稳定/耐药细胞株构建
一、 服务介绍
稳定表达细胞株（稳转细胞株）指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。稳
转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上，使细胞长期稳定表达该基因。本公司
可提供普通脂质体转染后单克隆法筛选,以及病毒感染后筛选稳定株和耐药株
二、 技术原理
稳定表达细胞株（稳转细胞株）指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表
达。稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上，使细胞长期稳定表达该基
因。用转染质粒或病毒侵染的方法将构建好的含靶基因的载体导入细胞，根据不同的
基因载体中所含的抗性标志选用相应的药物进行筛选混合阳性克隆。在阳性混合克隆
的基础上，得到单细胞长出的阳性单克隆，继而得到稳定转染细胞株。常用的真核表
达载体的抗性标志物有嘌呤霉素（puromycin）、潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin）
三、 操作流程
1、 载体构建：将外源基因构建到合适的载体上，如需病毒转染，则包装病毒。
2、 筛选浓度测定：以 14 天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度。
3、 细胞接种：转染实验前天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和
细胞形状而定
4、 细胞转染：用构建好的载体（或包装好的病毒）转染目的细胞。
5、 抗生素筛选。
6、 鉴定筛选结果
四、客户提供
1. 外源基因及相关基础数据；
2. 生长状态良好的靶细胞系,特殊细胞需提供培养基
3. 与该技术相关其它信息
五、实验结果提供形式
1、 构建完成的稳定/耐药细胞株以及对照细胞株
2、 稳转/耐药细胞株标准实验报告及相关的外源基因表达分析结果
3、 实验流程及报告电子版本一份
六、实验服务周期
约5-8周左右，具体时间根据细胞生长,药物诱导情况而定。
七、质量承诺及舜百优势
a. 稳 定：舜百生物保证20代以内稳定转染细胞稳定表达。
b. 迅 速：一般控制在1.5个月以内完成构建。
c. 经 济：价格实惠，性价比高。
d. 质量保证：对外源基因进行严格鉴定。