习题 （1）单克隆抗体是指 化学性质单一，特异性强的抗体 。 （2）制备单克隆抗体的步骤： 抗原 ①将__________ 注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细 胞，其中至少1个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。 ②将步骤①获得的B淋巴细胞与步骤②培养的骨髓瘤细胞 在_________________ 的诱导下融合。 聚乙二醇 选择性 培养基的多孔 ③将诱导后产生的多种细胞，放在_______ 培养板上培养，筛选。 产生专一抗体 ④这样获得的杂交瘤细胞既具有B淋巴细胞_____________ 无限增殖 的能力，又具有________________ 的本领。 ⑤检测和分离带有抗X抗体的阳性细胞，培养板中每孔放 一个细胞进行培养。 ⑥将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克 隆抗体。
有丝 (4)在培养时通过________ 分裂方式大量繁殖。D细 胞体外培养需要注意的条件是（要求答5项） 无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和 pH； __________________________________ 。 适宜的气体环境 （5）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面 特异性强、灵敏度高 ，与常规抗体相比，其特点是_________________ 。
右图为某同学根据杂交瘤技术的方 法，设计的生产破伤风杆菌抗体的 实验方案。据图回答： （1）该方案能达到预期效果吗 ？ 不能 。原因是 _______________________________ 没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生 专一抗体的B淋巴细胞 ____________________________ 。 （2）图中②为________ 细胞融合 过程， 常用 PEG或灭活病毒 作为诱导剂。 该细胞继承了 双亲细胞的遗传物质 ， 因此不仅能分泌 特异性抗体 ，还 有 大量增殖 本领。 制备单克隆抗体 （3）该方案的目的是_________________________ 。
BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤）
（一选） HAT选择培 养基：只有 杂交瘤细胞 才能存活
小鼠腹腔培养 体外培养
√
杂交瘤细胞特点： 既能产生特异性 抗体，又能大量 增殖。
①为什么给小鼠注射特定 的抗原蛋白？ ②通过什么方法诱导细胞 融合？ ③会有几种融合方式？ （只考虑两两融合的情况） ④杂交瘤细胞是如何筛选 出来的？有何特点？ ⑤如何大规模进行培养得 到大量的单克隆抗体？
（3）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种： ①体外培养法，可获得10μg/mL的抗体；②动物体内 诱生法可获得5~20mg/mL的抗体。你选择的方法及原 因是 大量生产选①，小规模生产选② 。
（4）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因 效应B 细胞制备的，其化学本质是 为它是用小鼠的_______ 蛋白质 ，应用于人体，会作为 异物 产 ___________ 生 免疫反应，解决这个问题的方法是 采用人的效应B细胞制备 _____________________________ 。
抗体的传统生产方法
抗原 反复注射动物 该法制备抗体的缺点： 产量低、纯度低，且抗 体的特异性差、灵敏度 低。
从动物的血清中分离抗体
单克隆抗体！
单克隆抗体的概念
读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念
为了解决传统方法制备单克隆抗体的缺点，人们经探究 发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产 生多达百万种以上的特异性抗体，但是每一个B细胞只分泌 一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一 抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。
【例3】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下 列实验步骤中错误的是（ B ） A．将抗原注Байду номын сангаас小鼠体内，获得能产生抗体的B淋 巴细胞 B．用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞 × C．用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋 巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 D．筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的 细胞群，培养后提取单克隆抗体
单克隆抗体的优点及应用
单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏 度高，并能大量制备。
应用于诊断试剂——准确、高效、简易、快速
应用于治疗疾病和运载药物
主要用于癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药 物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。
生物导弹＝单克隆抗体＋药物
单抗导向，药物为弹头
一个过程: 单克隆抗体制备过程 一个新细胞——杂交瘤细胞 二个“一”
导弹
功 能:导向目标，并摧毁目标
导弹的弹头荷载弹药用来摧毁目标；由导向系统控制 导弹飞行轨迹。
B淋巴细胞
强调：效应B淋巴细胞是 能够产生抗体的B淋巴细 胞，下文将其简称为B淋 巴细胞
分化 效应B淋巴 记忆B淋巴 细胞 细胞
抗体：能够与抗原发生特 异性结合的免疫球蛋白。 能产生抗体的细胞是浆细 胞（即效应B细胞）。
一个优势——单克隆抗体特异性 强、灵敏度高、可大量制备 动物细胞培养原理
三个原理
动物细胞融合原理 免疫原理
单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗 体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺 序是？
【例1】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融 合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单 克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ A ） A.经过免疫的B淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞 B.不经过免疫的T淋巴细胞 D.不经过免疫的B淋巴细胞 【例2】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （ D） A． B淋巴细胞 B．T淋巴细胞 C．骨髓瘤细胞 D．杂交瘤细胞
• 单克隆抗体：单个B细胞克隆产生的化学
性质单一、特异性强的抗体
单克隆抗体的制备
问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设 计一个方案。
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体
骨髓瘤细胞能无限增殖 单克隆 动物细胞培养技术 杂交瘤细胞 抗体
动物细胞融合技术
既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞
获得产生相应 抗体的B细胞 （二选）：先在多 孔培养板上，每孔 只有一个杂交瘤细 胞的情况下开始培 养，然后筛选出能 产生专一抗体的杂 交瘤细胞
(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠 体内的 效应B 细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之 前，应给小鼠注射_____________ 类物质。 抗原 （2）d过程是一个_____________ 过程，该过程的进 细胞融合 行常用_____________ 或_____________ 聚乙二醇 灭活的病毒 的诱导。 (3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成 3 种 选择性 培养基筛选出D细 类型的C细胞，因此需用__________ 胞用于培养，D细胞的名称是 杂交瘤细胞 ，其特点 是_________________________________________ 。 既能无限增殖又能产生特异性抗体