ｉｃｓ １１．２２０Ｂ４１
中华人民共和国农业行业标准
ＮＹ／Ｔ ５３６－２００２
鸡伤寒和鸡白痢诊断技术
Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ ｆｏｗｌ ｔｙｐｈｏｉｄ ａｎｄ ｐｕｌｌｏｒｕｍ ｄｉｓｅａｓｅ
２００２一０８一２７发布２００２门２一０１实施
中华人民共和国农业部发布
２９万
ＮＹ／＇ｒ ５３６－２００２
目Ｕ吕
鸡伤寒和鸡白痢（ｆｏｗｌ ｔｙｐｈｏｉｄ ａｎｄ ｐｕｌｌｏｒｕｍ ｄｉｓｅａｓ）是由鸡白痢沙门氏菌（ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｐｕｌｌｏｒｕｍ）和鸡伤寒沙门氏菌（ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｇａｌｌｉｎａｒｕｍ）引起的各种日龄鸡和火鸡的传染病，以急性败血性经过或以
慢性隐性感染为特征。本病呈世界性分布，所有养鸡的国家和地区都有发生。雏鸡发生本病时，发病率和死亡率均较高，严重影响雏鸡成活率；青年鸡发病后，死亡率可达１０００＾＇２０％，病程可达２０天￣３０
天，鸡只生长发育受阻；成年鸡感染本病多为慢性或隐性经过，不表现明显的症状，但可长期带菌，成为
本病的主要传染源，产蛋鸡可经蛋垂直传播，因此种鸡感染后可造成更大范围的传播，集约化养鸡场一
旦发生本病会造成巨大的经济损失。 世界动物卫生组织〔Ｗｏｒｌｄ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ（英），Ｏｆｆｉｃｅ Ｉｎｔｅｎｔｉｏｎａｌ ｄｅｓ Ｅｐｉｚｏｏｔｉｃ
（法），ＯＩＥ〕将鸡伤寒和鸡白痢列为Ｂ类疾病，并规定了诊断标准和相应生物制品（多价抗原）的制造、标定和使用的国际标准，指定了专业实验室向全世界提供鸡白痢阳性血清标准型（Ｓ）和变异型（Ｖ）国际标
准品。我国农业部也将其列为二类疫病。 本标准中的病原分离和鉴定及全血平板凝集试验是参照ＯＩＥ《诊断试验和疫苗标准手册》（２０００版）（Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｆｏｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｔｅｓｔｓ Ａｎｄ Ｖａｃｃｉｎｅｓ，２０００）等相关标准性文件制定的。
本标准中的附录Ａ为规范性附录。 本标准由农业部畜牧兽医局提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：中国兽医药品监察所。 本标准起草人：夏业才、张学琴、康凯、姚文生。
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鸡伤寒和鸡白痢诊断技术
１范围
本标准规定了鸡伤寒和鸡白痢病原分离和鉴定及全血平板凝集试验技术。 本标准所规定的病原分离鉴定适用于各种日龄鸡的鸡伤寒和鸡白痢的诊断，全血平板凝集试验适
用于成年鸡的鸡伤寒和鸡白痢的诊断，可用于诊断、流行病学调查和无本病健康鸡群监测。
２病原分离和鉴定
２．１材料准备
２．１．１培养甚 鉴别培养基：ｓｓ琼脂、麦康凯琼脂。 增菌培养基：亚硒酸盐煌绿增菌培养基、四硫磺酸钠煌绿增菌培养基、三糖铁琼脂和赖氨酸铁培
养基。 以上各培养基配制方法见附录Ａ，２．１．２沙门氏菌属诊断血清 Ａ－Ｆ多价Ｏ血清，０９因子血清，０１２因子血清、Ｈ－ａ因子血清、Ｈ－ｄ因子血清，Ｈ－ｇ． ｍ因子血清和
Ｈ－ｇ． Ｐ因子血清。
２．２采集病料 可采集被检鸡的肝、脾、卵巢、输卵管等脏器，无菌取每种组织适量，研碎后进行培养。
２．３分离培养 将研碎的病料分别接种亚硒酸盐煌绿增菌培养基（见第Ａ．３章）或四硫磺酸钠煌绿增菌培养基（见
第Ａ．４章）和Ｓｓ琼脂（见第Ａ．１章）平皿或麦康凯琼脂（见第Ａ．２章）平皿，３７＂Ｃ培养２４ ｈ一４８ ｈ，在麦
康凯或ｓｓ琼脂平皿上若出现细小无色透明、圆形的光滑菌落，判为可疑菌落。若在鉴别培养基上无可疑菌落出现时，应从增菌培养基中取菌液在鉴别培养基上划线分离，３７０Ｃ培养２４ ｈ－４８ ｈ，若有可疑菌
落出现，则进一步做鉴定。
２．４病原鉴定２．４．１生化试验和运动性检查：将可疑菌落穿刺接种三糖铁琼脂（见第Ａ．５章）斜面和赖氨酸铁琼脂
（见第Ａ．６章）斜面，并在斜面上划线，同时接种半固体培养基，３７℃培养２４ ｈ后观察，若无运动性，并且
在三搪铁琼脂培养基或在赖氨酸铁琼脂培养基上出现阳性反应时，则进一步作血清学鉴定。２．４．２血清学鉴定：对初步判为沙门氏菌的培养物作血清型鉴定，取可疑培养物接种三糖铁琼脂斜面，
３７℃培养１８ ｈ－２４ ｈ，先用Ａ－Ｆ多价０血清与培养物作平板凝集反应，若呈阳性反应，再分别用０９，０１２ ， Ｈ－ａ， Ｈ－ｄ ， Ｈ－ｇ． ｍ和Ｈ－ｇ． Ｐ单价因子血清作平板凝集反应，如果培养物与０９，０１２因子血清呈阳
性反应，而与Ｈ－ａ，Ｈ－ｄ，Ｈ－ｇ． ｍ和Ｈ－ｇ． Ｐ因子血清呈阴性反应时，则鉴定为鸡白痢沙门氏菌或鸡沙门
氏菌。２．４．３用接种环取两环因子血清于洁净玻璃板上，然后用接种环取少量被检菌苔与血清混匀，轻轻摇
动玻板，于１ ｍｉｎ内呈明显凝集反应者为阳性，不出现凝集反应者为阴性，试验时设生理盐水作对照应
无凝集反应出现。
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３全血平板凝集试验
３．１材料准备３．１．１鸡伤寒和鸡白痢多价染色平板抗原、强阳性血清（５００ ＩＵ ／ｍＬ ）、弱阳性血清（１０ ＩＵ／ｍＬ）、阴性
血清。３．１．２玻璃板、吸管、金属丝环（内径７． ５ ｍｍ－８． ０ ｍｍ）、反应盒、酒精灯、针头、消毒盘和酒精棉等。
３．２操作 在２０ Ｃ－ ２５０Ｃ环境条件下，用定量滴管或吸管吸取抗原，垂直滴于玻璃板上１滴（相当于０．０５ ｍｌ，），然后用针头刺破鸡的翅静脉或冠尖取血０． ０５ ｍＬ（相当于内径７． ５ ｍｍ－８． ０ ｍｍ金属丝环
的两满环血液），与抗原充分混合均匀，并使其散开至直径为２ ｃｍ，不断摇动玻璃板，计时判定结果，同
时设强阳性血清、弱阳性血清、阴性血清对照。
３． ３结果判定３．３－１凝集反应判定标准如下： ａ） １００％凝集（＃）：紫色凝集块大而明显，混合液稍浑浊； ｂ） ７５％凝集（＋十十）：紫色凝集块较明显，但混合液有轻度浑浊；
ｃ） ５０％凝集（十＋）：出现明显的紫色凝集颗粒，但混合液较为浑浊； ｄ） ２５环凝集（＋）：仅出现少量的细小颗粒，而混合液浑浊；
ｅ）。％调集（一）：无凝集颗粒出现，混合液浑浊。３．３．２在２ ｍｉｎ内，抗原与强阳性血清应呈１００％凝集（＃），弱阳性血清应呈５０％凝集（＋十），阴性血
清不凝集（一），判试验有效。３．３．３在２ ｍｉｎ内，被检全血与抗原出现５０％（十＋）以上凝集者为阳性，不发生凝集则为阴性，介于
两者之间为可疑反应，将可疑鸡隔离饲养１个月后，再作检疫，若仍为可疑反应，按阳性反应判定。
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附录Ａ（规范性附录）培养基的制备
Ａ．１ ＳＳ琼脂
Ａ．１．１成分
牛肉浸粉５９ 脉蛋白陈５９
胆盐２．５９ 蛋白陈ｌｏｇ
乳糖１０ｇ 硫代硫酸钠８．５ ｇ
柠檬酸钠８． ５ ｇ
柠檬酸铁１．０ｇ 中性红（（１％） ２．０ ｍＬ 煌绿（０．０１％） ３．３ ｍＬ 琼脂粉１３ｇ 蒸馏水１ ０００ ｍＬＡ．１．２制法
Ａ．１． ２． １将上述材料（除中性红和煌绿溶液外）混合，加热溶解。Ａ．１．２．２待琼脂完全溶化后，以氢氧化钠溶液调整ｐＨ至７．１－７－２．
Ａ．１．２．３将中性红和煌绿溶液加人，混合均匀后，分装于容器中。
Ａ． １． ２．４ ＶＡ １０３．７ ｋＰａ灭菌２０ ｍｉｎ－３０ ｍｉｎ，Ａ．１ ． ３用途
供鉴定沙门氏菌用。
Ａ．２
Ａ．２，麦康凯琼脂
Ａ．２．Ａ． ２．
Ａ． ２．Ａ２．
Ａ．２．１成分蛋白脉２０ ｇ
乳搪１０ｇ
抓化钠５９
胆盐５９中性红水溶液（（１００） ０．５ｍＬ琼脂粉１３ｇ
蒸馏水１ ０００ ｍＬ
２制法２．１除中性红溶液外，其他成分混合，加热溶解。２．２待琼脂完全溶化后，以氢氧化钠（ＮａＯＨ）溶液调整ｐＨ至７．４．
２．３加人中性红水溶液，混合均匀后，分装于容器中。
２．４以１０３． ７ ｋＰａ灭菌２０ ｍｉｎ－３０ ｍｉｎ．
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Ａ． ２．３用途 供分离培养沙门氏菌、大肠杆菌等肠道菌用。
Ａ． ３亚硒酸盐煌绿增菌培养基（ＳＢ培养基）
Ａ．１ １成分 酵母浸出粉５９ 蛋白脉１０ｇ
甘露醉５９ 牛磺胆酸钠１． ０ ｇ 磷酸氢二钾（Ｋ２ＨＰ０，） ２． ６５ ｇ 磷酸二氢钾（ＫＨ２Ｐ０４） １． ０２ ｇ
亚硒酸氢钠４９ 新鲜０．１％煌绿水溶液５ ｍｌ．
蒸馏水１ ０００ ｍｌ－
Ａ． ３．２制法Ａ． ３． ２． １除亚硒酸氢钠和煌绿溶液外，其他成分混合于８００ ｍＬ燕馏水中，加热煮沸溶解，冷至６０ Ｃ
以下，待用。Ａ． ３．２．２将亚硒酸氢钠加人，再加２００ ｍＬ蒸馏水加热煮沸溶解，冷至６０℃以下，待用。
Ａ． ３．２．３将煌绿溶液加人，调整ｐＨ至６．９－７－１．
Ａ． ３．３用途 为沙门氏菌选择性增菌培养基。
Ａ．４四硫成酸钠煌绿增菌培养基（ＴＢ培养若）
Ａ．４．１成分 际蛋白陈或多价蛋白脉５ｇ
胆盐１． ０ ｇ 碳酸钙１０ｇ 硫代硫酸钠３０ ｇ
。．１写煌绿溶液１０ ＭＩ． 碘溶液２０ ｍＬ 蒸馏水１ ０００ ｍＬ
Ａ． ４．２制法Ａ． ４． ２． １除碘溶液和煌绿涪液外，其他成分混合与水中，加热溶解，分装于中号试管或玻瓶，试管每支
１０ ｍＬ，玻瓶每瓶１００ ＭＩ。在分装时不断振摇，使碳酸钙均匀地分装于试管或玻瓶。经１１２ ｋＰａ １５ ｍｉｎ
高压灭菌，备用。Ａ． ４．２．２临用时，每１０ ｍＬ或１００ ｍｌ上述混合溶液中，加人碘溶液０． ２ ｍｌ或２ ｍｌ）和。１％煌绿溶
液０． １ ｍＬ或１ ｍＬ（碘溶液由碘片６ｇ、碘化钾５ｇ，加２０ ｍＬ灭菌的蒸馏水配制而成）。
Ａ．４．３用途 供沙门氏菌增菌培养用。
５三精铁培养基
５． １成分 牛肉浸粉Ａ
Ａ５只
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酵母浸粉３９
酵母浸出粉２．５９ 抓化钠５９ 肪蛋白脉７． ５９
蛋白陈７． ５ ｇ 琼脂粉１５ｇ
乳糖１０ｇ
蔗糖１０ｇ 葡萄糖１． ０ ｇ
硫酸亚铁。２９ 硫代硫酸钠１． ８ ｇ
１写酚红０． ２ ｍＬ 蒸馏水１ ０００ ｍＬ
５．２制法５． ２，除糖类和酚红外，其他成分混合于水中，加热溶解。５．２．２调整ｐＨ至７．４－７． ６，再加糖类及指示剂，混匀。
５．２－３分装于试管中。
５．２．４５．３ 以１０３．７ ｋＰａ灭菌２０ ｍｉｎ－３０ ｍｉｎ，趁热取出，制成斜面，斜面及底层应各占二分之一为宜。
用途Ａ
ＡＡＡＡＡ 供鉴别肠道菌用。
Ａ．６赖氮酸铁琼脂
Ａ．６．１成分 蛋白陈５９ 酵母浸粉３９ 柠檬酸铁铁。．５９ 硫代硫酸钠０． ０４ ｇ １．一赖氨酸１０ｇ
葡萄糖１． ０ ｇ 澳甲酚紫。，０２ ｇ 琼脂１３ｇ
水１ ０００ ｍＬ
ｐＨ ６．５－６．９
Ａ． ６．２制法 除琼脂、指示剂外称取各成分，加于水中，加热溶解。调整ｐＨ至６．５－６．９，加人指示剂及琼脂溶解
后分装试管。１０３．７ ｋＰａ ２０ ｍｉｎ高压灭菌。制成高层斜面。
Ａ．６．３用途 肠道细菌生化鉴定用。