必须得出结论：Km 值等于多少
Vmax ：最大反应速度 (maximum velocity) Ｋm：米氏常数 (Michaelis constant)
Km值 ① Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时 的底物浓度 。 ② 意义： a) Km是酶的特征性常数之一； b) Km可近似表示酶对底物的 亲和力； c) 同一酶对于不同底物有不同的 Km值。
V Vmax Vmax /2
Km
? Km
Vmax ＝ Vmax[S]
2
Km + [S]
[S]
Km＝[S]
Ｋm值与Ｖmax 值的测定
双倒数作图法
V=
Vmax [S] K m +[S] 两边同取倒数
1/V=
Km
1/[S]
Vmax
+ 1/Vmax
（林－贝氏方程）
注意事项
? 1 底物和酶取样准确 ? 2 保温时间准确
加入酶的时 间
加入碱性溶液 终止反应的 时间
1
9:00:00 9:15:00
2
9:00:30 9:15:30
3
9:01:00 9:16:00
4
9:01:30 9:16:30
5
9:02:00 9:17:00
6
7
9:02:30 9:03:00
9:17:30 9:18:00
保证每个试管的反应时间为15分钟
碱性磷酸酶Km 值的测定
影响 酶促反应的因素
底物浓度 酶浓度 pH 温度 激活剂 抑制剂
※ 研究一种因素的影响时，其余各因素均恒定。
底物浓度对反应速率影响
在其他因素不变
V
的情况下，底物浓度
பைடு நூலகம்
对反应速率的影响呈
矩形双曲线 关系。 [S]
Ｖ＝ ─KVmm─+ax[S[S] ]
[S]：底物浓度
[S] V：不同 时的反应初速度
实验报告
? 1 绘制矩形双曲线图
? 2 绘制双倒数图，并通过双倒数图读出碱 性磷酸酶对磷酸本二钠的Km 值
注意事项
? 1 做如下表格
1234 5 6 7 Abs
[S]
1/ABS
1/[S]
? 2 可电脑作图 ? 3 若人工作图，在坐标轴上禁止出现分数 (1/2,1/16) ? 4 实验的最终目的是测得Km 值，因此实验报告最终