新生儿溶血三项检测结果研究分析[摘要] 目的探讨新生儿溶血三项试验检测数据，为该地区新生儿溶血病（hemolytic disease of the new born，HDN）的诊治提供依据。
方法采用微柱凝胶法对整群选取的该院879例新生儿高胆红素血症的患儿进行AB0、RhD血型鉴定及新生儿溶血三项（直接抗人球蛋白试验、血清游离抗体试验、抗体释放试验）检测，各组间率的比较使用SPSS17.0 软件包，各血型HDN检出率HDN阳性分布的比较采用χ2检验，P<0.05 为差异有统计学意义。
结果送检样本中，A、B、0、AB血型阳性率为23.34%、20.46%、0.00%和3.77%，；Rh-HDN阳性率依次为0.70%、1.16%、4.64%和1.89%，组中各血型阳性率分布差异有统计学意义（P<0.05）；所有AB0-HDN阳性样本中，A、B、0、AB血型比例分别为54.92%、43.44%、0.00%和1.64%，Rh-HDN中各血型阳性率分别为10.53%、15.79%、68.42%和5.26%，HDN确诊患儿中血型分布差异有统计学意义（P<0.05）；结论HDN主要以AB0血型不合引起，Rh-HDN少见；ABO-HDN中以A、B型血新生儿为主，Rh-HDN中则多见于O型血新生儿。
[关键词] ABO血型；RhD血型；新生儿溶血三项试验[中图分类号] R4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2015）08（b）-0184-03[Abstract] Objective To investigate the values of the three tests of hemolytic disease of the newborn（HDN）so as to provide reference for the diagnosis and treatment of the disease in the local district. Methods Using the micro column gel method to test ABO，RhD blood grouping and hemolytic three （direct Coombs test ，serum free antibody test，antibody release test）of 879 children with neonatal hyperbilirubinemia in the pared rates between groups using SPSS17.0 package，and compared the relevance ratio of HDN and HDN positive distribution of each blood type using χ2 test，and P <0.05 was considered statistically significant. Results Within the submission samples，positive rate of A，B，O，AB blood type was 23.34%，20.46%，0.00% and 3.77% respectively. Rh-HDN-positive rate was 0.70%，1.16%，4.64% and 1.89% respectively. The distribution of positive rate of each blood type group had statistically significant differences（P <0.05）；All ABO -HDN positive samples，A，B，O，AB blood type ratio was 54.92%，43.44%，0.00% and 1.64% respectively，and in each blood type Rh-HDN positive rates was 10.53%，15.79%，68.42% and 5.26% respectively，and blood type distribution of children diagnosed as HDN had statisticallysignificant differences（P<0.05）. Conclusion HDN caused mainly by ABO blood type incompatibility，Rh-HDN rare；and ABO-HDN was mainly occurred in newborns with A orB-type blood，while Rh-HDN is more common in newborns with O blood type.[Key words] ABO blood type；RhD blood group；HDN three trials testing of newborn新生儿溶血病（HDN）一般指母婴血型不合，孕妇体内产生的相应的IgG类抗体由胎盘进入婴儿血液循环，导致新生儿红细胞破坏而引起的溶血性疾病[1-2]。
以母亲血为O 型，婴儿血为A或B型的ABO溶血病，在临床上最为多见，约占新生儿溶血症的80%[3]，该研究整群选取2011年1月―2014年12月开封市儿童医院879例因黄疸住院疑似HDN的新生儿做血清学检测，现报道如下。
1 资料与方法1.1 一般资料整群选取2011年1月―2014年12月期间收治于该院新生儿科，疑似HDN的新生儿，男476例，女403例，男女比例为1.18：1，病历资料显示，日龄为生后4 h～7 d，平均日龄（2.5±0.4）d，主要临床表现为黄疸、发热、纳差、惊厥；分别进行ABO、RbD血型鉴定及新生儿溶血三项检测，收集试验数据进行分析。
1.2 仪器及试剂卡式微柱凝胶检测系统（含专用离心机、37℃恒温孵育箱、微凝胶检测卡）由中国长春博迅生物技术有限公司提供；ABO血型正定型试剂由中国河北医科大学生物医学工程中心提供，RhD（IgM）血型定型试剂、生理盐水、ABO血型反定型红细胞试剂均由中国上海血液生物医药有限公司提供。
1.3 检测方法1.3.1 标本收集清晨空腹抽取新生儿3 mL静脉血，分别加入无抗凝真空采血管和乙二胺四乙酸抗凝真空采血管（河南省山山医疗用品有限公司提供），标注姓名混匀后及时送检。
1.3.2 标本处理未抗凝标本，37℃水浴20 min后，3 000 r/min，离心半径10 cm，离心5 min分离血清备用，抗凝标本取底层红细胞用生理盐水洗涤后备用。
1.3.3 样本检测ABO正定型法检测新生儿ABO血型及RH-D血型，采取微柱凝胶检测法对新生儿标本进行溶血三项检测，必要时手工经典酶法复核。
使用仪器设备均处于稳定的状态下，实验步骤严格照《临床输血检验实验操作规程》及厂家试剂使用说明进行。
1.3.4 结果判定溶血三项试验完成前期试验步骤后，使用专用离心机离心5 min，900 rpm 2 min，1500 rpm 3 min，取出肉眼观察结果，若红细胞若沉积在底部，实验结果为阴性（-）；若红细胞聚集在上部，表明红细胞发生凝集，实验结果为阳性（+）；直接抗人球蛋白试验、血清游离抗体试验、抗体释放试验三项检测结果判读模式，见表1。
1.4 统计方法采用SPSS17.0 软件包对数据进行分析，各血型HDN检出率HDN阳性分布的比较采用χ2检验。
2 结果2.1 AB0-HDN血型鉴定结果与溶血3项试验阳性率比较由表2可以看出，897例送检血清学标本中，AB0-HDN 的检出率为13.88%，Rh-HDN的检出率为2.16%，AB0-HDN 组、Rh-HDN组、AB0-HDN可疑组各组间血性分布的阳性率比较χ2分别为19.65、7.31、12.38，组间血型HDN阳性率不相同，各血型的分布差异有统计学意义（P<0.05），由此可见，HDN临床上最为常见是以AB0血型不合引起的HDN 为主，Rh-HDN较为少见；见表2。
2.2 HDN患儿各血型分布情况比较AB0-HDN阳性标本中以A和B型血的患儿最为多见，Rh-HDN中则以O型血患儿最为常见，组中各血型的阳性率比较χ2分别为16.22、23.47、20.38。
HDN患儿中各血型分布差异有统计学意义（P<0.05 ）。
见表3。
3 讨论该研究显示ABO-HDN（13.88%）显著多于Rh- HDN（2.16%），这与国内报道[4]中显示A型或B型血的新生儿发生HDN最为多见相一致；所有检测样本中A型血比例略高于B型血，这与国内文献[5]报道有所不同，这可能与各地区血型分布情况存在一定差异性有关；此外，ABO-HDN中A型和B型血患儿占HDN阳性患儿比例高达98.36%，Rh-HDN仅为2.16%。
与国内多地报道一致，再一次印证了AB0-HDN的发生在临床上最为多见；此外，HDN的诊断主要包括产前诊断和新生儿检测两部分，产前检查主要包括孕妇的血清学检查、羊水检测、影像学检查等，患儿的实验室诊断则主要依靠溶血3项血清学检测结果作为依据[6]，而且在某些情况下，患儿母亲可能未做产前筛查或留取血样，因此，新生儿溶血3项试验目前已经成为疑似HDN患儿的主要筛查指标；新生儿溶血病3项试验包括直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验、抗体释放试验。
其中直接抗人球蛋白试验是检查新生儿红细胞是否致敏，但由于新生儿红细胞上血型抗原相对较少，吸附抗体能力弱，所以该实验反应常常呈弱阳性或阴性，因此该实验只起参考作用[7]。
游离抗体和抗体释放试验则是直接检查抗体的存在和分布，对于HDN的诊断更具特异性和敏感性；国内目前大多报道均为已知母婴血型不合而导致HDN的发病率调查，该报告中的879例患儿溶血3项试验结果显示HDN的阳性率较文献[8]报道偏低，原因可能为鉴于本报告所做研究均为母亲血型未知下进行，在所有的检测患儿中存在一些母婴血型相符的情况，此外，临床上引起黄疸的诱因很多，一部分疑似患儿可能不属于溶血引起，而被纳入筛查，在所有确诊的HDN中，无论是ABO-HDN还是Rh-HDN，其发生率和主要的血性分布与国内相关报道大致相同[9]。
对妊娠前和妊娠早期夫妇双方进行血型及血型抗体效价的检测对于预防和减少HDN的发生具有重要的临床意义，在新生儿期，实验研究[10]显示越早进行新生儿溶血三项的筛查，其阳性率越高，这是因为随着病程的推移，患儿血液中游离抗体及致敏红细胞数目逐渐消耗所致，而大部分IgG 抗体以抗原抗体复合物形式存在，失去反应原性。