高效液相法测定茹达-7中栀子苷的含量发表时间：2012-03-06T10:20:51.027Z 来源：《中外健康文摘》2011年第46期供稿 作者： 张德瑞[导读] 茹达-7为内蒙古自治区蒙古族常用制剂其处方为木香、栀子、山楂、石榴皮、瞿麦、砂仁、荜茇等七味药组成。
张德瑞（赤峰市药品检验所 024000） 【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）46-0031-03 【摘要】目的 采用高效液相法测定茹达-7中栀子苷的含量。方法 以迪马-C18（250mm 4.6mm,5µm）色谱柱，流动相以乙腈-水（11：89）流速为1.0ml·min-1，检测波长238nm。结果 线性范围为0.150μg～1.800μg，r=0.9999，平均回收率为101.5%，RSD为0.61%。结论 该方法便捷、灵敏、准确、重复性好，可以控制该药的质量。 【关键词】高效液相法 茹达-7 含量Determination of Geniposide in Ruda-7 Powder Tincture by HPLC Zhang De rui( Chifeng Institute for Drun Control, Chifeng 024000) 【Abstract】 Objective:A HPLC method for the determination of Geniposide in Ruda-7 Powder.Method: Dikma -C18 （250mm4.6mm,5µm）column was used with acetonitrile–water (11:89) as the mobile phase. The flow rate was 1.0ml·min-1.The content wasdetected at wavelen of 238nm. Results: The calibration curve was linear in the range of 0.150μg～1.800μg， r=0.9999.The averagerecovery rate was 101.5% RSD was 0.61%.Conclusion:The method is accurate and reliable,suitable for bullatine A in Aconitumbrachypodum Diels 【Key Words】 HPLC Qimide-serensile Powder determination Ruda-7
前言 茹达-7为内蒙古自治区蒙古族常用制剂其处方为木香、栀子、山楂、石榴皮、瞿麦、砂仁、荜茇等七味药组成,主要有效成分为栀子苷等环烯醚萜类化合物。为了更好地控制药品质量,国家药监局决定制定《蒙药标准》,为此参照《中国药典》一部“栀子金花丸”项下含量测定以及有关论文对该药建立方法学研究。 1 仪器与试药 (1)仪器 LC10-ATVP型泵,SCL-10AVP型控制器,SPD-10AVP型检测器,SLASS-VP色谱工作站。Shimadzu UV-2450型紫外-可见分光光度仪。HR-200型万分之一天平。Presia型十万分之一天平。
(2)试剂与试药:栀子苷对照品(C17H24O10)（批号：110749-200714）(供含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂为分析纯。 (3)供试品：由内蒙古巴林右旗蒙医院提供。 阴性供试品及模拟样品：由赤峰市药品检验所制备。 2 方法与结果 2.1色谱分析条件 (1)色谱柱: 色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，本实验研究采用Dikma Technologies 迪玛公司-色谱配件专家[Diamonsil (钻石)C18 250×4.6mm,5μ]色谱柱。 (2) 流动相的选择：参照《中国药典》2005年版一部“栀子金花丸”含量测定项下栀子苷的测定方法，以乙腈-水（11：89）为流动相进行色谱条件摸索。结果供试品色谱中的栀子苷具有较好的分离度，理论板数较高，并具较适宜的保留时间，故作为检测流动相。 (3) 检测波长的选择:精密称取栀子苷对照品适量，用50%甲醇制成30μg/ml的溶液，在200nm～400nm波长范围扫描,结果栀子苷在238nm处有最大吸收，结合《中国药典》2005年版一部“栀子金花丸” 含量测定项下栀子苷的测定方法,选用238nm作为检测波长。 2.2含量测定
对照品溶液的制备 取栀子苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取约1.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率300W，频率50kHz)20分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置25ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 2.3 专属性考察
阴性对照试验：按正文【含量测定】项下的方法制备供试品溶液和对照品溶液。另取按处方比例并以相同工艺制备的缺栀子的阴性对照，按供试品溶液制备法制得阴性对照溶液。在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、阴性对照溶液、供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，测得结果为：阴性对照色谱图中在与栀子苷对照品以及供试品色谱相应的保留时间处无色谱峰出现，表明成方制剂中其它组分对栀子苷的测定无干扰。见图
对照HPLC图谱 （横座标为分钟 纵座标为mv） Chromatogram of the reference substance
供试HPLC图谱（横座标为分钟 纵座标为mv） Sample chromatogram
阴性HPLC图谱（横座标为分钟 纵座标为mv） Negative control of the chromatogram 2.4 线性关系考察：精密称取栀子苷对照品15.0mg（批号：110749-200714），置100ml量瓶中，加50%甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀,精密吸取0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，各取20μl进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对进样量进行回归分析，结果栀子苷在0.150μg～1.800μg范围内呈良好的线性关系。回归方程为Y=1437041X＋24884，r=0.9999，标准曲线数值见表-1
表-1 标准曲线数值表 Tab-1 Standard curve of the numerical table
2.5 稳定性
溶液稳定性试验：取同一份供试品溶液(供试品批号：090514)，分别于0h、4h、8h、16h、24h进行了测定，RSD（%）=0.45，栀子苷在24小时内的峰面积积分值基本稳定不变。
2.6 精密度
重复性试验：取同一批号供试品（批号：090514）细粉6份，各约1.1g，精密称定，分别按含量测定项下方法操作，测定每份供试品含量，结果含量重复性试验栀子苷RSD（%）=0.61。
2.7 准确度
加样回收试验：精密称取栀子苷51.2mg（批号：110749-200714）置100ml量瓶中，加50%甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，备用。然后取同一批号的供试品（批号：090514，）9份，各约0.55g，精密称定，分别置9个锥形瓶中，其中3个锥形瓶中精密加入上述对照品溶液3.8ml；另3个锥形瓶中精密加入上述对照品溶液7.6ml；其余3个锥形瓶中精密加入上述对照品溶液11.4ml。再按【含量测定】项下的方法，精密加水-甲醇（50：50）至50ml，同法操作，测定每份供试品的含量，计算回收率，结果见表-2。
表-2 栀子苷加样回收试验结果 Tab-2 Results of recovery test(n=9)
2.8 含量测定
取模拟样品及样品，按质量标准【含量测定】项下的方法处理并测定，结果见表-3。
表-3 样品、模拟样中栀子苷量测定结果(mg/g) Tab-3 Content determination results of samples(mg/g)
从表中三批样品测定的数据可见，模拟样中栀子苷的含量在5.744mg/g，实验中用相同的方法对上述模拟样 生产用栀子药材进行了含量测定，测得栀子苷含量为32.968mg/g，测定结果见表-4。
表-4 栀子药材中栀子苷含量测定结果(mg/g) Tab-4 Content determination results of samples (mg/g)
按理论值折算，成品应含栀子苷=32.968×170.2/1000 =5.611mg/g，转移率=5.744/5.611×100%=102.4%。 3 讨论
茹达-7为蒙古族常用制剂多年来蒙药制剂质量得不到有效控制，本试验通过高效色谱法测定处方栀子中栀子苷的含量本方法灵敏度高，精密度和回收率好，完全能够满足该品种质量标准的要求，为控制质量提供了可靠的定量方法依据。参 考 文 献 [1] 国家药典委员会编：《中国药典》2005版一部 化学工业出版社，2005.1. [2] 徐国钧等.《中药材粉末显微鉴别》人民卫生出版社1986. [3] 徐国钧等.《中国药材学》中国医药科技出版社.下册 1996. [4] 《天然药物成分定量分析》北京：中国医药科技出版社 2002.8 孙文基、谢世昌等编. [5] 《中药大辞典》.（第二版）上海：上海科学技术出版社.南京中医药大学.编著. [6] 《国家中成药标准汇编》内科.肾系分册.