・１６４・阳ｔｓ．ＣＩｉｎＭｅｄＪ，２００５．１１８：１９２—１９７．１５ＣｈｉｓｔｏｐｈｅｒＪ．Ｐａｒｓｏｎｓ，ＢＩａｉｒＵ，Ｂｒａｄｆｏｒｄ，ｅｔａ１．ＡｎｔｉｆｉｂｍｔｉｃｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｅｒｏｆＭｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ．１ＡｎｔｉｂｏｄｙｏｎＥｓｔａｂｌｉｓｈｅｄＬｉｖｅｒＦｉｂｒｏｓｉｓｏｆＲａｔｓ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２ＩＪＩ）４，４ｌ，ｚ１１０６—１１１５．１６ＧｕｉｄｏＭ．ＤｅＦＬ。（）ｌｉｖａｒｉＮ．ｅｔａ１．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｐｌｕｓｒｉｂａｖｉｒｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｎＮＦｋａｐｐａＢ、ＴＧＦ－ｂｅｔａｌａｎｄｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｃｈｍｎｉｃｈｅｐａｔｉｔｉｓＣ．ＭｏｄＰａｔｈｏｌ，２Ｉ）Ｉ）６，１９ｌ１Ｉ）４７—１０５４．１７ＬｅｂｅｎｓｚｔｅｊｎＤＭ．Ｄａ而ｕｓｚＭ，ＳＤｂａｎｌｅｃ－ＬｏｔｏｗｓｋａＭＥ。ｅｔａ１．！；ｅｒｕｍｆｉｂｒｏｓｉｓｍａｒｋｅｒｓａｓＤｒｅｄｉｃｔｏｒｓｏｆａｎａｎｔｉｆｉｂｒｏｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆ

ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎａｌｆａｉｎｃｈｉｌｄｒｅｎｗｉｔｈｃｈｒｏｎｉｃｈｅｐａｔｉｔｉｓＢ．ＥｕｒＪ

ＧａｓｔｆｏｅｎｔｅｒｏｌＨｅｐａｔｏｌ，２Ｉ）Ｉ）５，１７；８４３—８４８．

１８Ｓｃ．ｏｔｔＩ。．Ｆｒｉｅｄｍａｎ．ＭｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆＨｅｐａｔｉｃＦＩｂｍｇｅｎｅｓｉｓ．ＧａＳｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２（Ｊｔ）８，１３４：１６５５—１６６９．（收稿ｆ１期；２Ｉ）ＩＪ８一１１８一‘）１）（本文编辑：赖荣陶）

肝衰竭模型研究进展王华利杨永峰赵伟肝衰竭（ＨＦ）病因主要包括病毒、药物、血流动力学异常、代谢异常等【１。２】。研究合适ＨＦ的模型不仅可以更好的理解ＨＦ的病理生理学状态，还可为发展和改进ＨＦ的治疗措施提供条件。在过去３０年中，已发展了多种动物模型，多为急性肝衰竭（ＦＨＦ）模型，方法主要包括外科手术、药物和基因敲除。近年来，有学者用肝衰竭患者血浆培养ＨｅｐＧ２，Ｃ３Ａ，ＨＨＹ４１，猪肝．成人肝等细胞。观察其对细胞影响，方法多集中于对细胞生长和活力的影响，抑制细胞大分子生物合成，对肝细胞凋亡及肝细胞解毒作用的影响。一、动物模型（一）外科手术模型（ＳｕｒｇｉｃａｌＭｏｄｅｌｓ）外科手术模型是较早发展的ＦＨＦ模型，包括肝全部或部分切除模型和肝血流阻断模型。通过切除全部肝脏或大部肝脏制造出ＦＨＦ动物模型，均不可逆转，主要应用人工肝支持系统方面的研究［３“。早期动物模型是门腔静脉吻合术（ＰＣＡ）加肝动脉结扎术（ＨＡＬ）［５］。与肝切除模型一样，通过永久结扎肝动脉造成完全血流阻断模型也不可逆，因此学者们转而关注暂时性缺血模型，允许肝脏有恢复潜能【６］。（二）化学药物模型（ＣｈｅｍｉｃａｌＭｏｄｅｌｓ）ｎ氨基半乳糖（Ｄｇａｌ）是一种选择性肝毒性药物。不同的物种对半乳糖胺的易感性不同，大鼠较敏感。而小鼠可抵抗其毒性至给药剂量大于１９／ｋｇｃ”。不论是大动物还是小动物模型均显示，给予半乳糖胺后引起的ＦＨＦ是一可逆过程。对乙酰氨基酚主要在肝脏代谢，其主要缺点是可重复性较差，因动物种类不同，其肝毒性也不同；此外，对氨基乙酰酚还可引起肝外毒性，包括肾毒性、心脏毒性以及肺损伤等ｎ‘１…。在七√ｋ十年代，四氯化碳广泛用于制造肝损伤的动物模型，但发现其可重复性差，动物种属差异也较明显【ｌ“。硫代乙酸胺（ＴＡＡ）在大鼠和小鼠模型中应用广泛，但在作者单位：２１（×，ｔ＇３东南大学附属南京市第二医院通信作者：赵伟。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｏｗｅｉｌ９５６１２＠１６３．ｃｏｍ其他动物中应用时个体差异较大。特别是家兔ＴＡＡ模型在临床表现和组织学改变中都体现了较大差异。刀豆球蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）是一种植物凝血素，用于诱导小鼠肝损伤【Ｉ“。而不累及其他器官。该模型的发病机制与自身免疫性肝炎和病毒性肝炎致肝损伤的机制相似，常用于上述疾病的研究。脂多糖（ＬＰＳ）是革兰氏阴性菌细胞壁的一种成分，单独使用ｌ，ＰＳ常用于制备内毒素休克模型【ｌ”“。制备ＨＦ模型时，常使用小剂量的Ｉ。ＰＳ和其他肝毒性药物合用，可引起明显肝损害，并使动物对ＬＰＳ的敏感性提高近千倍，例如和胁ｇａｌ、ＴＮＦ－ａ等合用。（三）基因修饰模型最早用于ＦＨＦ研究的基因模型是ａｌｂ＿ｕＰＡ转基因模型【”】，在该裸鼠系中，白蛋白启动子（ＡｌｂｕｍｉｎＰｒｏｍｏｔｅｒ）促进尿激酶型纤维蛋白溶解酶原（ｕＰＡ）活

性，异位ｕＰＡ过渡表达可引起肝细胞坏死，使小鼠死于肝衰竭。除非ａｌｂＩｕＰＡ转基因自发突变而失活。（）、，ｅｒｔｕｒｆ等［川用基因敲除的方法，将小鼠延胡索酰乙酰乙酸水解酶（ＦＡＨ）基因敲除。制成ＦＡＨ“一小鼠，该小鼠可做为Ｉ型遗传性高酪氮酸血症的基因模型，该模型可出现ＦＨＦ。以上两种模型主要用于研究代谢性疾病的病理生理过程，肝细胞生长，肝细胞移植的可能性及其增生潜能。Ｓｃｈｕｃｈｍａｎｎ等【”３报道了一种白喉毒素（ＤＴ）受体为媒介的转基因鼠动物模型，自然条件下，鼠细胞不存在ＤＴ受体，因此对ＤＴ有抵抗力；而在ＤＴ受体转基因鼠，注射ＤＴ后可引起肝细胞损伤和ＦＨＦ，该模型的主要优点是具有重复性。二、细胞模型正常培养液多采用ＤＭＥＭ、ＲＰＭｌ－１６４０等加小牛血清（ＦＣＳ）或胎牛血清（ＦＢｓ），与此相比，肝衰竭患者（ＬＦＰ）或肝衰竭患者血清（１，Ｆｓ）对体外培养肝细胞生长有抑制作用¨…，因此用这种特定ＬＦＰ或Ｉ。Ｆｓ培养肝细胞。构建ＨＦ细胞模型，对进一步研究ＨＦ的临床治疗有一定意义。（一）ＨｅｐＧ２细胞模型Ｈ印Ｇ２细胞来源于一例１５岁白

万方数据人肝癌组织。该细胞分泌多种血浆蛋白：清蛋白、ａ２一巨球蛋白、血纤维蛋白溶酶原、铁传递蛋白等。该细胞能大容量培养。乙型肝炎表面抗原阴性。分化程度较高，人类原代肝实质细胞分离后。只能经历有限的几次分裂，其内在的代谢酶很快失活¨…，因此常用ＨｅｐＧ２替代肝细胞用于实验研究。很早就有学者发现ＬＦＳ能抑制ＨｅｐＧ２细胞生长，ＤＮＡ合成也是减少的‘２…。（二）Ｃ３Ａ细胞模型Ｃ３Ａ细胞株是从肝纤维母细胞瘤细胞转化获得。分化程度高于ＨｅｐＧ２细胞。并具有良好的肝细胞特异功能，如分泌白蛋白与甲胎蛋白，参与尿素合成与糖原合成等。陈煜等【２¨与国外研究结果不同的是从ＭＴＴ结果及形态学上均观察到Ｃ３Ａ细胞在慢性ＬＦＰ中的增殖速度明显高于正常血浆组。反映生物转化功能的安定代谢量与国外研究结果一致，在慢性组明显低于ＮＨＰ组。（三）ＨＨＹ４１细胞ＨＨＹ４１是经传代建立的永生化细胞株，Ｋｏｎｏ等［２２］将人肝实质细胞培养于胶原中，在强化条件下培养获得。持续传代１年以上，仍与正常人肝细胞功能相同。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ转印证实胞浆内存在人白蛋白ｍＲＮＡ，细胞核型与正常人肝细胞相同。体外培养时具有快速增殖能力，并能低温保存。ＭｃＣｌｏｓｋｅｙ等［２３］发现与ＮＨＰ、ＦＢｓ相比，用急性Ｉ，ＦＰ培养ＨＨＹ４１细胞１６ｈ后，细胞的氧化应激和毒性反应增强；细胞活性、ＤＮＡ合成、蛋白合成及细胞色素Ｐ４５０１Ａ（ＣＹＰ４５０１Ａ）活性都降低。（四）猪肝细胞猪肝细胞能合成多种蛋白、凝血物质等，但不能代替人自身功能，只能利用猪肝细胞的解毒功能。有研究提示，猪肝细胞分泌的促肝细胞生长类物质能对ＨＦ患者有一定的促肝细胞生长作用。另外，从细胞分离、培养生长的角度考虑，乳猪肝细胞明显优于成年猪肝细胞。但存在免疫反应和内源性反转录病毒感染的问题。程永波等乜们研究发现用Ｉ。ＦＰ体外培养的猪肝细胞。在培养第１ｄ时即抑制。对体外培养猪肝细胞大分子合成也有抑制作用，ＡＳＴ和ｌ。ＤＨ漏出比对照组显著升高。另外形态变化显示细胞膜有损害，细胞浆中出现大量空泡。（五）肝细胞株肝细胞是细胞模型中最理想的细胞材料，主要体现在细胞生物学功能相同。但来源匮乏，价格昂贵，细胞分离困难，活力难以长时间维持。Ｐａｐａｄｉｍｉｔｒｉｏｕ等［２５］研究发现在解毒方面，肝细胞新鲜分离时比冷冻保存时能力强。Ｓａｉｃｈ等［２６１发现ＬＦＰ培养原代肝细胞时。可通过ｃａｓｐａｓｅ３和ｃａｓｐａｓｅ８等死亡受体途径诱导肝细胞凋亡。三，讨论细胞模型与动物模型相比具有价格低廉、易获取、重复性好、模型范围广泛，可采用不同Ｉ。ＦＰ，对其代谢、解毒、合成、生物转化功能进行研究。同时ＨＦ研究离不开动物实验，合适的动物模型是各种基础和治疗的性能评价及进一步临床应用的重要条件。细胞模型和动物模型互相补充，可从不同角度对ＨＦ进行研究。参考文献ｔＣｈａｎｇＡＪ，ＤｉｘｉｔＶ，ＳａａｂＳ．Ｆｕｌｍｉｎａｎ“ｅｐａｔｉｃｆａｉｌｕｒｅ．ＣｕｒｒＴｒ∞ｔ・１６５・（）ｐｔｉｏｎｓＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ。２（＇（）３，６：４７３—４７９．２ＫｅｖｉｎＥＪ．ＧｕｎｎｉｎｇＨｅｐａｔｉｃｆａ订ｕｒｅ．Ａｎａｅｓｔｈｅｓｉａ＆ｉｎｔｅｎｓｉｖｅｃａｒｅｍｅｄｉｃｉｎｅ。２０Ｉ）６．７：１１９—１２（Ｊ．３ＮｉｌｓＲ。Ｆ巾ｈａｕｆ・ＫａｒｌＪ．ｅｔａ１．Ａｂｉｏａｎｉｆｉｃｉａｌｌｉｖｅｒｓｕｐｐｏｒｔｓｙｓｔｅｍｕｓｉｎｇｐｒｉｍａｒｙｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ：ａｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌｓｔｕｄｙｉｎａｎｅｗｐｏｒｃｉｎｅｈｅｐａｔｅｃｔｏｍｙｍｏｄｅｌ．Ｓｕｒｇｅｒｙ，２ｌＭ｝４，１３６：４７—５６．４ＮｉｅｕｗｏｕｄｔａＭ．ＫｕｎｎｉｋｅｂＲ，ＳｍｕｔｓｃＭ，ｅｔａ１．Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎｃｒｉｔｅｒｉａｆｂｒａｎｉｓｃｈｅｍｉｃｓｕｒｇｊｃａｌｍｏｄｅｌｏｆａｃｕｔｅｈｅｐａｌｉｃｆａｉ】ｕｆ芑ｉｎｐｉｇｓ．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，２Ｉ＇‘１６．２７：３８３６・３８４５．５ＨａｎｉｄＭＡ．ＭａｃｋｅｎｚｉｅＲＬ。ＪｅｎｎｅｒＲＥ。ｅｔａ１．Ｉｎｔｒａｃｒａｎｉａｌｐｒｅｓｓｕｒｅｉｎｐｉｇｓｗｉｔｈｓｕｒｇｉｃａｌｌｙｉｎｄｕｃｅｄａｃｕｔｅｌｉｖｅｒｆａｉｌｕｒｅ．ＧａＳｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１９７９，７６：１２３—１３１．６ＢｅｎｏｉｓｔＳ，ＳａｒｋｉｓＲ，ＢａｕｄｒｉｍｏｎｔＭ．ｅｔａ１．ＡＲｅｖｅｒｓｉｂＩｅＭｏｄｅｌｏｆＡｃｕｔｅＨｅｐａｔｉｃＦａｉｌｕｆｅｂｙＴｅｍｐｏｒａｒｙＨｅｐａｔｉｃｌｓｃｈｅｍｉａｉｎｔｈｅＰｉｇ．ＪＳｕｒＲｅｓ，２ｌＪ（）【）．８８：６３．６９．７Ｉ。ｅｉｓｔＭ，ＧａｎｔｎｅｒＦ．ＫｕｎｓｔｌｅＧ，ｅｔａ１．Ｔｈｅ５５－ｋＤｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｄＣ【为５ｉｒＩｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙｓｉｇｎａｌｍｕｒｉｎｅｈｅｐａｔｏｃｙｔｅａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｉｖｅｒｆａｉｌｕｒｅ．ＭｏｌＭｅｄ，１９９６。２：１｛）９—１２４．８ＥｇｕｉａＬ。ＭａｔｅｒｓｏｎＢＪ．Ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅ小ｒｅｌａｔｅｄａｃｕｔｅｒｅｎａｌｆａ订ｕｒｅｗｉｔｈｏｕｔｆｕｌｍｉｎａｎｔｌｉｖｅｒｆａｉｌｕｒｅ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ，１９９７．１７：３６３—３７０．９ＬｕｂｅｋＢＭ，ＢａｓｕＰＫ，ＷｅｌｌｓＰＧ．ＭｅｔａｂｏＩｉｃｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｏｆｅｎｚｙｍａｔｉｃｂｉｏａｃｔｉｖａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｃａｔａｒａｃｔｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎｉｎｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙｓｕｓｃｅｐｔｉｂＩｅ（Ｃ５７ＢＩ。／６）ａｎｄｒｅｓｉｓｔａｎｔ（ＤＢＡ／２）ｍｕｒｉｎｅｓｔｒａｉｎｓ．ＴｏｘｉｃｏｌＡｐｐｌＰｈａｍａｃ０１．１９８８。９４：４８７－４９５．１０ＢａｕｄｏｕｉｎＳＶ。ＨｏｗｄｌｅＰ．（）’ＧｒａｄｙＪＧ．ｅｔａ１．Ａｃｕｔｅｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙ