• 计算体温变化（升温为负值时以0计，注意数值修约）
• 数值修约：四舍六入五成双 12.1498≈12.1; 12.16 ≈12.2 12.150001 ≈12.2; 12.15 ≈12.2; 12.45 ≈12.4
• 得出结论
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附录ⅩⅢ A 热原检查法
结果判断（2005版）
• 初试合格
2010年版药典一部
生物安全性检查和生物活性测定法介绍
张德波
成都市食品药品检测心(成都市药检所)
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2010年版药典一部安全性检查内容介绍
• 凡例 动物试验(四十五) • 成方制剂和单味制剂 四个品种 • 附录ⅩⅢ
• ⅩⅢ A 热原检查法 • ⅩⅢ D细菌内毒素检查法 • ⅩⅢ E异常毒性检查法* • ⅩⅢ G过敏试验检查法* • ⅩⅢ H 溶血与凝聚试验*
合要求，验证方法：猫注射0.1μg/kg，血压下降均值应不小 于2.67kpa。 对照品稀释液的配制： 配制浓度应根据供试品给药剂量（体积）来确定。 实验前的准备工作：对照品、猫、仪器、试验通路联接、手术 器具、麻
醉剂、供试品 猫的麻醉及手术注意事项 猫灵敏度测定： 0.05μg/kg、 0.1μg/kg、 0.15μg/kg 供试品降压物质检查：ds dT dT ds 异常情况的处理:动物呼吸困难教、学pp动t 物有苏醒迹象、血压突然下 14
• 实验过程中温度变化≤3℃ • 实验过程中温度变化≤3℃
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附录ⅩⅢ A 热原检查法 实验操作过程
• 试验前准备工作:实验兔、相关器具除热原、供试品 • 正式实验
家兔正常体温测定:体温38.0 ～ 39.6℃,且两次相差 ≤0.2℃。
供试品液准备:注射前配制，温热至约38 ℃。 分组：三只家兔温度最好相近，组内温差不得过1 ℃ 注射给药：15分钟内注射完毕，注意止血。 测定给药后的体温
• 3只均≤0.6 ℃,且总和≤1.4℃
• 需复试
• 3只中有一只≥ 0.6 ℃,或均不超 过0.6 ℃，但总和≥1.4℃
• 初试不合格
• 3只中≥ 0.6 ℃的超过一只。
• 复试合格
• 5只中≥ 0.6 ℃不超过一只，或8 只总和≤3.5 ℃
• 复试不合格
• 5只中≥ 0.6 ℃超过一只，或8只 总和＞ 3.5 ℃
结果判断（2010版）
• 初试合格
• 3只均≤0.6 ℃,且总和≤1.3℃
• 需复试
• 3只中有一只≥ 0.6 ℃,或总和 ≥1.3℃
• 初试不合格
• 3只中≥ 0.6 ℃的超过一只
• 复试合格
• 5只中≥ 0.6 ℃不超过一只，或8 只总和≤3.5 ℃
• 复试不合格
• 5只中≥ 0.6 ℃超过一只，或8只 总和＞ 3.5 ℃
否则按每只4～5秒。 • 结果观察：给药后观察48小时。 • 结果判断：以动物是否死亡作为判定指标。
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附录ⅩⅢF 降压物质检查法
降压物质检查法
对照品贮备液的配制： ①磷酸组胺折算成组胺的系数0.342。 ②规定配制成1.0mg/ml，但最好采用定容方法。 ③4～8 ℃保存3个月内使用。将有沉淀析出改为经验证活性符
• 饲养：预测前7日的规定。 • 饲养：预测前7日的规定。
• 淘汰： 饲养不正常者
• 淘汰：饲养不正常者
供试品判为不合格者
供试品判为不合格者
使用超过10次者
• 不同点：体重无上限
• 使用次数不再规定10次
• 建议：
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附录ⅩⅢ A 热原检查法
家兔预选 • 未曾使用过的家兔。 • 供试品合格，但升温≥ 0.6℃，休息达2周以上。 • 3周内未曾使用的家兔。
• 附录ⅩⅧ B 中药注射剂安全性检查法指导原则 • 附录ⅩⅧ C 中药生物活性测定指导原则
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凡例--动物试验
2005年版一部
2010年版一部
• 动物品系、年龄、性别应 符合规定。
• 尽量取代动物试验，减少 动物使用量。
• 动物应健康。
• 动物品系、年龄、性别、 体重应符合规定。
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凡例--动物试验
实验动物的要求 • 应是取得实验动物生产资质的单位生产,动物应有合格证。 • 动物应品系、年龄明确。 • 动物性别、体重应符合试验需要。 • 应有严格检疫制度。 • 使用前应正常饲养至适应使用环境。 • 应有动物处理制度。
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成方制剂和单味制剂
• 止喘灵注射液 异常毒性 • 注射用双黄连（冻干） 溶血与凝聚、热原 • 清开灵注射液 异常毒性、热原、溶血与凝聚 • 注射用灯盏花素* 热原、过敏试验、降压物质、异常毒
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附录ⅩⅢ A 热原检查法
家兔的重复使用
• 供试品合格的家兔 至少休息48小时。 • 升温≥ 0.6 ℃的家兔，至少休息2周以上，且通过预选合
格。
• 供试品不合格的家兔淘汰
• 建议：关于升温的家兔
关于降温的家兔
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附录ⅩⅢE 异常毒性检查法
异常毒性检查 • 初试动物要求：17~20g，5只。 • 复试动物要求：18~19g，10只。 • 给药时间：各论下有规定者按各论项下规定时间，
性、溶血与凝聚
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附录ⅩⅢ A 热原检查法
• 热原（Pyrogen ） ：系指某些药品中含有的能引起体温升高的杂质。 • 来源：临床上能够引起发热的物质如细菌内毒素、病毒、细菌，以及
其他一些微生物、类固醇等。 • 存在：无所不在，水、灰尘、生产药品的器皿中都存在热原质。 • 性质：细菌内毒素是细菌细胞壁的一种化学成份，主要为脂多糖，致
热性极强，具有耐热、耐酸碱、耐氧化剂，不易破坏，同时具有水溶 性、不挥发性、滤过性，在药品生产过程中不易去除。 • 不良反应：引起人体发冷、寒颤，然后引起发热，甚至昏迷和休克。
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附录ⅩⅢ A 热原检查法
2005年版药典
2010年版药典
• 供试用家兔
• 供试用家兔
• 体重 1.7～3.0kg,雌者应无孕。 • 体重 1.7kg以上,雌者应无孕。
•
预选条件应与正式实验一致。
•
休温应在38.0 ～ 39.6℃。
•
每一只8次测温最高与最低温差应不大于0.4℃
教学ppt8附录ⅩⅢ A源自热原检查法2005年版药典
试验环境条件 • 实验室与饲养室温差不得
大于5 ℃，且在17 ～25℃ 之间。
2010年版药典
试验环境条件 • 实验室与饲养室温差不得
大于3 ℃，且在17 ～25℃ 之间。