３０４　实验动物　比较医学Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ａｎｉｍａｌ　ａｎｄ　Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４—５８１７．２０１２．０４．０１０　

锌对甲基汞染毒大鼠氧化应激损伤的抑制作用　

石勇　，石琦：，宋祥福－，刘航３，阎兆宏　（１．吉林大学公共卫生学院卫生检验教研室，长春１３００２１；２．吉林大学白求恩医学院，长春１３００２１；　３．吉林大学药学院长春１３００２１；４．吉林大学第一医院长春１３００２１）　

［摘要］　目的探讨锌对甲基汞急性染毒大鼠组织及血液各氧化指标的变化。方法　大鼠随机分　为锌＋甲基汞组、甲基汞组和对照组，锌＋甲基汞组大鼠每日腹腔注射不同剂量硫酸锌，剂量分　别为２．８６、５．７２、８．５８、１１．４４　ｍｇ／ｋｇ，第６日甲基汞急性染毒，第７日处死，取大鼠肝、脑、肾　及血液分别测定谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ．Ｐｘ）活性、超氧化物歧化酶（ｓＯＤ）活性。结果随着锌　剂量的增加，大鼠组织和血液中ＧＳＨ．Ｐｘ活性降低，ＧＳＨ—Ｐｘ活性与锌剂量呈显著负相关；随着锌　剂量的增加，大鼠组织和血液中ＳＣＤ活性增强，锌＋ＭｅＨｇ实验组中ＳＣＤ活性与锌剂量呈显著正　相关关系。结论　锌能有效预防甲基汞染毒大鼠的机体损伤。　［关键词】锌；甲基汞；超氧化物歧化酶；谷胱甘肽过氧化物酶；金属硫蛋白　

【中图分类号］Ｑ９５—３３［文献标识码］Ａ　［文章编号】１６７４—５８１７（２０１２）０４—０３０４　０４　

甲基汞（ＭｅＨｇ）是一种引发机体损伤的高毒性物　质，通过与毓基物质结合和过氧化作用引发的机体损　伤有一些报告　，微量元素锌对甲基汞过氧化损伤的　诘抗研究还很少　，奉实验通过微量元素锌对甲基汞　染毒大鼠组织和血．液各种抗氧化酶的改变和对金属　硫蛋　的诱导，观察锌对甲基汞引发毒性的抑制机　制，为甲基永毒性机理的分析和预防提供实验依据。　１材料与方法　１．１实验动物　清洁级雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，体质黾２００±２０　ｇ，　山吉林大学基础医学院提供［ＳＣＸＫ（吉）２００３．０００１］。　１．２动物分组　大鼠随机分为３组，每组７只。锌＋ＭｅＨｇ组：　连续６　ｄ腹腔注射不同剂量硫酸锌生理盐水溶液，　剂旱分别为２．８６、５．７２、８．５８、１　１．４４　ｍｇ／ｋｇ，第　６　Ｕ　ＭｅＨｇ灌胃，ＭｅＨｇ剂量为３０ｍｇ／ｋｇ；甲基汞组：　［收稿１３期］２０１１—１２—２６　［作者简介］　勇（１９６２．），男，讲师，从事环境毒理方面研究。　Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｙｏｎｇ＠ｊｌｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　【通讯作者】术祥福，高级Ｔ程帅，　Ｅ—ｍａｉｌ：ｓｏｎｇｘｉａｎｇｆｕ２００８＠ｙａｈｏｏ．（１１　每日腹腔注射生理盐水，第６　ＬＩ　ＭｅＨｇ灌胃，ＭｅＨｇ　剂量为３０　ｍｇ／　；空白对照组：连续６　ｄ腹腔注射生　理盐水，第６日灌胃生理盐水，剂＝早＝为１０　ｍｌ／ｋｇ。　１．３样品制备和测定　第７　Ｕ将大鼠全部处死，迅速取出部分肝、　脑、肾组织和血液，大鼠组织在４℃、０．１５　ｍｏｌ／Ｌ　ＫＣ１匀浆，用以测定ＧＳＨ—Ｐｘ活性和ＳＯＤ活性。　ＧＳＨ．．Ｐｘ活性采用ＤＴＮＢ比色法ｌ６＿　】测定：ＳＯＤ活性采　用ＳＯＤ试剂盒测定。　１，４仪器和试剂　所有化学试剂均为分析纯。甲基水，德国　Ｍｅｒｃｋ公一ｊ；还原型谷胱什肽，美国Ｓｉｇｍａ公刊；荧　光分光光度计，Ｕ本Ｈｉｔａｃｈ公刊；低温超速离心　及，美国Ｂｅｃｋｍａｎ　Ｌ８一Ｍ：ＳＯＤ试剂盒，上海建成　生物工程研究所。　１．５统计学方法　数据采用样本均数比较的ｔ检验，以ＳＰＳＳ统　计软件进行处理，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。　

２结果　２．１不同剂量锌对ＭｅＨｇ染毒组大鼠各组织及血液　ＧＳＨ．Ｆｘ活性的影响　从表１可知，预先给予　同剂量锌后，在肝、　Ａｕｇ．２０１２．３２（４）　实验动物与比较医学Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ａｎｉｍａｌ　ａｎｄ　Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　３０５　注：与甲基汞染毒组比较，　Ｐ＜０．０５；与对照组比较，　Ｐ＜０．０５；　液中ＧＳＨ—Ｐｘ活性单位为Ｕ／ｍｌ　表２不同剂量锌对甲基汞染毒鼠组织及血液中ＳＯＤ活性的影响　

注：与甲基汞染毒组比较，　Ｐ＜０．０５；与对照组比较，　Ｐ＜Ｏ．０５；血液中ＳＯＤ活性单位为Ｕ／ｍｌ　脑、。肾和血液中，锌＋ＭｅＨｇ实验组ＧＳＨ—Ｐｘ活性　比单独ＭｅＨｇ染毒组降低，可以看出，高剂量组　有显著性差异（Ｐ＜Ｏ．０５），低剂量组没有显著性差异；　单独ＭｅＨｇ染毒组与对照组相比，肝中ＧＳＨ—Ｐｘ活　性降低，有显著性差异（Ｐ＜Ｏ．０５），在脑、。肾和血　液中ＧＳＨ—Ｐｘ活性都有所增加，但无显著性差异；锌　＋ＭｅＨｇ实验组与对照组相比，肝、脑、肾和血液　中ＧＳＨ—Ｐｘ活性逐渐降低，高剂量组有显著性差异　（Ｐ＜０．０５），低剂量组没有显著性差异。锌＋ＭｅＨｇ　实验组中ＧＳＨ—Ｐｘ活性与锌剂量呈显著负相关，在　肝中Ｙ＝９０．５—１．２７Ｘ（ｒ＝一０．９６，Ｐ＜０．０５），在脑中除　２．８６　ｍｇ／ｋｇ剂量组外，其余各组锌剂量与ＧＳＨ—Ｐｘ活　性成显著负相关，Ｙ＝４１．９—０．３３Ｘ（ｒ＝一０．９９，Ｐ＜Ｏ．０５），　在肾中除２．８６　ｍｇ／ｋｇ剂量组外，其余各组锌剂量与　ＧＳＨ．Ｐｘ活性成显著负相关，Ｙ＝７０．６—０．２４Ｘ（ｒ＝一０．９９９，　Ｐ＜０．０５），血中Ｙ＝４３．２１—１．４７Ｘ（ｒ＝一０．９８，Ｐ＜０．０５）。　２．２预先给予不同剂量锌后ＭｅＨｇ染毒大鼠各组织　及血液ＳＯＤ活性变化　预先给予　同剂量锌后，在肝、脑、肾和血　液中，锌＋ＭｅＨｇ实验组ＳＯＤ活性比单独ＭｅＨｇ染　毒组都有提高，除肝中的２．８６　ｍｇ／ｋｇ剂量组外，都　有显著性差异（Ｐ＜０．０５）（表２），单独ＭｅＨｇ染毒组与空　白对照组相比，在肝、脑、肾和血液中ＳＯＤ活性　都显著性提高（Ｐ＜０．０５），锌＋ＭｅＨｇ实验组与空白对　照组（Ｐ＜０．０５）。锌＋ＭｅＨｇ实验组中ＳＯＤ活性与锌　剂量早显著正相关关系，在肝中Ｙ＝２４４９１＋２８８．７Ｘ　（ｒ＝０．９９，Ｐ＜０．０５），在血中Ｙ＝５８９．１＋７．２２Ｘ（ｒ＝０．９７，　Ｐ＜０．０５），在脑和肾中无明显相关关系，但随锌剂　量的增加，ＳＯＤ活性　上丌趋势。　

３讨论　甲基汞引发的机体过氧化损伤已得到很多研究　证实ｆ　８ｌ，关于甲基汞诱发的脂质过氧化机理，目前　有两种观点：一种认为是通过与巯基结合成复合　物，引起与巯基有关的代谢发生紊乱，导致细胞　损伤ｆ９１。另一种认为甲基汞在体内转化过稗中，碳　汞键发生了断裂，产生自由基，自由基攻击靶　细胞造成脂质过氧化，从而引发损伤，而这种损　伤干预体内抗氧化酶系统导致病理改变，前期研究　已证实，通过干预机体氧化酶系统能有效减弱甲基　汞引发的损伤＿９＿。　微量元素锌有拈抗大鼠体内脂质过氧化的作　用，预先给与～定剂量锌后，发现大鼠肝、脑、　３０６　实验动物　比较医学Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ａｎｉｍａｌ　ａｎｄ　Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　肾和血液ＬＰＯ含黾显著降低（Ｐ＜Ｏ．０５），且锌剂量与　ＬＰＯ水平早显著负相关关系，说明锌只有减弱机体　脂质过氧化的作用　Ｉ。　本研究证明，预先给予一定剂晕锌后，再给　大鼠投予甲基汞，发现大鼠体内ＬＰＯ含量显著降　低，超氧化物歧化酶ＳＯＤ活性显著增高，还原型　谷胱　肽ＧＳＨ—Ｐｘ减少，锌剂量与ＬＰＯ含量旱显著　负相关关系，与超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）存在显著正　相关关系，与还原犁谷胱甘肽（ＧＳＨ．Ｐｘ）早负相关关　系，说明锌通过引发大鼠体内抗氧化酶系统的变化　来拈抗甲基求诱发的脂质过氧化损伤。　前期研究已证实，锌具有诱导金属硫蛋白的　作用１１０，Ｉ１１，给与一定剂量锌后，甲基汞染毒组和未　染毒组，都诱发体内金属硫蛋白的明显增高。说　明锌具有提高大鼠体内金属硫蛋白水平的作用。金　属硫蛋白含有大量巯基，通过锌引发金属硫蛋白，　在甲基汞进入体内后，山于金属硫蛋白与汞的结合　能力远远大于锌，金属硫蛋白中的锌被永置换，　故阻Ｉ　了其作用。　锌很可能同时通过上述两种机制拮抗甲基汞诱　发机体损伤。甲基求引发体内脂质过氧化，当预　先给与一定剂嚣锌后，大鼠体内ＬＰＯ含量显著降　低，说明锌确实具有抑制脂质过氧化作用，　随着　锌剂量的增加，ＧＳＨ．Ｐｘ活性反而降低了，这很可　能与生物体自身抗氧化反应的连锁反应有关，由于　ＳＯＤ活性随着锌剂最的增加而升高，从而歧化氧　负离了产生大量Ｈ　Ｏｚ，为分解Ｈ：０ｚ导致ＧＳＨ—Ｐｘ被　消耗。从而说　锌引发了机体过氧化酶系发生互　动。有学者认为ＧＳＨ—Ｐｘ和ＳＯＤ共同调控体内超氧　离予自山基和Ｈｚ０：的水平，因此ＳＯＤ活性的增高，　将导致ＧＳＨ．Ｐｘ活性的降低。至于ＧＳＨ．Ｐｘ和ＳＯＤ　具体关系如何，有待于今后实验进一步研究。　锌＋甲基水组与甲基求相比，低剂量组ＧＳＨ—Ｐｘ　活性并没有显著提高，可能与机体过氧化酶系互动　有关，山于ＳＯＤ的增加，造成有限的ＧＳＨ—Ｐｘ的　损耗，从而导致差＿异性并　显著；对于ＳＯＤ活性而　言，山于甲基；＝ｊ乏的应激化刺激，导致低剂量锌＋　甲基求组与甲基水组ＳＯＤ活性并没有显著性差异，　提示锌埘ＳＯＤ活性的提高除与剂量有关外，也与　刺激周期有关，　锌与甲基水刈‘．ＳＯＤ活性的刺激　相比可能是一个较慢的过程。虽然锌与甲基水相比　对机体过氧化酶系的刺激比较缓慢，但锌剂鼍与　ＧＳＨ．Ｐｘ活性和ＳＯＤ活性的相关性表　，锌能够改　变过氧化酶系的活性。锌剂量的这种作用，有待　于下一步通过慢性实验加以证实。　锌对大鼠机体过氧化酶系和金属硫蛋白同时产　生影响，并通过两种机制产生抑制作用，而两种　机制之『自Ｊ的关系，有待于进一步研究。　实验中低剂最组投予锌剂后，个别剂量关系　不十分明显，可能与锌的诱导剂黾机制有关，正　在做进一步实验。　

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