《计量与测试技术》２０　２牟摹３９卷第　期　乳与乳制品中Ｌ（一）一羟脯氨酸含量的测定方法　Ｍｉｌｋ　ａｎｄ　Ｄａｉｒｙ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｌ（一）一ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏ，．　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｆｉｎｅ　韩志平　（贵州省产品质量检验检测院，贵州贵阳５５０００４）　摘要：目的：改进乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定一Ｌ（一）一羟脯氨酸含量测定法（卫生部指定方法）。方法：在其前处理过程中用硫酸溶液代替氯　化亚锡盐酸溶液水解样品。用烘箱代替了水浴水解样品，改动了试样前处理和测定操作。方法的线性范围Ｏｔ，ｅ，／ｎ￣～２．ｏｔ，ｅ／ｎ￣，相关系数７一Ｏ．９９９９３，　加标回收率为８９．５％一１０１．Ｏ％。结论：该方法显色灵敏，稳定性好，准确，干扰少，适用于乳及乳制品中一Ｌ（一）一羟脯氨酸含量测定。　关键词：乳与乳制品；Ｌ（一）一羟脯氨酸；测定方法　１前言　“皮革奶”是用皮革水解蛋白生产出来的乳制品，加　人皮革水解蛋白到乳制品中的目的是提高产品中蛋白含　量，皮革水解物是从皮毛中水解出的物质，能增加食品中　氨基酸的含量但皮革水解物含有危害人体健康的重金属　六价铬，不能用于食品加工。Ｌ一羟脯氨酸是胶原蛋白　（皮革水解蛋白）特有的氨基酸，而牛奶中并不含此氨基　酸，所以一般乳与乳制品中皮革水解蛋白的鉴定，主要是　通过对Ｌ一羟脯氨酸含量的测定。通过对Ｌ（一）一羟脯　氨酸含量的测定，可判定是否为动物水解蛋白。　２原理　试样用硫酸于１０５℃水解，过滤、稀释水解产物。羟　脯氨酸经氯胺Ｔ氧化后，与对二甲氨基苯甲醛反应生成　红色化合物，在波长５５８ｎｍ处进行比色测定。　３材料与方法　３．１仪器与材料　紫外可见分光光度计（８４５３）、干燥箱（１０５℃±１　ｏＣ）、　三角烧瓶（２５０ＩｌｌＬ）、圆形滤纸、ｐＨ计、水浴锅（６０＂（３±　０．５ｃＩ＝）、比色皿１０ｍｍ、分析天平（０．０００１ｇ）、容量瓶　（２５０ｍＬ）、表面Ｉ１１ｔ（５ｃｍ　６ｃｍ）、铝箔或不透明塑料薄膜。　３．２试剂　（１）硫酸溶液Ｅｃ（Ｈ２Ｓ０４）　３瑚　Ｌ］：量取７５０ｍＬ水于　２Ｌ的烧杯中，在搅拌下缓慢加入３２０ｍＬ浓硫酸，冷却至　室温后用水定容至２Ｌ；　（２）缓冲溶液（ｐＨ＝６．８）：将２６．０ｇ一水柠檬酸，　ｌ４．０ｇ氢氧化钠和７８．０ｇ无水乙酸钠溶于５００ｍＬ水中，加　入２５０ｍＬ正丙醇，用水稀至１Ｌ。该溶液于４℃暗处可稳　定几周；　（３）氯胺Ｔ溶液：将１．４１ｇ氯胺Ｔ，用１００ｍＬ缓冲溶液　溶解（用时现配）。　（４）显色剂：称取ｌ０．０ｇ对二甲氨基苯甲醛，用３５ｍＬ　高氯酸溶液Ｅ６ｏ％（质量分数）］溶解，缓慢加入６５ｍＬ异丙　醇。（用时现配）　（５）Ｌ（一）一羟脯氨酸（Ｃ５Ｈ９Ｎｏ３）标准溶液。　标准储备液５００ｔ￣ｇ／ｍＬ：称取５０．０ｍｇ／Ｌ（一）一羟脯氨　酸用少量水溶解，加一滴３ｍｏＬ／Ｌ硫酸溶液，用水定容至　１００ｍＬ容量瓶中。该溶液４℃以下可稳定存放１个月。　３．３测定　（１）标准曲线的绘制：吸取标准储备液５．００ｍＬ于　５００ｍＬ容量瓶中，用水定容至刻度即得５ｔ￣ｇ／ｍＬ标准溶　液。分别吸取该溶液０．Ｏ０，１０．００，２０．００，３０．Ｏ０，４０．ＯＯｍＬ　于１００ｍＬ容量瓶中，用水定容摇匀。所得浓度分别为　Ｏ．Ｏ，０．５，１．０，１．５，２．Ｏｔ￣ｇ／ｍＬ。（用时现配），取不同浓度　的上述溶液５．ＯＯｍＬ，分别加入２５ｍＬ具塞试管中，加氯胺　Ｔ溶液２．ＯＯｍＬ，摇匀后于室温放置２０ｍｉｎ。加入显色剂　２．００ｍＬ，摇匀，用铝箔或塑料薄膜将比色管封口，迅速放　入６ｏｃ【＝恒温水浴中加热２０ｍｉｎ，取出，用流动水冷却比色　管３ｍｉｎ，在室温下放置３０ｍｉｎ，用水作参比，在波长５５８ｎｍ　处测定吸光值，绘制标准曲线（以浓度为横坐标，吸光值　为纵坐标）。　（２）样品的测定：称取８ｇ试样（精确至０．Ｏｌｇ）于　２５０ｍＬ三角烧瓶中，避免试样粘在瓶壁上，量取３０ｍＬ±ｌ　ｍｌ＿３ｍｏｌ／Ｌ硫酸溶液，加入烧瓶中，用表面皿盖住，于　１０５℃干燥箱中恒温１６ｈ，用滤纸趁热将水解产物过滤至　２５０　ｍＬ容量瓶中，用硫酸溶液１０ｍＬ分三次洗涤烧瓶和　滤纸，合并于容量瓶中，用水定容，摇匀。用移液管吸取　该溶液５ｍＬ至２５０　ｍＬ容量瓶中，定容。吸取该溶液　５．００ｍＬ于２５ｍＬ具塞试管中，加氯胺Ｔ溶液２．００ｍＬ，摇　匀后于室温放置２０ｍｉｎ。加入显色剂２．００ｍＬ，摇匀，用铝　箔或塑料薄膜将比色管封口，

迅速放人６ｏ℃恒温水浴中　韩志平：乳ｓ乳翻品中Ｌ（一）一羟碱氨酸含量的测定方法　加热２０ｍｉｎ，取出，用流动水冷却比色管３ｍｉｎ，在室温下　放置３０ｍｉｎ，用水作参比，在波长５５８ｍｎ处测定吸收值，扣　除空白溶液的吸收（用水代替稀释液，重复加入显色剂　２．００ｍＬ开始至比色步骤），从标准曲线查得水解产物中　羟脯氨酸的含量。　计算公式为：　！　！　×ｍ×ｌＯ　式中：　一样品中Ｌ（一）一羟脯氨酸的质量分数，（　１００ｇ）；ｃ一从标准曲线上查得相应的Ｌ（一）一羟脯氨酸　量，（ｐｔｇ）；ｍ一称取试样的质量，（ｇ）；Ｖｌ一消化液体积　（Ⅱ１Ｌ）；．厂一为稀释倍数；　一比色时吸取的溶液体积（ｍＥ）。　精密度：同一分析者同时或相继进行的两次测定结　果之差不得超过平均值的５％。当符合允许差所规定的　要求时，取两次测定结果的算术平均值作为结果，结果保　留小数点后两位有效数字。　４结果与讨论　４．１标准曲线　用空白样品提取液配制５点标准工作溶液，用于确　定标准工作曲线。在波长５５８　ｎｌｎ处用吸光值对标准工　作溶液浓度作图，绘制标准曲线，标准曲线的浓度在　（０．００—２．ｏｏ）ｔｏ／ｍＥ的范围内有很好的线性关系，线性　相关系数ｒ＝０．９９９９３；检出限为０．０１　ｇ／１００ｇ。　４．２方法的回收率和精密度　采用加标测定回收率的方法来计算准确度。称取同　样品６份，分别添加０．００９７ｇ、０．０１１０ｇ、０．０２００ｇ、　０．０１０９ｇ、０．０１５３ｇ、０．０２０５ｇ的Ｌ（一）一羟脯氨酸标准品，　按样品制备方法制备后，进行测定，结果如表１所示。由　表１可以看出，本方法在添加水平在（Ｏ．０Ｏ～２．００）￣ＪｍＬ范　围内，其加标回收率在８５．２％　１０１．Ｏ％之间，相对标准偏差　为４．３７％，满足用分光光度法分析方法的实验要求。　表１乳品中Ｌ（一）一羟脯氨酸加标回收率数据（ｎ＝６）　

５小结　经实验验证，该方法分析速度快，样品前处理简单，　重复性和检测限均可满足实验要求，可以作为乳与乳制　品中动物水解蛋白的主要鉴定方法。　参考文献　［１］乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定一Ｌ（一）一羟脯氨酸含量的测定法．　［２］ＧＢ９６９５．２３—２ＯＯ８．肉与肉制品Ｌ（一）一羟脯氨酸含量测定［Ｓ］．北　京：中国标准出版社．　作者简介：韩志平，女，高级工程师。工作单位：贵州省产品质量检验检测　院。通讯地址：５５０００４贵州省贵阳市新添大道南段２４７号。　收稿时间：２ｏ１１一ｏ７—１９　（上接第９页）　计的高）如果一旦调的湿度大于预计的值，你不得不要再　次使系统平衡后再继续后续操作。　（２）按照资料的要求调整“ＤＲＹ　ＧＡＳ　ＦＩＲＳＴ　ＤＩＬＵ．　ＴＩＯＮ”（干气第一级稀释）和“ＤＲＹ　ＧＡＳ　ＳＥＣＯＮＤ　ＤＩＬＵ—　ＴＩＯＮ”（干气第二级稀释）流量计的示值。　（３）在表中找到你需要的露点值对应的“ＷＥＴ　ＧＡＳ”　（湿气）流量计的位置并通过流量计调节到相应位置。　（４）在表中找到你需要的露点值对应的“ＷＥＴ　ＧＡＳ　ＤＩＬＵＴＥＤ”（湿气稀释）值，通过调整“ＶＥＮＴ”阀达到指定　位置，不是通过“ＷＥＴ　ＧＡＳ　ＤＩＬＵＴＥＤ”流量计来调节的，该　流量计一直是完全打开的。该调整方法是通过调节排除　的湿气的多少来调节湿气的量的。　在平衡之后，系统输出的将是你所要的露点值。平　衡的时间取决于你所要的露点值的高低。通常情况，一　６ｏ℃（一７６ｏＦ）或者更干燥的气体，大概要２小时。在一　６０℃（一７６。Ｆ）和一４ｏ℃（一４０￣Ｆ）之间的露点，平衡时间大　约为１小时，对于其它更高露点值大概需要３０分钟。　接下来看对于高于一４０℃露点样气的制备：　（１）顺时针旋转“ⅦＮＴ”阀使其完全关闭。　（２）Ｊｌ￣时针旋转“ＤＲＹ　ＧＡＳ　ＦＩＲＳＴ　ＤＩＬＵＴＩＯＮ”流量计　使其完全关闭。目的是减少干气的含量，使混合的气体　露点值更高。　（３）在表中找到你需要的露点值对应的“ＤＲＹ　ＧＡＳ　ＳＥＣＯＮＤ　ＤＩＬＵＴＩＯＮ”值调整到指定位置。　（４）在表中找到你需要的露点值对应的“ＷＥＴ　ＧＡＳ”　值或者“ＷＥＴ　ＧＡＳ　ＤＩＬＵＴＥＤ”值。注意，看到其中某一列　有“＊”符号时说明该流量计的值不确定，只需调整确定　值的流量计即可。　上述仅描述了一种分流法湿度发生器的使用方法，　其他的分流法湿度发生器的使用也很类似。只是在使用　时注意环境温度和操作的细致小心，尤其是在检测低湿　的情况下。　作者简介：曹永锋，男，工程师。工作单位：新疆自治区计量测试研究院。　通讯地址：８３００１１新疆乌鲁木齐河北东路１８８号。　陈武卿，新疆自治区计量测试研究院（乌鲁木齐８３００１１）。　

收稿时间：２０１１—１２—１９