G" H35*& M" N$0 O&P+’&(+’0 +, 9++:3+; <*5=$’65(01 9?A3+? B!CDDQ1 F" G" H35*&
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结
果
&’()* 和 &’()* + ,-. 细 胞 /(01、 2./、 85-2 在 GH5IJ K L<: 细 胞 中 的 :OP 明 显 高 于
’./、 3-./ 和 456(! 的表达 是 GH5IJ 细胞的 !SF ID 倍。 GH5IJ 细胞， 9:8、 ;<:8 和 =>?5! 也有不同程度的增高， 分别是 GH5IJ 细胞 的 !F !U、 !F TJ 和 !F "D 倍。H:8 在两者之间无差异， 见表 !。
朱兴虎， 等 F GH5IJ K L<: 多药耐药细胞株耐药机制的研究
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细胞单抗标记 含 !Z 叠氮钠） 收集细胞， 洗涤 " 次， 取适量 8;>（
细胞，加 P’6$./2.$2 .$/-$’6 #!JJ "%( 固定 !T B&’ 后 8;> 洗涤，加 P’6$./2.$2 .$/-$’6 $ !JJ "%，!J B&’ 后 8;> 调整细胞浓度，将细胞以每管 T e !JT 个分至试 管中， 然后分别加入 9:8、 H:8、 =>?5!、 C#%5D、 C#%51、 避光室温下孵育 DJ B&’， 加 C/1、 C/, 抗体， 8;> 洗涤， 加入 JF T 入相应的 OP?< 标记的二抗， !T B&’ 后洗涤， 待上机检测。 ;<:8 单抗的细胞标记过程除固 B% 8;>， 定打孔剂改为含 IJZ 丙酮的柠檬酸缓冲液 （ 2GTF Q） 外， 基本同上， 所有待测试管均设有相应的对照管。 85-2 单抗细胞标记： D 管各取 D e !JT 个细胞， 分别加入 8] 标记的 85-2 和 8] 标记的 P-=D/ 孵育 加 JF T B% 8;> 液， 待上机检测。 DJ B&’， 8;> 洗涤， !" % 流式细胞术 应用 ]8P<>5dH 型流式细胞仪 7 ;$#EB/’5<3+%6$.， 采用 Ha>a>$ 软件分析和处理 T JJJ 个细胞， ^>M @ ， 表示， 分析结果用相对荧光强度 （ :OP） :OP f 测试管 平均荧光强度 K 对照管平均荧光强度。所有实验均 取其均值。 重复 D 次，