实验五 DMEM培养液的配制
【能力目标】 熟练掌握DMEM细胞培养液的配制。
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【实验材料】
500mL大烧杯 玻璃棒 250mL/500mL盐水 瓶 酸度计 50mL小烧杯3个 孔径0.22μm 微孔滤膜 一次性滤器 一次性滤纸 去离 子水 灭活的小牛血清 DMEM干粉 青霉 素 链霉素 NaHCO3 超净工作台 磁力搅 拌器 电子天平 药匙
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【配方】
DMEM干粉
NaHCO3 L-谷氨酰胺 超纯水
1瓶(1,000mL量) 3.7g 0.2g 1,000mL
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【配制方法】
取清洗干净的500mL大烧杯一个，加入 新鲜制备的三蒸水约300mL，加热至15~ 30℃； 将DMEM干粉袋竖立轻弹，使袋中粉下 沉，剪开袋口，将干粉倒入500mL的大烧 杯中，用超纯水冲洗袋2~3次； 放入清洗干净的磁子，在磁力搅拌器充 分搅拌，以确保培养基干粉充分溶解；
【NaOH的配制过程】
NaOH 10g 超纯水 250mL 边加边搅拌，溶解过程会产热。
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【课程安排】
1、每组确定本组的D-Hank’s液是否有？ 是否已过滤除菌； 2、每组的EDTA需要高压灭菌； 3、需要配制新鲜的1M HCl和1M NaOH 溶液，以及7.4％的NaHCO3溶液； 4、需要重新灭菌5mL枪头； 5、每组准备一铝饭盒，内放小剪刀一把， 小镊子一把，手术钳一把，大剪刀一把， 高压灭菌；
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实验五 1M HCl的配制 1M NaOH的配制
【实验材料】
250mL烧杯 玻璃棒 250mL盐水瓶 一次 性滤纸 去离子水 电子天平 药匙 5mL 移液器 5mL吸头 NaOH 浓HCl
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【HCl的配制过程】
用5mL的移液器准确移取盐酸21mL， 加入到279mL超纯水中。
课件【Βιβλιοθήκη 制方法】根据配方要求，加入准确称取的NaHCO3 1.85g，L-谷氨酰胺0.1g，充分摇匀至完全 溶解； 加入已经制备好的双抗溶液，使青霉素 和链霉素的最终使用浓度达到100μg/mL； 加入培养基总体积约10％的已灭活的小 牛血清；
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【配制方法】
用浓度为7.4％的NaHCO3溶液调整溶液 的pH值为7.2~7.4，加超纯水定容，并将 培养液转入盐水瓶； 用一次性滤器过滤上述培养液到灭菌的 盐水瓶，封口，4℃保存备用。
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【课程安排】 6、每组准备培养皿两套，干烤灭菌； 7、需要重新配制双抗溶液。
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