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LO
2020/6/2
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从雨生红球藻提取虾青素
的四种不同方法比较
2
结果
相关介绍
实验材料
实验方法
提取物质量评价
3
相关介绍
•虾青素Astaxanthin，是类胡萝卜
•素的一种，在类胡萝卜素家族中有很多知
•名明星，如β胡萝卜素，叶黄素、蕃茄红
•素等，天然虾青素是这个家族中最具健康
•益处的一种。人体的衰老，主要是由于
•自由基所造成的氧化所至。而红球藻萃取物
•特殊的分子构造，可以穿越人体细胞外壁，
•直接清除细胞内的氧自由基，增强细胞再生能力
•，维持人体机能平衡和减少衰老细胞的堆积，
•由内而外保护细胞和DNA健康。
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实验材料
Haematococcus pluvialis organisms were gifted by
Yunnan Yunlin Biological Technology Co. Ltd.
(Kunming, Yunnan province, China).
Before extraction, the organism was dried and the
moisture content was below 0.5 wt.%.
Soy oil was brought from Jinhai Food Industry Co. Ltd.
(Qinhuangdao, China).
Astaxanthin standard with purity of 99% was purchased
from Sigma (St. Louis, MO).
All other chemicals were of analytic grade and bought
fromlocal market
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A
HCL-ACE
B
HEX-IPA
C
MET-ACE
D
soy-oil extraction
提取方法
6
A
盐酸-丙酮HCL-ACE
HEX-IPA
MET-ACE
soy-oil extraction
提取方法
在70度10mg 干藻粉于离心管中加1ml 4M HCL 处
理两分钟
样品冷却，以5000 rpm离心5分钟
样品蒸馏水洗两次后用1ml丙酮悬浮
在冰水浴中超声波提取20分钟，然后在4摄氏度以
3500 rpm离心6min
取上清液用高效液相色谱法测提取率
所有步骤均在光保护和充氮环境下进行
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B
己烷-异丙酮HEX-IPA
MET-ACE
soy-oil extraction
提取方法
置10mg干藻粉于2ml HEX-IPA （6：4，v:v）混合
溶液中,在冰水中超声波辅助提取20min
4摄氏度以3500 rpm离心5min，然后真空环境下浓
缩
提取率以干重百分比表示，高效液相色谱法分析虾
青素含量
所有步骤均在光保护和充氮环境下进行
8
HEX-IPA
C
甲醇-丙酮MET-ACE
soy-oil extraction
提取方法
称10mg干藻粉于15ml琥珀色螺口纹小瓶中加入1ml
甲醇，冰水中超声波提取4-5min
4摄氏度以3500 rpm离心5min，然后真空环境下浓
缩
9
HEX-IPA
MET-ACE
soy-oil extraction
提取方法
D
大豆油萃取soy-oil extraction
取2.5g干藻粉用20ml植物大豆油置于250ml长颈瓶
中，在热板上加热搅拌2h
油萃取物由0.22微米纤维素过滤
高效液相色谱法分析虾青素含量和萃取率
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高效液相色谱法测定虾青素和提取物的质量评价
•1 提取率
•2 扫描电镜观察细胞形态
•3 高效液相色谱法测定虾青素含量
•4 脂肪酸核磁共振
•5 DPPH自由基清除
•6 还原力测定
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2 扫描电镜技术
3 高效液相色谱
法
4 H1脂肪酸核
磁共振技术
5 DPPH自由基清
除
6 还原力测定
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2 扫描电镜技术
样品用50mmol/l磷酸盐溶
液（ph7.2）轻洗，固定
100 ml戊二醛（2.5%）和
100 ml锇酸溶液（1%）固
定，试样使用连续的乙醇
和叔丁醇脱水。脱水后，
将试样用二氧化碳干燥和
在离子镀膜机中用金镀膜
2分钟。在扫描电子显微
镜下观察并记录细胞形态
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3高效液相色谱法
•洗涤剂是A丙酮和B甲醇：水（9：1 Ｖ／Ｖ）流速
0.8ml/min 温度40度。梯度浓度如下：B80-20%
25min,20% 20min,20-80% 5min.检测波长460nm
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4 H1脂肪酸核
磁共振技术
10mg样品溶解在
0.6mlCDCL3中，
光谱在25度记录
，600MHz分光仪
亚麻酸
亚麻油酸
油酸
饱和脂肪酸
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5 DPPH自由基清
除
•每个样品取1.5ml加入
1.5ml 0.1mol/l DPPH
在乙醇中，轻摇混合
溶液，室温暗处放置
30min
•分光光度计517nm测
定吸光度
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6 还原力测定
•每个样品取1ml加入2.5ml 0.2mol/l 磷酸溶液（ph 6.6）和
1ml 1%（W / V）铁氰化钾中
•混合溶液50度放置20min，迅速降温。然后2.5ml 10%
（W / V）三氯乙酸加入混合液，并以3500 rpm离心10分
钟
•2.5ml上清液和2.5ml 蒸馏水和0.5ml 0.1%（W / V）三氯
化铁在试管中，10min后分光光度计700nm测定吸光度
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结论
盐酸-丙酮HCL-ACE
提取方法是最合适的
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LO
这里输入公
司名称
2020/6/28
谢谢
观看
@稻壳儿
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