CH2OH O
CH2OH O
CH2OH O
CH2OH直链淀粉
O
O OH
O OH O OH
O OH O
OH
OH
OH
OH
11
纤维素
12
多糖的理化性质
旋光性 硫酸蒽酮反应（620nm） 硫酸苯酚反应(490nm) 氨基己糖——乙酰丙酮(525nm) 糖醛酸——硫酸咔唑(520nm)
13
第二节 多糖的纯度测定
生量与剩余的酶量成正比，与肝素效价成反比。 。 405 nm测定。
28
生色底物法
抗Xa因子活性测定
以溶液吸收度和浓度的 对数，照生物检定统计 法中量反应平行线测定 法计算出供试品的抗Xa 因子活性
可 信 限 率 ( FL%) 不 得 大于10%。
29
第五节、多糖类药物的结构分析
单糖组成 糖苷键连接方式 糖苷键连接位置
特点：10-100μg范围 内其颜色的深浅与糖含 量成正比。
灵敏度高。
24
生物测定法－肝素测定
美国药典采用羊血浆法。
即比较肝素标准品和供 试品延长血浆凝结时间 的作用来测定肝素的效 价。
25
生物测定法——肝素测定方法
标准品稀释液的配制:精密量取标准品溶液，按高、中、 低三剂种量浓组度（的稀ds释1 、液d，s相2、邻d两s3浓）度用的0比.9值%为氯1化:0钠.7溶。液配成
Kd = 0， Ve= V0 ； Kd = 1 ， Ve= V0+Vi ； 0＜Kd＜1，Ve=V0+KdVi 。
16
凝胶色谱法
方法：
Sephadex G-200，多糖标准品
分部收集，硫酸-苯酚检测，分别求得洗 脱体积Ve， Ve与 1gM之间存在着线性关
系，绘制标准曲线。
Ve=-KlogM+C
标准曲线：
标准曲线：LogMW = a+b tR
MW为重均分子量，tR为保留时间
待测多糖分子量（GPC专用软件）：
重均分子量 Mw=∑(RIiMi)/∑ RIi
Mi为供试品在保留时间ti 时的分子量，RIi在第i部分中
被洗脱物质的量（重量）。
19
第四节、多糖的含量测定
比色法（硫酸咔唑法、乙酰丙酮法、 硫酸苯酚法、蒽酮法）
30
（一）多糖组成单糖的分析
当蛋白酶（FⅩa）从生色底物分裂出pNA时，发色 物的产生量与剩余的酶量成正比，与肝素效价成反比。 405 nm测定。
27
生色底物
Bz：苯甲酰，Pip：哌啶酰， Tos：甲苯磺酰； 对-硝基苯胺（pNA）。
酰胺分解法（amidolytic method）。 当蛋白酶从生色底物分裂出pNA时，发色物的产
在浓硫酸中，己糖醛酸与咔 唑溶液反应生成的反应物呈 红色。
520nm比色
22
硫酸苯酚法测定糖含量（总糖）
原理：多糖在浓硫酸作 用下水解成单糖，该单 糖在强酸性条件下，与 苯酚反应生成橙色衍生 物。
它在490nm处有最大吸 收，其吸光度与浓度呈 线性关系。
23
蒽酮法测定糖含量（总糖）
原理：多糖在浓硫酸中 水解后，进一步脱水生 产糠醛类衍生物，与蒽 酮作用形成蓝色化合物， 620nm进行比色测定。
组成分类：
均一多糖 不均一多糖:不同类型的单糖缩合而成 粘多糖：含氮的不均一多糖 结合糖：肽聚糖、糖蛋白(glycoproteins)和蛋
白聚糖
糖蛋白通过糖肽键(carbohydrate-peptide linkage) 将糖链和肽链两部分连接起来,连接方式主要分
为β-构型的N-糖苷键和α-构型的O-糖苷键.
生物测定法（肝素钠） 生色底物法（低分子量肝素钠）
20
乙酰丙酮法（elson-morgan）
——氨基己糖
原理： 氨基己糖在碱性条件下
加热，可与乙酰丙酮缩 合成吡咯衍生物，该衍 生物与对－二甲氨基苯 甲醛反应，反应物呈红 色，于525nm测定吸 收度。
21
硫酸咔唑法测糖含量
硫酸咔唑法—己糖醛酸测定
（一）超离心法 （二）电泳法 （三）凝胶色谱法 （四）旋光法
14
பைடு நூலகம்
第三节 多糖的分子量测定
凝胶色谱法 粘度法 超离心法 高效液相色谱
15
凝胶层析法
凝胶层析法：将分子量不同 的蛋白质通过一定孔径的凝 胶固定相，由于各组分流经 体积的差异，使不同分子量 的组分得以分离。
最先淋出的是最大的分子。
将待测样品上柱，待测多糖Ve。
通过标准曲线求出待测多糖分子量。
17
粘度法、超离心法
粘度法：用已知结构相似的多糖决定K值 （ η ＝ K M2），然后测出待测多糖的特 性粘数η ，计算待测多糖的分子量。
超离心法：根据测得的沉降系数计算多糖 的平均分子量。
18
高效液相色谱法测定分子量及分布
色谱条件： 凝胶柱（分子量大小），示差折光检测器。
供试品稀释液的配制：按供试品的标示量或估计效价 （低（AT）dT，1 、照d标T2准、品d溶T3 液）与三稀种释浓液度的的稀配释制液法。配成高、中、
各管凝结时间换算成对数，照生物检定统计法中的量反 应平行线测定法计算效价及实验误差。
可信限率（FL%）不得大于5%。
26
生色底物法原理－肝素、低分子肝素
3
糖蛋白有三种主要类型
糖蛋白分为三种主要类型：O-糖苷键型糖蛋白、N-糖
苷键型糖蛋白和连有磷脂酰肌醇-聚糖的糖蛋白。
在大多数的O-糖苷键型糖蛋白中，GalNAc残基通过O-
糖苷键与一个丝氨酸或苏氨酸残基连接形成，缩写为 GalNAc-Ser/Thr。
在N-糖苷键型糖蛋白中，GlcNAc残基通过N-糖苷键与
7
多糖组成-单糖
吡喃
呋喃
六员环糖类似于吡喃，所以又称之为吡喃糖，而五员环糖
类似于呋喃，称之为呋喃糖。
环化单糖中氧化数最高的碳称为异头碳。在环式结构 中，异头碳是手性碳，所以环化的醛糖或酮糖可以呈现两 种异头构型中的一种，即-或-构型。
8
葡萄糖环状结构
9
椅式构象
β-D-葡萄糖
α-D-葡萄糖
10
直链淀粉是葡萄糖以α-1，4糖苷键结合成的链状化合物
一个天冬酰胺残基相连，缩写为GlcNAc-Asn。
4
O- （N-）糖苷键型糖蛋白
O-糖苷键
N-糖苷键
5
磷酸乙醇胺残基
磷脂酰肌醇-聚糖的糖 蛋白
6
蛋白聚糖
软骨蛋白聚 糖:聚集体的分
子量非常大（大 约为2×108）， 其中含有透明质 酸、硫酸角质素、 硫酸软骨素、连 接蛋白、核心蛋 白和大量的寡糖 链。