4
Km值 ① Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时 的底物浓度。 ② 意义： a) Km是酶的特征性常数之一； b) Km可近似表示酶对底物的亲和力； c) 同一酶对于不同底物有不同的Km值。
5
V Vmax Vmax/2
Km
❖ Km
Vmax ＝ Vmax[S]
2
Km + [S]
[S]
Km＝[S]
• 2 可电脑作图 • 3 若人工作图，在坐标轴上禁止出现分数(1/2,1/16) • 4 实验的最终目的是测得Km值，因此实验报告最终
必须得出结论：Km值等于多少
10
6
Ｋm值与Ｖmax值的测定
双倒数作图法
Vmax[S] V = Km+[S]
两边同取倒数
1/V=
Km Vmax
1/[S] + 1/Vmax
（林－贝氏方程）
7
注意事项
• 1 底物和酶取样准确 • 2 保温时间准确
123ຫໍສະໝຸດ 45加入酶的时 间
加入碱性溶液 终止反应的 时间
9:00:00 9:00:30 9:01:00 9:15:00 9:15:30 9:16:00
9:01:30 9:16:30
9:02:00 9:17:00
6
7
9:02:30 9:03:00
9:17:30 9:18:00
保证每个试管的反应时间为15分钟
8
实验报告
• 1 绘制矩形双曲线图 • 2 绘制双倒数图，并通过双倒数图读出碱
性磷酸酶对磷酸本二钠的Km值
9
注意事项
• 1 做如下表格
1234 5 6 7 Abs [S] 1/ABS 1/[S]
碱性磷酸酶Km值的测定
1
影响 酶促反应的因素
底物浓度 酶浓度 pH 温度 激活剂 抑制剂
※ 研究一种因素的影响时，其余各因素均恒定。
2
底物浓度对反应速率影响
在其他因素不变
V
的情况下，底物浓度
对反应速率的影响呈
矩形双曲线关系。 [S]
3
Ｖ ── ＝ Vmax[S] Km + [S]
[S]：底物浓度 V：不同[S]时的反应初速度 Vmax：最大反应速度(maximum velocity) Ｋm：米氏常数(Michaelis constant)