EMS诱变步骤：
原生质体诱变时，buffer里要加15%的蔗糖、平板为R6；
孢子诱变时，需要在TSB预萌发

材
料

1
原生质体原液：109个/ml OK
2
稀释缓冲液：pH7.2 0.1M 磷酸缓冲液+15%蔗糖 （过滤灭菌） OK
3
终止液:5%硫代硫酸钠+15%蔗糖溶液（过滤灭菌） OK
4
平板：R6 OK
5
消毒液：20%硫代硫酸钠溶液 OK
6
EMS 原液： OK

步
骤

1
取1ml原生质体原液，加9ml稀释缓冲液。得到108个/ml原生质体悬液
2
将上述悬液分装每份0.5ml。

3
取5ul EMS原液（10M/L MES),加入0.5ml原生质体悬液（工作浓度0.1M/L),于
30℃静置培养对照组不加EMS。

4
加入时间（min） 0 40 60 70 不加
诱变时间（min） 80 40 20 10 0 （CK）

5
诱变和CK的处理：样品取出后加入0.5ml终止液，离心，除去上清。再加入稀释
缓冲液洗涤2次。最后一次除去上清后加稀释缓冲液0.5ml。（约108个/ml)。用
稀释缓冲液按10-2、10-3、10-4稀释，涂板2次重复

诱 变 指 标 1
致死率： 不同诱变条件下的致死率，从平板计数可直接得出
2 突变率： （1）表型多样性：再生后直接观察计数
（2）产量分布：需将各致死率下的克隆发酵，统计产量分布

甲基磺酸乙酯 Ethyl methylsulfonate
分子式: C3H8O3S; 分子量: 124.16, 沸点: 85-86℃
性质描述: 无色透明油状液体
相对密度1.1452 (10M/L)
溶于乙醚、乙醇、氯仿，微溶于水
终止液: 1M NaOH, 20% w/v Na2S2O3