一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 4.肿瘤标志物物试剂盒组成
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 4.肿瘤标志物检测试剂盒组成
① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧ 反应缓冲液（A液）：1瓶，2.5ml/瓶。 PE标记混合抗体溶液（B液）：1瓶，2.5ml/瓶。 校准品：6瓶，0.2ml/瓶，分别为：CAL1-CAL6。 微球混悬液（C液）：1瓶，2.5ml/瓶。 终止液（D液）：1瓶，15ml/瓶。 AFP HOOK 指示微球溶液（H液）：1瓶，250ul/瓶。（仅限含AFP指标） 说明书：1份。 封板纸：2张。
Luminex信号值
二、结果不一致原因分析
（3）HAAAs（HAMA）干扰 (human anti-animal antibodies,HAAAs)
二、结果不一致原因分析
（4）.异嗜性抗体干扰模式图
二、结果不一致原因分析
（5）.补体干扰
免疫检测系统中捕获抗体在向固相包被中和标记抗体的标记过程中,抗体分子 发生变构,其Fc 段的补体C1q 分子结合位点被暴露出来,使C1q 可以将二者连 接起来,从而造成假阳性。一些公司为了增加检测的敏感性,使用链霉亲和素包 被固相,将捕获抗体用亲和素标记,此过程也可引起捕获抗体的构象发生改变,造 成假阳性或假阴性升高。
参考文献：肿瘤标志物的临床应用建议 中华检验医学杂志2012年2月第35卷第2期 P103
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一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理
2.肿瘤标志物临床应用
高危人群筛查 肿瘤辅助诊断 疗效评价 复发监测及预后
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理
3.方法学原理：双抗夹心免疫学方法
（1）计量学溯源问题
上梁不正下梁歪
二、结果不一致原因分析
物质 校准 赋值 a)CGPM的SI单位定义 b)一级参考测量程序 c) 一级校准品 计 量 学 溯 源 d)二级参考测量程序 NMI,ARML NMI,ARML, ML f)制造商选定测量程 序 h)制造商常设测量程 序 ML ML ML ML j)终端用户常规测量 程序 制造商和 （或）终端 用户 终端用户 终端用户 BIPM,NMI,AR ML 程序 实施 uc(y)
解答：
TM阳性
≠
恶性肿瘤
三、常见问题答疑 Q7 肿瘤标志物阳性意味着什么？
1.采血检测PSA项目前，进行直肠指检、前列腺穿刺等临床操作，PSA水平 可升高；丝裂霉素、顺铂等抗肿瘤药物使PSA水平增高；
2. 采血检测CA125项目，受检对象处于月经期，CA125水平会增高；
3. 妊娠会引起AFP、freeβhCG、CA125水平的增高； 4. 吸烟人群CEA水平会有轻度升高；
⑨ 96孔反应板：1块。 ⑩ 光盘（读数模板+计算模板）
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 5.反应过程简介
准备工作
恢复到室温、校准品复溶、重悬微球
第一步反应
A液 25ul+ 样本 10ul+ B液 37℃反应5min
第二步反应
+C液 25ul 37℃反应60min
终止反应
+D液 100ul 振荡混匀，读数，计算浓度
，所以没有设置HOOK指示微球。
三、常见问题答疑 Q2 有关肿瘤标志物HAMA效应问题
解答：HAMA效应是众多特异性干扰中的一种。正常人群中，约有 20%的人会有或高或低的HAMA反应，因此，每家厂家的试剂都会有 相应消除HAMA的成分，对于我们来说，A液主要用途就是消除HAMA 等类似干扰。但和所有厂家一样，都不能保证100%的消除HAMA反应 ，偶尔会有个别样本出现假阳性，此类样本，需要通过稀释等手段 确认。
ML ML ML ML 制造商和 （或）终端 用户 终端用户 终端用户
常规样本 结果
j)终端用户常规测量 程序
二、结果不一致原因分析
物质 校准 赋值 程序 实施 uc(y)
计 量 学 溯 源
g)制造商工作 校准品 i)制造商产品校 准品
f)制造商选定测量程 序 h)制造商常设测量 程序
ML ML ML ML 制造商和 （或）终端 用户 终端用户 终端用户
常规样本 结果
j)终端用户常规测量 程序
二、结果不一致原因分析
表 目前已知肿瘤标志物有国际标准（国际约定校准）的指标
TM AFP CEA HCGβ PSA PSA 编号 AFP 73/601 99/650 96/668 96/670 时间 1975 1975 2001 1999 1999 说明 NIBSC持有 NIBSC持有 NIBSC持有 NIBSC持有 NIBSC持有
试验方法
金标准 阳性(+) 阴性(-)
a c
a+c
合计
a+b c+d
a+b+c+d
阳性(+) 阴性(-)
合计
b d
b+d
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-相关性
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-相关性
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-相关性
二、结果不一致原因分析 2.不同免疫检测方法检测肿瘤标志物结果差异原因分析
二、结果不一致原因分析 （10）室间质评样本差异
二、结果不一致原因分析 （10）室间质评样本差异
CEA方法学比对数据 n=45
120 y = 1.0317x - 0.1995 100
评价方法 Tellgen CEA
80 60 40 20 0 0 -20 比较方法 罗氏 Elecsys CEA测值（ng/ml） 10 20 30 40 50 60 70 80 90
图像诊断
• CT • 核磁共振
• 免疫学指标 化学诊断 • 血清学 • 癌反应
细胞及组 织
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理
1.肿瘤标志物定义： 肿瘤标志物（tumor marker，TM）是指恶性 肿瘤发生和发展过程中，由肿瘤细胞合成分泌或是 由机体对肿瘤细胞反应而产生和（或）升高的，可 预示肿瘤存在的一类物质。存在于血液、体液、细 胞或组织中。
三、常见问题答疑 Q3 有关肿瘤标志物试剂盒装量的问题
解答：公司试剂盒装量一般按照110人份的量进行装量，多出来的 试剂一个是为了防止枪头、粘壁等的损失，一个是弥补需要做标准
品的缺点。
三、常见问题答疑 Q4 有关肿瘤标志物定标频率的问题
解答：因为手工操作误差、反应温度、移液器系统误差及其它系统 误差，每次试验间会有区别，造成整体信号值的变化，因此不做标 准曲线会导致结果存在系统偏差。公司要求必须每次试验做标准曲 线。
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 核心反应原理
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-准确度、正确度、精密度
1.准确度 2.正确度 3.精密度
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-不精密度补充说明
95%置信区间
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-灵敏度和特异度（阳性符合率、阴性符合率） 试验方法和金标准比较2*.0% 0.0% 0 50 100 150 抽样量 200 250 300
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 7.获得信号值
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 8.剂量反应曲线
样本2
Y5=b5x5+a5 样本1 Y4=b4x4+a4 Y3=b3x3+a3 Y2=b2x2+a2 Y1=b1x1+a1
二、结果不一致原因分析 （7）.钩状（Hook）效应
二、结果不一致原因分析 （7）.钩状（Hook）效应
二、结果不一致原因分析 （8）.钩状（Hook）效应
二、结果不一致原因分析 （9）.外源性污染导致的部分肿瘤标志物假阳性
唾液导致CA199、CEA假性升高。 人体唾液中含CA199、CEA等抗原，因避免唾液对检测过程的污染 。
二、结果不一致原因分析
表 无国际标准标志物溯源情况
二、结果不一致原因分析
二、结果不一致原因分析
图 不同方法学胃蛋白酶I检测的系统误差，因为缺乏国际 标准，导致系统间存在显著的差异：
二、结果不一致原因分析
（2）.类风湿因子（Rheumatoid Factor,RF）干扰
类风湿因子本质是一种免疫球蛋白，可以特异性的识别自身IgG的Fc部分， 属于一种自身抗体。主要存在形式为IgM RF（约占80%）及IgG RF。 RF产生原因有（1）人体IgG在物理因素下其抗原性发生变化持续刺激免疫 系统；（2）免疫功能紊乱；（3）遗传因素。
罗氏CEA说明书
二、结果不一致原因分析 （6）.抗体标准化问题-CA19-9
Sonia L. La’ulu, and William L. Roberts Performance Characteristics of Five Automated CA 19-9 Assays[J], Am J Clin Pathol 2007;127:436-440.
人体表皮皮屑、唾液、汗液导致SCCA指标假性升高。 人体表皮细胞中含大量SCCA抗原，皮屑汗液等如果在实验过程中 掉入到反应体系中将对SCCA产生假阳性。
细菌污染导致假阳性 另外细菌污染导致血清产生大量悬浮物与沉淀，在反应中导致非特 异性吸附的发生，易导致假阳性。 携带污染和交叉污染 此类污染易出现在ELISA方法学及采用相同样品针的仪器上。
肿瘤标志物定量检测试剂原理及常见问题
上海透景生命科技有限公司 质量管理部 杨恩环 2015-02-03
本次讲解内容
肿瘤标志物概述及试剂检测原理
结果不一致原因分析
常见问题答疑
背景
图 2009年中国部分市前十位疾病死亡专率及死亡原因构成，数据引自“中国卫生统计年鉴•2011”
背景
目前对肿瘤最有效的措施： 早发现，早治疗