73第15卷 第2期 2013 年 2 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 15 No. 2 Feb .，2013
益母草（Leonurus japonicus Houtt.）为唇形科植物科植物益母草的新鲜或干燥地上部分，具有活血调经、利尿消肿、清热解毒之功效，用于月经不调、痛经经闭、恶露不尽、水肿尿少、疮疡肿毒，全国各地均有野生或栽培，其主要成分包括盐酸水苏碱、盐酸益母草碱等。为了保证益母草饮片质量稳定可控，本研究采用高效液相色谱法对益母草盐酸益母草含量进行研究，为益母草饮片质量标准研究提供依据。1 仪器、药品与试剂1.1 仪器Agilent 1200型高效液相色谱仪，包括1200系列四元梯度泵、1200系列 DAD 检测器、1200化学工作站（美国Agilent公司），超声波清洗器，分析天平，具塞锥形瓶、漏斗滤纸、蒸发皿、水浴锅、容量瓶等。1.2 试剂与药品盐酸水苏碱对照品，盐酸益母草碱对照品（成都曼思特生物科技有限公司），益母草饮片，乙腈（色谱纯），水为重蒸馏水，磷酸、辛烷磺酸钠、冰醋酸、无水乙醇为分析纯。2 方法与结果2.1 对照品溶液的制备 2.1.1 盐酸水苏碱对照品储备液的制备精密称取盐酸水苏碱对照品50 mg，置10 mL容量瓶中，加70%乙醇制成每毫升含5 mg的溶液，摇匀，即得。2.1.2 盐酸益母草碱对照品储备液的制备精密称取盐酸益母草碱对照品6 mg置10 mL容量瓶中，加70%乙醇制成每毫升含0.6 mg的溶液，摇匀，即得。2.2 供试品溶液的制备 取益母草粉末（过三号筛）约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，称定重量，加热回流2 h，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，供试品溶液使用前均以0.45 μm微孔滤膜过滤，进样。2.3 色谱条件与系统适用性试验SCX强阳离子柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：0.5 mol磷酸二氢钾-三乙胺（1000∶1.5）（磷酸调pH值2.25~2.3）；检测波长：192 nm；流速益母草饮片中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱含量测定张玉萌，项菲菲（解放军总医院海南分院药剂科，海南 三亚 572004）摘 要：目的：建立益母草饮片中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱的含量测定方法，为其质量控制提供依据。方法：采用高效液相色谱法对益母草饮片中盐酸水苏碱的含量进行测定，色谱柱：SCX强阳离子柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：0.5 mol磷酸二氢钾-三乙胺（1 000∶1.5）（磷酸调pH值2.25~2.3）；检测波长：192 nm；流速1.0 mL·min-1；柱温：25℃。结果：盐酸水苏碱的浓度在0.2~2.0 mg·mL-1范围内线性关系良好，RSD=1.7%（n=5） ；盐酸益母草碱的浓度在0.2~2.0 mg·mL-1范围内线性关系良好，RSD=0.08%（n=5）。结论：该法简便、灵敏、准确，可用于益母草饮片的质量控制。关键词：益母草；HPLC；盐酸水苏碱；盐酸益母草碱中图分类号：R927.2 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2013) 02- 0073- 02
收稿日期：2012-08-20作者简介：张玉萌（1978-），女，北京人，主管药师，研究方向：中药临床药学。Content Determination of Hydrochloric Stachydrine and Hydrochloric Leonurine in Decoction Pieces of MotherwortZHANG Yumeng，XIANG Feifei（Department of Pharmacy，Hainan Branch of PLA General Hospital，Sanya 572004，Hainan，China）Abstract：Objective：To establish a method for content determination of hydrochloric stachydrine and hydrochloric leonurine in decoction pieces of motherwort，and to provide the basis for its quality control. Methods：An HPLC method was established by using an SCX strong cation exchange column (4.6 mm×250 mm，5 μm) with the mobile phase of 0.5 mol monopotassium phosphate：triethylamine(1000：1.5)，phosphoric acid adjusting the pH value to 2.25~2.3，with the flow rate of 1 mL・min-1，the wavelength of 192 nm and column temperature of 25 ℃. Results：There was good linear relationship when the concentrations of hydrochloride stachydrine and hydrochloric leonurine were 0.2~2 mg・mL-1 and the values of RSD were 1.7%(n=5) and 0.08%(n=5) respectively. Conclusion：The method is simple，sensitive and accurate，which can be used for the quality control of motherwort herb pieces.Key words：motherwort；HPLC；hydrochloric stachydrine；hydrochloric leonurine74 辽宁中医药大学学报 15卷1.0 mL・min-1（分别精密吸取对照品溶液10 μL与供试品溶液20 μL，注入液相色谱仪，测定，即得）；柱温：25℃；检测波长为250 nm。在以上条件下预试，考察该色谱条件下对照品、样品的保留时间和分离度是否适宜；若条件不满意可考察检测波长是否需要调整，考察流动相比例是否需要调整等确定最佳条件。2.4 线性关系考察精密吸取适量储备液A，加70%乙醇配制成含盐酸水苏碱浓度为1.5、1、0.5、0.25、0.125 mg・mL-1等5组标准系列溶液。精密吸取各浓度标准系列溶液10 μL，按上述色谱条件进行测定。以峰面积为纵坐标（Y），标准系列溶液浓度为横坐标（X）绘制标准曲线，得盐酸益母草碱的回归方程为Y=1.5585x+1.7764，r=0.9996。精密吸取适量储备液B，加70%乙醇配制成含盐酸益母草碱浓度为0.12、0.06、0.03、0.015、0.006 mg・mL-1等6组标准系列溶液。精密吸取各浓度标准系列溶液10 μL，按上述色谱条件进行测定。以峰面积为纵坐标（Y），标准系列溶液浓度为横坐标（X）绘制标准曲线。盐酸益母草碱的回归方程为Y=16.919x+11.523，r=0.9999。结果表明，盐酸水苏碱在0.125~1.5 mg・mL-1范围内，盐酸益母草碱在0.006~0.12 mg・mL-1范围内线性关系良好。（见图1~2） y = 1.5585x + 1.7764R2 = 0.9994
0.0001.0002.0003.0004.0005.0006.0007.0008.000
0.0000.5001.0001.5002.0002.5003.0003.500系列1
盐酸水苏碱（mg・mL-1）图1 盐酸水苏碱标准曲线 y = 16.919x + 11.523R2 = 0.9998
05001000150020002500
020406080100120140系列1线性 (系列1)
盐酸益母草碱（mg・mL-1）图2 盐酸益母草碱标准曲线2.5 精密度试验 取“2.1”项下对照品溶液，在上述色谱条件下测定，连续进样6次，分别测定峰面积，计算的峰面积RSD（n=6）分别为 1.7%和0.08%，表明仪器精密度良好。（见表1）表1 盐酸水苏碱与盐酸益母草碱含量试验号 盐酸水苏碱 盐酸益母草碱 PAPHPAPH1999008498.616.021016689499.416.03990290498.516.04990658499.116.05960258498.615.86987919498.415.9MEAN990803.7498.816.0SD16728.250.390.08RSD（%）1.70.080.522.6 重复性试验取同一批样品，分别制成6份供试品溶液，在上述色谱条件下测定，计算的峰面积RSD（n=6）分别为2.9%和1.75%，表明方法重复性良好。（见表2）表2 盐酸水苏碱与盐酸益母草碱含量重复性试验结果样品编号 盐酸水苏碱 盐酸益母草碱 PAPHPAPH1291994520.416.42289791510.915.93288795497.515.54302119522.316.45311238515.116.16305733517.716.2MEAN298278.3514.016.1SD8560.9299.020.34RSD（%）2.91.752.132.7 稳定性试验取同一样品溶液，按上述色谱条件盐酸水苏碱于0、1、3、6、9、12 h，盐酸益母草碱于0、1、4、7、18、21 h进样测定峰面积，RSD分别为 2.8%和 0.51%，结果表明盐酸水苏碱和盐酸益母草碱在12 h内是稳定的。3 结 论实验结果表明益母草饮片中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量可以用HPLC法进行控制。◆Au/min
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