中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第45卷 第23期 2014年12月

·3456· 国产沉香HPLC指纹图谱研究 杨锦玲1, 2，梅文莉2，余海谦2，杨德兰2，王佳媛2，李 薇2，戴好富2* 1. 海南大学园艺园林学院，海南 海口 570228 2. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所，农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室，海南 海口 571101 摘 要：目的 建立沉香药材HPLC特征指纹图谱分析方法，为其科学鉴定和质量控制提供依据。方法 Dionex-Acclaim 120 C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.5%甲酸水溶液梯度洗脱；体积流量0.4 mL/min；检测波长254 nm；柱温26 ℃。利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”和SPSS软件分别对其进行相似度评价和聚类分析。结果 建立了沉香药材HPLC指纹图谱共用模式，确定24个共有峰，并根据对照品指认9个共有峰。10批沉香药材相似度分析结果与聚类分析结果基本一致。结论 首次建立了沉香药材HPLC指纹图谱分析方法。该分析方法简便、快速，可较全面地反映沉香药材中化学成分的信息，为沉香药材的鉴定和质量评价提供了科学依据。 关键词：沉香；HPLC指纹图谱；相似度分析；聚类分析法；超声波法 中图分类号：R286.022 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)23 - 3456 - 06 DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.23.019 HPLC fingerprint of Aquilariae Resinatum Lignum in China YANG Jin-ling1, 2, MEI Wen-li2, YU Hai-qian2, YANG De-lan2, WANG Jia-yuan2, LI Wei2, DAI Hao-fu2 1. College of Horticultural and Garden, Hainan University, Haikou 570228, China 2. Key Laboratory of Biology and Genetic Resources of Tropical Crops, Ministry of Agriculture, Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences, Haikou 571101, China Abstract: Objective To establish an HPLC method for the fingerprint analysis of Aquilariae Resinatum Lignum (ARL), so as to provide evidence for the identification and quality control of ARL. Methods The analysis was carried out on a Dionex-Acclaim 120 C18 column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm). The mobile phase consisted of acetonitrile and water-acetic acid (99.5:0.5) with the flow rate of 0.4 mL/min at 254 nm and the separation was performed at 26 . The similarity was analyzed with “℃Similarity Evaluation System for Chromatographic Fingerprint of Chinese Materia Medica 2004A” and the cluster analysis was performed by SPSS software. Results The HPLC characteristic fingerprint of ARL has been established. A total of 24 common peaks were characterized, and nine of them were identified by comparing their retention time with reference subslances. The values of similarity evaluation mostly agreed with the result of cluster analysis. Conclusion It is the first time to establish the HPLC fingerprint of ARL. The method is simple and quick, and reflects the information of chemical composition of ARL comprehensively, which provides the scientific basis for the identification and quality evaluation of ARL. Key words: Aquilariae Resinatum Lignum; HPLC fingerprint; similarity analysis; cluster analysis; ultrasonic method 国产沉香为瑞香科植物白木香Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg含有树脂的木材[1]，主产于我国海南、广东等地，是我国传统的名贵药材[2-3]。沉香具有行气止痛、温中止呕、纳气平喘功能，用于胸腹胀闷疼痛、胃寒呕吐呃逆、肾虚气逆喘急[4]。化学研究表明沉香中的特征性成分为2-(2-苯乙基) 色酮类化合物（41%）和倍半萜类化合物（52%）[5]。沉香药材中所含倍半萜类和色酮类化合物种类较多，各成分相对量较少。目前，除奇楠沉香被报道其化学成分中2-(4′-甲氧基-2-苯乙基) 色酮和2-(2-苯乙基) 色酮相对量之和达到37.03%以上[6]，其他沉香药材中未见有相对量较高的共有成分报道。由 收稿日期：2014-05-28 基金项目：国家科技支撑计划课题（2013BAI11B04）；海南省重大科技项目（ZDZX2013013）；公益性行业（农业）科研专项（201303117） 作者简介：杨锦玲（1990—），女，硕士在读，研究方向为天然产物化学。E-mail: jinlyang@126.com *通信作者 戴好富，男，博士，研究员，博士生导师，主要从事天然产物化学研究。 Tel: (0898)66961869 Fax: (0898)66961869 E-mail: daihaofu@itbb.org.cn 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第45卷 第23期 2014年12月

·3457·于市面上的沉香药材质量良莠不齐，而且假冒伪劣、以次充好的情况时有发生，所以建立一套可靠的沉香真伪鉴定与质量评价的方法意义重大。据文献报道，主要通过GC-MS的方法来评价沉香质量[2,5-11]，鉴定的化合物主要是倍半萜以及芳香族类成分，近年来色酮类成分也得到了鉴定[2,6,10-11]，但一些极性较大不易挥发的成分特别是四氢色原酮类化合物尚未鉴定。而利用HPLC分析沉香样品的文献仅见少量报道[12-13]，如采用HPLC检测沉香中的2-(2-苯乙基) 色酮类和四氢色原酮类化合物[12]，以及采用HPLC来测定沉香中化合物6-羟基-2- (4′-甲氧基-2-苯乙基) 色酮和6-羟基-2-(2-苯乙基) 色酮的量。HPLC指纹图谱是一种顺应中药多组分、多靶点，从“全成分”的角度出发的现代中药质量控制方法，现已成为国内外广泛接受的中药质量控制评价模型[14-16]。目前尚未有利用HPLC指纹图谱法对沉香药材进行真伪鉴定和质量评价的文献报道。本课题组从沉香药材分离鉴定了一系列2-(2-苯乙基) 色酮类化合物[17-22]，本实验在此基础上对10批沉香药材进行分析，建立乙醚提取物的HPLC指纹图谱，并进行相似度评价和聚类分析，以期为沉香的科学鉴定和质量标准提供参考依据。 1 材料 Agilent 1260 Infinity高效液相色谱仪，配备G1311C四元泵、G1329B标准自动进样器、G1316A柱温箱、G1315D DAD检测器（Agilent公司，美国）；Sartorius BP221S电子天平（塞多利斯公司，德国）；BRANSONIC—5510E—DTH超声波清洗仪（Branson，美国）。 乙腈（色谱纯，Tedia公司），甲醇（色谱纯，Tedia公司），甲酸（分析纯），超纯水。所有对照品均为课题组分离鉴定得到，9个对照品分别为 (5S*, 6R*, 7R*)-4′-甲氧基-5, 6, 7, 3′-四羟基-2-(2-苯乙基)-5, 6, 7, 8-四氢色原酮、8-氯-4′-甲氧基-5, 6, 7, 3′-四羟基-2-(2-苯乙基)-5, 6, 7, 8-四氢色原酮、8-羟基-2-(2-苯乙基) 色酮、6-甲氧基-2-(3′-甲氧基- 4′-羟基-2-苯乙基) 色酮、6-羟基-2-(4′-甲氧基-2-苯乙基) 色酮、6-羟基-2-(2-苯乙基)色酮、6, 7-甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮、2-(4′-甲氧基-2-苯乙基) 色酮、2-(2-苯乙基) 色酮。经HPLC峰面积归一化法计算，各质量分数均大于98%。10批沉香药材于2013年收集，均由中国热带农业科学院热带生物技术研究所戴好富研究员鉴定，其沉香原植物均为瑞香科沉香属白木香Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 Dionex-Acclaim 120 C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈（A）-0.5%甲酸水溶液（B）。梯度洗脱程序：0～60 min，25%～55% A，60～80 min，55%～80% A，80～90 min，80%～100% A，90～95 min，100% A。体积流量0.4 mL/min，检测波长254 nm，柱温26 ℃，进样量20 μL。 2.2 供试品和对照品溶液制备 10批药材均为野生国产沉香，药材信息见表1。表1 沉香药材样品信息 Table 1 Introduction of ARL medicinal materials 编号 样品描述 产地 提取得率 / %S1 表面黄白色，凹凸不平，纵纹理，散布褐色油脂；较硬，气微香 海南 1.25 S2 表面灰白色，散布棕褐色油脂，树皮；干而脆，气香 海南 1.53 S3 表面黄白色，纵纹理，密布褐色油脂；质硬，气香 广西 1.67 S4 表面灰白色，密布棕褐色油脂；较坚硬，气香 海南 1.27 S5 表面黄棕色，散布褐色油脂；干而脆，气微香 海南 0.76 S6 表面黄棕色，散布褐色油脂；干而脆，气微香 广东 2.19 S7 表面土黄色，密布褐色油脂；干而脆，气香 云南 0.57 S8 表面黄棕色，密布黑褐色油脂；较坚硬，气香 海南 1.18 S9 表面黄白色，凹凸不平，纵纹理，散布黄褐色油脂；质硬，气微香 海南 1.04 S10 表面黄白色，散布黑色油脂，有虫洞；干而脆，气香 海南 1.92