第24卷第5期 2012年5月
化学研究与应用
Chemical Research and Application Vo1.24,No.5
May,2012
文章编号:1004—1656(2012)05-0715-07
红花黄色素抗氧化活性研究
张欢,张立伟。 (山西大学分子科学研究所,山西太原030006)
摘要:通过考察红花黄色素(sY)及其主要化学成分对羟基自由基介导2・脱氧核糖氧化降解的抑制作用,以及 对1,1.二苯基-2.苦肼基自由基(DPPH・)的清除能力,探究sY的体外抗氧化活性及其抗氧化的主要有效成 分。通过Fenton反应产生羟基自由基,用紫外分光光度计检测了sY及其主要化学成分对2-脱氧核糖降解的 抑制作用和对DPPH・的清除能力,同时对红花黄色素B(SYB)抑制2-脱氧核糖降解的作用机制做了初步研 究。结果表明sY抑制Fenton反应对2-脱氧核糖的氧化降解的, 为256.79 g/mL,对DPPH・清除的‰值 为27.15 0eJmL。羟基红花黄色素A(HSYA)和SYB是sY中抗氧化的两个有效成分,抑制2・脱氧核糖的氧 化降解的 分别为220.68 p.g/mL和207.01 Izg/mL;对DPPH・清除的, 值分别为55.8l s/mL和41.25 p.g/mL。SYB对2-脱氧核糖氧化降解的抑制作用机理研究表明,SYB除了对Fenton反应产生的羟基自由基 具有直接清除作用外,又可通过与Fe 离子的络合作用而阻断Fenton反应产生羟基自由基。由此可知sY具 有明显的体外抗氧化活性,SYB和HSYA为其主要抗氧化活性成分。 关键词:红花黄色素;Fenton反应;DPPH・;抗氧化 中图分类号:TS201 文献标识码:A
Study on the antioxidation of safflower yellow ZHANG Huan,ZHANG Li—wei’ (Institute of Molecular Science,Shanxi University,Taiyuan 030006,China)
Abstract:To explore the antioxidant activity of Safflower yellow(sY)and its main active ingredient,the inhibition of2-deoxyribose degradation induced by hydroxyl radical and the ability of scavenging DPPH・was examined.Hydroxyl radical was produced through the Fenton reaction.The protection ability of SY and its main chemical components on 2-deoxyribose degradation induced by hydrox- yl radical,and the ability of scavenging DPPH・were examined in vitro by UV spectrophotometer.At the same time,the mechanism of Safflower yellow B(SYB)inhibiting the degradation of 2-deoxyribose had been studied.Results showed that SY could inhibit the degradation of 2-deoxyribose induced by hydroxyl radica1.SY could also eliminate DPPH・effectively.The lC was 256.79 mL and 27.15 t ̄,/mL respectively,and both of them showed a dose-effect relationship.Hydroxy safflower yellow A(HSYA)and SYB were two main active compounds in SY.The lC of inhibition 2-deoxyribose degradation was 220.68 txe,/mL and 207.O1 I. ̄g/mL。 and the of scavenging DPPH・was 55.81 s/mL and 41.25 I ̄g/mL respectively.The results of mechanism test showed that,a- part from direct scavenging the hydroxyl radicals produced by the Fenton reaction,SYB could also chelated with iron ions and block Fenton reaction.So SY had a significant antioxidation activity,while SYB and HSYA were main ingredients in SY.
Key words:safflower yellow;Fenton chemistry;DPPH・;antioxidation
收稿日期:2012-01-05;修回日期:2012 ̄2-29 基金项目:科技部十二.五“重大新药创制”科技重大专项项目(2011ZX09201-201-06)资助;山西省回国留学人员科研基金项目 (No.2009003)资助 联系人简介:张立伟(1963・),男,教授,研究方向为天然产物。E-mail:1wzhang@SXU.edtr crl 716 化学研究与应用 第24卷 众所周知,自由基对生物体的危害非常大,它 会引起脂质过氧化反应,破坏机体中细胞膜的结 构,对生物体造成损伤。现代药理研究表明,癌 症、心脑血管疾病及衰老都与自由基有着密切的 联系 。因而,天然抗氧化剂的筛选研究是目前 研究的热点。 红花为菊科植物红花(Carthamus tinctorius L.) 的干燥管状花,为传统的活血化瘀中药。从红花中 提取的水溶性红花黄色素是红花中主要的抗氧化 组分 J,可以清除羟自由基、抑制脂质过氧化,保 护脑缺血损伤,保护心肌,保护神经免受损伤_3引。 为了深入探讨红花黄色素的抗氧化有效成分,本 实验利用大孔吸附树脂LSA-21和制备色谱对红 花黄色素进行了不同层次的分离,分别比较了各 层次分离产物对羟基自由基介导的2一脱氧核糖氧 化损伤的保护作用,以及对DPPH・的清除能力,并 对SYB抑制2-脱氧核糖氧化降解的作用机制进行 了初步探讨,旨在筛选红花抗氧化活性成分或组 分,并为红花的药理作用机制研究提供科学依据。 1材料与方法 1.1材料与试剂 红花药材由太原华卫药业有限公司提供;羟 基红花黄色素A对照品中国药品生物制品检验所 (批号:111637-200905);红花黄色素B对照品实 验室自制;2.脱氧核糖上海源叶生物科技有限公 司;DPPH・上海索莱宝生物科技有限公司;其他试 剂均为国产分析纯,所用水为自制蒸馏水。 1.2仪器与设备 HP8453 UV—Vis吸收光谱仪美国惠普公司; Scientz一12N冷冻干燥机宁波新芝生物科技股份有 限公司;Agilent 1200型高效液相色谱仪美国安捷 伦公司。 1.3方法 1.3.1 红花黄色素各样品制备按文献 方法 操作,略有改动。准确称取红花药材100 g,加10 倍水60℃下提取50 min,过滤,药渣再加lO倍水 80 cc下提取50 min,过滤,合并两次提取液,并减 压浓缩为0.8 g/mL的药液。大孔吸附树脂LsA一 21(药材与树脂质量比为l:4)进行分离,水洗除 杂,醇一水体系梯度洗脱,收集15%乙醇、30%乙醇 和40%乙醇洗脱液,冷冻干燥,获得固形物质量分 别为4.86 g、0.81 g和3.20 g,得率分别为 4.86%、0.81%和3.20%。依次标记为组分1、组 分2和组分3;提取浓缩液经大孔吸附树脂LSA一 21吸附后,先用水洗除杂,然后直接用70%乙醇 洗脱、减压浓缩、冷冻干燥,得总黄色素(SY)11.50 g,得率11.50%。组分1和组分3经制备型高效 液相色谱仪反复纯化,分别得到HSYA和SYB单 体化合物。利用HPLC分析各个组分的成分组成 或相对含量。 色谱条件:色谱柱ZORBAX SB.C18(4.6 mm ̄ 250 mm,5 p,m),流动相CH3OH(A)和H2O(0.2 mol/L NaCIO -0.3%o HCIO )(B)梯度洗脱0-8 min 15%A-35%A,8—15 min 35%A-40%A,15—17 rain 40%A-40%A,17—20 min 40%A一15%A,流速l mL/min,柱温40℃,检测波长402 1"111"1,进样20 L。 1.3.2样品溶液配制称取按1.3.1方法制备的 红花黄色素样品(组分1、组分2、组分3、SY、HSYA 与SYB)适量,用水配制成质量浓度均为l0 me/mL 的样液。称取SYB样品适量,加水配制成摩尔浓度 为2 mmol/L的样品溶液,用于做2一脱氧核糖降解 机理研究。称取EDTA.二钠7.4 mg于10 mL容量 瓶中,加水定容至刻度,配制成2 mmol/L的EDTA 溶液。称取Fe(NH ):(SO ) ・6H O 39.2 mg于50 mL容量瓶中,加适量水溶解,再加入36.5%的盐酸 500 ,加水定容至刻度,配制为2 mmol/L的Fe“ 溶液。 1.3.3 2.脱氧核糖氧化损伤检测 按文献 方 法操作。通过Fenton反应产生羟基自由基,由于 羟基自由基可以使2.脱氧核糖氧化降解,降解物 又可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应显色,生成物 在波长532 nm有最大吸收峰 J,因此,体系中加 人样品后,可以通过测定As32值的变化间接反映样 品对羟基自由基介导的2.脱氧核糖降解的保护作 用或对羟基自由基的清除作用。反应液总体积为 4.5 mL,实验步骤为:将红花黄色素样品溶液稀配 为0.2 mg/mL、1 me/mE、2 me/mL、5 me/mE、8