4.3.4.3精子的活力评定:
4.3.4.3.1精子活力的表示有两种方法:一种是欧美习惯用法,由世界卫生组织和国标识+、++、+++表示,在我国沿用前苏联的方法,以0—9级表示。
4.3.4.3.2按欧美的表示方法是:取10—100微升原精液,置干净的载玻片上,用22平方毫米的盖玻片盖上,在400倍光镜观察10个不同视野下必须有100个以上的精子,分别记录活动的状况,以0—4级统计精子运动的方向,活动力强弱,分别记录各级活动精子的百分率。
0、“0”无精子运动,为死精。
1、“+”精子运动较差,为颤动或摆动。
2、“++”精子运动尚可,可见向前运动,但速度很慢。
3、“+++”精子运动很好,向前运动较快。
4、“++++”精子运动极好,迅速向前运动。
4.3.4.3.3精子运动力与受精力关系密切。在猪人工授精中原精活力低于于国内目前习惯评定0.7级,相当于欧美以及日本和台湾“+++”,冷冻精液解迸发后不低于3级(++),即目前习惯上的0.6级。精子的运动力的测定在猪人工授精中尚缺统一的标准。
4.3.4.3.4精子运动力是生殖力的重要的一项属性,没有高活性运动力的精子,其受精力是非常低的。
4.3.4.4精子形态的检查
4.3.4.4.1取精液样本一滴与10%福尔马林相混合均匀,盖上盖玻片在相差显微镜400—600倍下观察。
4.3.4.4.2取10ml试管内盛伊红染液(1%)1ml,加入精液0.2ml,置于37℃水浴锅中恒温浸染20分钟,取一滴伊红染后的精液,再滴加一滴5%苯胺黑或苯胺兰混匀染色后抹片,用显微镜在640或800倍下观察,死精子染为红色,清活子不着色。每个秣片观察200个以上的精子,得到活畜。然后观察分类计数,正常头、大头、小头、梨形头、双头、双颈、双尾、无头、断尾、折尾、卷尾、颈和中断含有原生质滴以及稚形未成熟的精子等。正常形态精子在鲜精中应不低于82%,保存过的精液正常精子的不低于80%。
4.3.4.5精子对1%氯化钠的抵抗力
4.3.4.5.1此法由前苏联1934年提出,被称为精子抗菌素力试验。方法是彩定量的精液(0.02毫升),每次加入10毫升的1%氯化钠溶液,混匀后镜检精子活动直到全抗力系数=加入氯化钠溶液的总量÷所取原精液的量。
4.3.4.5.2为缩短时间,可以改为逐级扩大稀释的方法,一般要求在15分钟内。测定时的室温应保持18—25℃。
4.3.4.5.3抗力系的高低,反映了精子容忍偏高渗溶液和高倍稀释的能力,猪的抗力系数为2000—5000。
4.3.5精液的稀释、分装与运输
4.3.5.1好的稀释液应具备的条件
4.3.5.1.1具有良好的缓冲能力
4.3.5.1.2具有一定的能量
4.3.5.1.3具有与精液几乎一样的渗透压
4.3.5.1.4具有良好的卫生条件
4.3.5.1.5具有良好的抗微生物繁殖的能力
4.3.5.1.6具有精子能生存的ph值,且有助于精子的保护
4.3.5.1.7具有良好的控制细菌生长的能力,防止细菌对精子造成威害
4.3.5.2稀释液的准备:常用的稀释剂有KIEV、BTS、20RPVA。
成 分 BTS Guelph Zorpva Reading Modena
保存时间(天) 3 3 5 5 5
D一号葡萄糖 37.15 60.00 11.50 11.50 27.5
柠檬酸三钠 6.00 3.70 11.65 11.65 6.9
EDTA钠盐 1.25 3.70 2.35 2.35 2.35
硫酸氢钠 1.25 1.20 1.75 1.75 1 氢化钾 0.75 0.75
青霉素钠 0.60 50万单位 0.60 160万
硫酸链霉素 1.00 0.50 1.00 0.50 100万
聚乙稀醇(PVP、Typell) 1.00 1.00
三羟甲基氨基甲烷 5.50 5.50 5.65
柠檬酸 4.10 4.10 2.9
半胱胺酸 0.07 0.07
海藻糖 1.00
林肯霉素 1.00