肺炎克雷伯菌院感分布及耐药性分析摘要：目的分析该院2015年1月-2016年12月临床分离的肺炎克雷伯菌（Kpn）的分布情况及耐药性，指导临床合理用药，控制肺炎克雷伯菌的医院感染。
方法：对临床分离出来的286株肺炎克雷伯菌进行标本，科室分布的统计及耐药性分析，并对其中多重耐药肺炎克雷伯菌作ESBLs，AmpC酶，碳青霉烯酶，新德里金属β内酰胺酶（NDM-1）等试验。
结果286株肺炎克雷伯菌主要来自痰液，占79.72%（228/286），其次为尿液及伤口分泌物，分别占8.74%（25/286），5.59%（16/286）；主要分布于ICU，呼吸内科，分别占56.29%（161/286），27.62%（79/286），产ESBLs肺炎克雷伯菌检出162株，检出率为56.64%（162/286），产AmpC酶检出39株，检出率为13.64%（39/286），产KPC酶28株，检出率为9.79%（28/286），产NDM-1检出2株，检出率为0.70%（2/286）。
结论该院肺炎克雷伯菌主要分离自痰标本，以ICU感染最为严重，其次为呼吸内科，肺炎克雷伯菌的耐药率比较高，且耐药表型多样，对多重耐药株检测耐药机制非常重要，以便控制医院的感染。
关键词：多重耐药肺炎克雷伯菌；超广谱β-内酰胺酶；药敏试验；医院感染Distribution and drug resistance analysis of nosocomial infection ofKlebsiella pneumoniaeXiao Qi-guo Tang Mei-hua（Department of Clinical laboratory，Central Hospitalof Hengyang City，Hunan 421001，China）【Abstract】Objective To analyze the distribution and drug resistance of Klebsiella pneumoniae（Kpn）isolated from clinical patients in the hospital during January 2015 to December 2016，and to guide rational drug use in clinic and control nosocomial infection of Klebsiella pneumoniae.Method A total of 286 strains of Klebsiella pneumoniae isolated from clinical patients were collected，the specimen Department Distribution and drug resistance were analyed.ESBLs，AmpCenzyme，carbapenemase and NDM-1enzymes tests were carried out with multidrug resistant Klebsiella pneumoniae.Results The 286 strains of Klebsiella pneumoniae were mainly isolated from sputum，accounting for 79.72%（228/286），followed by urine and wound secretions，accounting for 8.74%（25/286）and 5.59%（16/286）respectively；The strains were Mainly distributed in ICU and respiratory medicine department，accounting for 56.29%（161/286）and 27.62%（79/286）respectively，162 strains producing ESBLs Klebsiella pneumoniae were detected，the detection rate was 56.64%（162/286），39 strains producing AmpC enzyme were detected，the detection rate was 13.64%（39/286），28 strains producing KPC enzyme were detected，the detection rate was 9.79%（28/286），2 strains producing NDM-1 enzyme were detected，the detection rate was 0.70%（2/286）.Conlusion Klebsiella pneumoniae was mainly isolated from sputum specimens in the hospital，most seriously infected was ICU，followed by respiratory medicine department，the resistance rate of Klebsiella pneumoniae was relatively high，and the phenotype of drug resistance was diverse.It is very important to detect the mechanism of multidrug resistance in order to control nosocomial infection.【Key words】 Multi drug resistant Klebsiella pneumoniae Extended spectrum beta lactamases Drug sensitivity test nosocomial infection肺炎克雷伯菌（Kpn）作为一种常见的病原体类型，广泛分布于人体皮肤中，鼻咽部及呼吸道，肠道以及自然界的水土中[1]。
常定植于人体呼吸道与肠道，可通过侵入性操作侵犯伤口和泌尿道而引起感染，当人体免疫力降低时，可以引起较为严重的感染，甚至败血症[2-4]。
近年来，由于各类广谱抗菌药物大量应用于临床，同时激素，免疫抑制剂的使用也在不断增多，特别是三代头孢菌素的广泛使用，细菌在药物的选择压力下获得多重耐药性等，产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株的出现，使其耐药性日趋严峻[5]，对于产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌科细菌感染的治疗，目前临床中主要是应用碳青霉烯类抗生素，临床治疗效果显著，对于临床分离的肺炎克雷伯菌，主要是以产AmpC酶，碳青霉烯酶以及超广谱β-内酰胺酶。
此次样本研究对象都是收录于我医院分离的多重耐药肺炎克雷伯菌，并对肺炎克雷伯菌进行耐药性分析，旨在对临床合理用药产生指导性意义，并对此种细菌的院内感染加以有效控制。
现进行具体阐述。
1.材料与方法1.1基线资料参与此次样本分析对象都是收录于来我医院进行治疗患者，收入时间范围控制在2015.1至2016.12，取患者痰，咽拭子，尿，血液等标本分离的286株肺炎克雷伯菌。
1.2仪器与试剂包括：①TDR-300B微生物鉴定分析仪；②离心机；③MH琼脂平板；④比浊仪；⑤游标卡尺；⑥OXOID药敏纸片；⑦三洋低温冰箱MDFU32V；⑧ESBLs检测试剂盒。
1.3方法1.3.1药敏试验依据CLSI（美国临床实验室标准化委员会）2014年版[8]的具体规定。
采用纸片法（K-B法）和最低抑菌浓度（mic）试验检测KPN对以下药物的耐药性：a.头孢曲松，b..哌拉西林/他唑巴坦，c.阿米卡星，d.头孢唑林，e.头孢他啶，f.哌拉西林，g.头孢呋辛，h.氨苄西林/舒巴坦，i.头孢吡肟，j.氨苄西林，k.头孢噻肟，l.妥布霉素，m.头孢西丁，n.庆大霉素，o.氨曲南，p.左氧氟沙星，q.亚胺培南，r.洛美沙星，s.环丙沙星，t.复方新诺明。
1.3.2 产超广谱β-内酰胺酶的表型筛选与确证筛选出药敏试验中的疑产超广谱β-内酰胺酶菌株，包括抑菌环直径头孢他啶小于或等于22 毫米，头孢噻肟小于或等于27 毫米，头孢曲松不大于25 毫米以及氨曲南小于或等于27毫米。
使用K-B纸片扩散法对疑产超广谱β-内酰胺酶菌株进行试验确证，使用复合纸片进行试验，包括：a.30微克的头孢他啶，b.30微克头孢噻肟纸片，c.30微克的头孢他啶/10微克的克拉维酸，d.30微克的头孢噻肟/10微克的克拉维酸，如果复合药敏纸片中的抑菌圈直径与其单独药敏纸片抑菌圈直径之差≥5 mm，即可确认为产 ESBLs株。
1.3.3筛查碳青霉烯酶表型的试验根据2014年版的美国临床实验室标准化委员会标准，使用琼脂扩散法，如果10微克美罗培南或者10微克亚胺培南的抑菌圈直径呈现出小于或等于22毫米的最终状态，则说明表型筛查结果呈现阳性。
1.3.4确诊新德里金属β内酰胺酶表型的试验采用10微克亚胺培南或者10微克美洛培南，1500微克EDTA两种纸片，用K-B法进行双纸片协同试验，确保两种纸片的距离控制在10至15毫米，如果美洛培南或亚胺培南抑菌圈直径在含EDTA纸片方向处逐渐变大，则说明存在金属酶；复合纸片K-B法采用10微克亚胺培南或者10微克美洛培南/EDTA 的复合纸片，与单药纸片相比，复合纸片的抑菌圈直径增大值大于或等于5毫米，即可判定产金属酶。
1.3.5 改良霍奇试验制备好0.5的麦氏浊度的大肠埃希菌ATCC25922菌悬液，然后将菌悬液进行10倍稀释，并使用棉签将其均匀的涂布于MH平板中，然后在平板中央贴含10微克美洛培南的纸片。
使用接种环挑取受试菌自纸片边缘向平板边缘划线接种。
35。
C孵育过夜，如果矢状生长存在于美洛培南抑菌圈与待测菌株接种线交界处，则说明碳青霉烯酶呈现阳性。
1.3.5 AmpCβ内酰胺酶的表型筛选以及确认用头孢西丁（FOX）纸片使用琼脂扩散法检测临床分离菌株。
当抑菌圈直径小于或等于18毫米时，说明对FOX产生耐药或中介，可能为产生AmpCβ内酰胺酶菌株，提示AmpCβ内酰胺酶表型筛选呈现阳性；AmpCβ内酰胺酶的确认实验：FOX三维确认试验是检测AmpC酶的经典方法，在涂布了0.5麦氏浊度大肠埃希菌标准菌株的平板上贴头孢西丁纸片，向离心方向使用无菌刀片切一裂隙，距纸片边缘5毫米处，将30至40微升的待检菌株β-内酰胺酶初提液（过滤或低温超速离心除去活菌）加入进裂缝当中，并防止酶的初提液溢出裂隙，进行过夜培养，温度在35。