? 也有例外，我们在实际工作中检出过耐 optochin 的肺炎链球菌，并发现大多数的缓症链球菌和部 分口腔链球菌对 optochin 的抑菌环直径 >=14mm 。应注意鉴别。
? 但大多数肺炎链球菌对苯唑西林（ Oxacillin,OX ）是敏感的 (除外PRP)，而缓症链球菌和口腔链 球菌对OX耐药。这可作为 辅助鉴别点。
? 肺炎链球菌
+
+—
—
—
—
——
? 牛链球菌
— —+
—
—
—
—
D
? 无乳链球菌
— ——
d
—
—
+
B
? 草绿色链球菌 —
——
—
—
—
——
? 营养变异链球菌 —
——
—
+
+
——
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? *d.不同菌株
三、肺炎链球菌的药敏试验
? K-B 法：采用Mueller-Hinton 琼脂＋ 5％羊血 培养基。直接菌落悬液法 (0.5 麦氏单位菌液 ，在15分钟内接种完 )作为接种液。
细菌学检验不仅对疾病的病原学诊断有重要
价值，同时对临床治疗的药物选择也具有十 分重要意义。
一、生物学性状
1. 形态与染色
? 肺炎链球菌革兰染色呈阳性。球形或矛头状 ，成双排列，少呈链状。在组织中可形成荚 膜（人工培养荚膜逐渐消失），无鞭毛及芽 孢。
2. 培养特点
?（1） 培养基
? 肺炎链球菌对营养要求较高，需采用质 量好的哥伦比亚血液平板 （ 5％马血或 羊血） 。
1. 溶血性检查
? 肺炎链球菌在厌氧或二氧化碳环境中溶血能力大大 加强，草绿色溶血环很大 ，可与其他草绿色链球菌 相区别。
2. Optochin(OP，奥普托欣)敏感试验
该药对肺炎链球菌的作用机制是干 扰其叶酸的合成。
optochin敏感试验方法是药敏试验。 挑取被检菌，密涂于血平板上，贴上含 5大μ气g中/片（的或op烛to缸ch）in，纸3片5℃，孵置育5~过10夜%。CO抑2菌的 环直径>=14mm为敏感，推断为肺炎链球 菌。抑菌环直径<14mm时参照胆汁溶菌试 验。肺炎链球菌的抑制圈直径常在20mm 以上，甲型溶血性链球菌（约98%）小于 12mm。
3） 培养环境 5～10％CO2、35℃培养24～48h
。
（3）肺炎链球菌的菌落形态
? 在营养丰富的培养基上，肺炎链球菌形 成扁平、中间有凹陷的典型菌落，少数 菌可呈粘液型菌落。
3.抗原结构
（1）种属特异性抗原： 为菌体多糖抗原，存在于肺 炎链球菌的细胞壁。
（2）型特异性抗原： 是存在于肺炎链球菌荚膜中的 一种多糖多聚体，可溶于水，据此抗原可将肺炎链 球菌分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ……等个型，其中 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 型致病性最强。
（1）试管法:
取新鲜培养物分装于两支试管内（每支 1ml），其中一支加入 10%的去氧胆酸钠 溶液 0.1ml 或纯牛胆汁 0.2ml ，另一支加入无菌盐水 两滴（对照）， 15min后，阳性者细菌被溶解 ，试管内液体呈透明状，阴性者无变化。
（2）平皿法:
加一滴10% 的去氧胆酸钠 溶液或纯牛胆 汁于被检菌菌苔上， 15min后，阳性者细菌菌 苔被溶解，阴性者无变化。试验应有已知肺炎 链球菌作阳性对照。
（2）分离培养
1）标本处理
及时 将采集标本接种到适当的培养基 上是提高分离率的前提。因为，肺炎链球菌 对干燥、对寒冷的抵抗力均较弱，在标本离 开机体暴露于外界复杂的环境中，其存活率 十分低，不及时接种适当培养基是导致 分离 率低的主要原因。
2）选择性分离培养基
? 培养基中添加 5μg/ml庆大霉素有利于肺炎链 球菌的分离。
4.乳胶凝集试验
结果准确、快速、特异性高。
5. 荚膜肿胀试验
?
取一滴抗血清与一滴菌悬液混匀，加少量美蓝
液混合后加盖片，室温 10~20min 后，用油镜检查，
如查到菌体呈兰色，周围绕有界限明显未染色的膨
大空白圈为阳性。可用于肺炎链球菌的分型。
6. 凝集试验
?
包括血清凝集试验、 SPA（葡萄球菌蛋白 A）
协同凝集试验、反向乳胶凝集试验等方法。
表1 非β溶血链球菌的鉴别
? ————————————————————————————————————
? 菌种
Optochin 胆汁 胆 汁 6.5%NaCl 吡咯烷 卫星现象 CAMP 血清群
?
敏 感 溶菌 七叶苷 肉汤 酮 酶
? ————————————————————————————————————
（3）菌体核蛋白抗原： 存在于菌体深部，为蛋白质 ，无特异性。
二、肺炎链球菌鉴定
? 肺炎链球菌的鉴定，主要应与 甲型溶血性链 球菌鉴别。其中以 胆汁溶菌 试验、 菊糖发酵 和optochin 试验最为常用。必要时可作 荚膜 肿胀 试验或小鼠毒力试验加以鉴别。在上述 试验中，肺炎链球菌均应阳性，而甲型溶血 性链球菌为阴性。也可用特异性单克隆乳胶 或自动化仪器等相应鉴定卡作鉴定。
肺炎链球菌鉴定要点
? 革 兰 阳 性 双 球 菌， 矛 头 状， 不 呈 链 ；
? 血 平 皿 菌 落 呈 草 绿 溶 血， 湿 润， 菌 落 表 面 无 小 白 点；
? 培 养 时 间 长 出 现 脐 窝 状； ? 胆汁溶解试验 阳性； ? 荚膜肿胀试验阳性； ? 乳 胶 单 克 隆 抗 体 凝 集 阳 性。
肺炎链球菌的分离和鉴定
概述
肺炎链球菌（S.pneumoniae），俗 称肺炎球菌（pneumococcus）。经常寄 居于正常人的鼻咽腔中，一般不致病，只 形成带菌状态。当机体免疫力下降时才致 病。尤其在呼吸道病毒感染后或婴幼儿、 老年体弱者易发生肺炎链球菌性肺部感染 。
肺炎链球菌不产生外毒素，主要靠荚膜 侵袭力致病。肺炎链球菌主要引起人类大叶 性肺炎，肺炎后可继发胸膜炎、脓胸，也可 引起中耳炎、乳突炎、副鼻窦炎、支气管炎 、心内膜炎、腹膜炎、关节炎、脑膜炎和败 血症等。
3. 胆汁溶菌试验
自溶酶 是一种 L-丙氨酸 --N- 乙酰胞壁酰胺 酶，能切断肽聚糖上 L-丙氨酸与N-乙酰胞壁酸 间的连接键，从而破坏细胞壁，使菌溶解。
自溶酶在菌生长的稳定期 被激活，也可被 胆汁或胆盐等活性物质激活，从而促进培养物 中的菌体溶解。肺炎链球菌胆汁溶菌试验为阳 性，甲型溶血性链球菌的胆汁溶菌试验为阴性 。