第1页 绞股蓝皂甙的提取研究 摘 要 本文主要研究绞股蓝皂甙的提取工艺，采用单因素法及正交设计法，以绞股蓝皂甙提取量为参考指标，对影响绞股蓝皂甙提取工艺的因素进行优选，结果表明，绞股蓝皂甙的最佳提取工艺为：浸提温度为100℃，浸提时间为1.5h～2.0h，浸提溶剂量为50倍。
关键词：绞股蓝皂甙；提取工艺；单因素法；正交设计 第1页
目 录 引言…………………………………………..……………………………………… 4 1材料与方法…………………………………..……………………..………………4 1.1实验材料 ………………………………………………………….……………4 1.2实验试剂………………………………………………………….………………5 1.3实验仪器…………………………………………..…………...…………………5 1.4绞股蓝皂甙的提取研究………………………………..…………...……………5 1.5绞股蓝皂甙含量的测定………………………………………………………… 5 1.5.1预处理 …………………………………………………………………………5 1.5.2样品液的配制 …………………………………………………………………5 1.5.3标准液的配制 …………………………………………………………………6 1.5.4结果计算 ………………………………………………………………………6 1.6 实验分析方法 …………………………………………………………………6 1.6.1. 单因素法………………………………………………………………………6 1.6.2. 正交设计法……………………………………………………………………7 2结果…………………………………………………………………………………7 2.1单因素法分析对绞股蓝皂甙得率的影响……………….………………………7 2.1.1浸提时间对绞股蓝皂甙得率的影响……………………….………………… 7 2.1.2浸提温度对绞股蓝皂甙得率的影响 …………………………………………8 2.1.3浸提溶剂量对绞股蓝皂甙得率的影响…………………………………….… 8 2.2正交设计法分析绞股蓝皂甙的最适提取条件 ……….……………………......9 3 讨论 ………………….………………………………………………………… 10 3.1绞股蓝干样与鲜样的选择………………………………………………………10 3.2标准品的选择 ……….………………………………………………………… 10 3.3最大波长的选择 …….………………………………………………………… 10 3.4净化方法的选择 …….………………………………………………………… 10 第1页
3.5绞股蓝皂甙提取温度的选择 ………………………………… ……………… 10 3.6 绞股蓝皂甙提取时间的选择 ………………………………… ………………10 4结论.…………………………………………………………….………………….11 5参考文献……………………………………………………….…………………. 12
引 言 绞股蓝 (Oynostemma pentaphyllum(Thunb)makino) 系葫芦科绞股蓝属多年生草本植物，绞股蓝在长江以南的地区均有分布，野生资源丰富。它的医疗和保健价值已有研究报道。在临床上除普遍用作防癌药物外 ，对白细胞减少症 、高血脂症及胃溃疡、肝炎等均有确切疗效。系统药理学和临床试验也证明：绞股蓝中含有独特的生物活性物质，其主要有效成分为人参皂甙、黄酮类物质、多糖以及多种氨基酸和微量元素[1]。因此，已有以绞股蓝为原料研制各种保健品的报道。有些产品(如饮料、医药品和食品添加剂等)需要先浸提。绞股蓝总皂苷片作为药品已经上市多年，用于高脂血症，见有心悸气短、胸闷肢麻、眩晕头痛、健忘耳鸣、自汗乏力或脘腹胀满等心脾气虚、痰阻血瘀者。所以绞股蓝皂甙，可以有效的调节儿童生理机能、增强肌体免疫力、清除激素类药物副作用、抗癌、抗疲劳、抗缺氧、抗热、抗衰老、促进细胞新陈代谢，强壮补矗等作用。对大脑中枢有良好的镇静、兴奋双向调节作用及白嫩肌肤等功能．且无毒副作用，无三致作用，是目前医药及保健品行业大量需要的原料[2-4]。 为了最大限度提取并保持绞股蓝的有效成分，保证绞股蓝药材资源的充分利用，提高经济效益，本文以绞股蓝为材料，设置浸提温度、浸提时间、浸提溶剂量3个因素，采用单因素法和正交实验设计，研究提取绞股蓝皂甙保健成分的最佳浸提条件，从而使绞股蓝的有效成分能得到充分利用。此工艺提取物质质量好，生产成本低，提取速度快，其中所含的保健因子适合应用于各类保健品中[5,6]。
1 材料与方法 1.1实验材料 第1页
绞股蓝，浙江缙云 1.2实验试剂 香兰素冰醋酸溶液：称取5g香兰素，加冰已酸溶解并定溶至100ml 高氯酸：分析纯 天津市鑫源化工厂 20060902 人参皂甙Re粉：中国药品生物制品检定所 PT大孔树脂：南开大学试剂厂 人参皂甙Re标准溶液：精确称取人参皂甙Re标准品0.020g，用甲醇溶解并定容至10.0 ml：即每毫升含人参皂甙Re2.0m g 冰醋酸：分析纯 国药集团化学试剂有限公司 20070911
1.3实验仪器 双联打浆机,型号 MDJ 真空浸提灌,型号SLG-500 电热鼓风干燥箱, 型号DGF-5AB 20目细度的滤布, 夹层锅, 型号100L 恒温水浴锅，浙江海宁新华医疗器械厂，型号HHS-2 大孔树脂预柱，江苏省江阴第二医疗器械厂，型号DT 微量进样管，宁波市镇海玻璃仪器厂 电子天平，余姚市金诺天平仪器有限公司，型号JT 721分光光度计，上海精密科学仪器有限公司，型号16C14
1.4绞股蓝皂甙的提取 称取1g绞股蓝样品→放入高型烧杯→加入50ml水→盖上表面皿→温度控制在100℃→提取过程中每 5 min搅拌1次→水提1.5h左右→浸提后用滤纸过滤定容至100 ml。
1.5绞股蓝皂甙含量的测定步骤 第1页
1.5.1预处理 用25ml纯化水洗柱，洗液弃去（水洗）→ 用25ml70％的酒精洗柱，洗液弃去（酒精洗）→再用25ml纯化水洗柱，洗液弃去（再水洗） 1.5.2样品液的配制 用1ml移液管移取1ml样品入柱→用25ml纯化水洗柱，洗液弃去→用25ml70％的酒精洗柱，接收洗液（可用25ml容量瓶，也可用蒸发皿直接接收）→60℃水浴挥干（注：水温不高于70℃）→加入0.2ml5％的香兰素冰醋酸溶液（用1ml吸管吸）→加0.8ml高氯酸（分两次加，洗涤蒸发皿）→60℃水浴→10min迅速冷却→加5ml冰醋酸，混匀，倒进10ml的比色皿中，比色，波长560nm，与标准管一起比色测定 1.5.3标准液的配制 精密称取人参皂苷 Re标准溶液（2.0mg/ml）50ul放入具塞试管中→加入新配置的0.2ml5％的香兰素冰醋酸溶液（用1ml吸管吸）→加0.8ml高氯酸（分两次加，洗涤蒸发皿）→60℃水浴，10min迅速冷却→加5ml冰醋酸，摇匀，作为供试品溶液→另取15 ml具塞试管中→加入新配置的0.2ml5％的香兰素冰醋酸溶液（用1ml吸管吸）→加0.8ml高氯酸（分两次加，洗涤蒸发皿）→60℃水浴，10min迅速冷却→加5ml冰醋酸，摇匀，作为空白溶液→取供试品溶液和空白溶液，在 560 nm的波长处分别测定吸收度。 1.5.4结果计算
X= A1 ×C÷ V × 100 × 1 A2 m 1000 1000 X----试样中总皂甙量,g/100g
A1----测液的吸光度值 A2----标准液的吸光度值 C----标准管人参皂甙Re的量,ug V----试样稀释体积ml m----试样质量
1.6 实验分析方法 第1页
1.6.1. 单因素法 根据初步试验结果，选用三个单因素，分别为浸提温度，浸提时间，浸提溶剂量，并且每因素选择3个水平进行试验，以绞股蓝皂甙得率为考察指标进行优选。 1.6.2. 正交设计法 根据初步试验结果，选用三因素三水平正交试验表，以温度(A)、料液比(B)、提取时间(C)为试验因素，每个因素取 3个水平(见表 1)。取样品，并按照正交设计进行实验，以绞股蓝总皂苷的提取量为考察指标，进行提取工艺的优选。 表1 正交设计水平、因素编码表
2 结果 2.1单因素法分析对绞股蓝皂甙得率的影响 2.1.1浸提时间对绞股蓝皂甙得率的影响 绞股蓝原料的总质量约为1g，在温度为100℃,在料液比为1:50的条件下，在不同的时间下浸提,结果见表2。 表2 浸提时间对绞股蓝皂甙得率的影响
水 平 因 素 A B C （温度/℃） （料:液） （时间/h） 1 60 1:40 1.0 2 80 1:50 1.5 3 100 1:60 2.0 第1页
从表2可以看出，浸提时间对绞股蓝皂甙的浸出率影响较大，有增加的趋势， 1.5h~2.0 h的浸出率达到最高值。 2.1.2浸提温度对绞股蓝皂甙得率的影响 绞股蓝原料的总质量约为1g，料液比为1:50，浸提时间为1.5h~2.0 h的前提下, 在不同的温度下浸提,结果见表3。 表3 浸提温度对绞股蓝皂甙得率的影响
从表3可以看出，随浸提温度的升高，绞股蓝皂甙的浸出率呈逐渐增加的趋势，100℃时的浸出率达到最高。 2.1.3浸提溶剂对绞股蓝皂甙得率的影响 绞股蓝原料的总质量为1g，浸提时间为1.5h~2.0 h，温度为100℃，在浸提溶剂不同的条件下浸提，结果见表4。 表4浸提溶剂对绞股蓝皂甙得率的影响
浸提时间（h） 绞股蓝原料的总质量（g） 绞股蓝皂甙含量（mg） 得率（%） 1 1.006 13.078 1.30 1.5 1.003 14.844 1.48 2 1.006 14.889 1.48
温度(℃) 绞股蓝原料的总质量（g） 绞股蓝皂甙含量（mg） 得率（%） 60 1.008 9.274 0.92 80 1.009 9.383 0.93 100 1.003 14.844 1.48