食用菌菌种制作技术《食用菌生产技术》课程组第一节菌种生产类型及生产流程第二节一级菌种制作技术第三节二、三级菌种制作技术食用菌菌种制作技术生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m第一节菌种生产类型及生产流程一、菌种概念二、菌种生产类型三、菌种生产流程四、菌种生产场所及设备生物秀-专心做生物w w w .bb i o o .c o m一、菌种概念广义：是指以保藏、试验、栽培和其它用途为目的，具有繁衍能力，遗传特性相对稳定的孢子、组织或菌丝体及其营养性或非营养性的载体。
菌种是一种重要的生物资源，椐其使用的目的不同，可以分为保藏用菌种、试验用菌种和生产用菌种。
从食用菌栽培的角度而言，所谓的菌种就是指生产用菌种。
生物秀-专心做生物w ww .b b i o o .c o m狭义：是指以适宜的营养培养基为载体进行纯培养的菌丝体，也就是培养基质和菌丝体的联合体。
或者说是指人工培养，并供进一步繁殖的食用菌的纯菌丝体。
菌种是食用菌生产的首要条件，菌种性状的优劣直接影响到生产的成败。
制种工作的成败，既影响到菌种场的经济效益与信誉，又间接关系到菇农的利益。
制作菌种并非易事，需要有丰富的技术经验及企业管理知识。
生物秀-专心做生物ww w .b b i o o .c o m菌种生产流程种菇一级菌种二级菌种三级菌种栽培菌种为何要经过三级逐步扩大培养生物秀-专心做生物w ww.b bi o o.c om三、菌种生产工艺流程菌种制作流程一级菌种（配制培养基→灭菌→接种→培养）↓二级菌种（配制培养基→灭菌→接种→培养）↓三级菌种（配制培养基→灭菌→接种→培养）↓栽培生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m菌种制作的四个基本环节配制培养基灭菌接种培养生物秀-专心做生物w ww .b b i o o .c o m四、菌种生产场所及设备（现场）（一）菌种场设计基本要求1、确定制种级别及规模良种选育对人员素质、设备条件、种质资源的积累、工作的连续性等都有很高的要求。
在菌种生产中，由于前一级菌种是后一级菌种的种源，前一级菌种出现质量问题比后一级菌种出现质量问题危害更大。
因此对生产和供应较前级菌种厂家的条件和责任的要求更高。
目前，我国农业部已经颁布包含这方面内容的菌种管理行政法规。
今后，各菌种厂在制定规划时，应根据本身的技术力量及设备条件，确定适宜的菌种生产级别和规模。
生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m2、制种场地的选择水、电、路三通，远离禽舍、畜栏、厕所等污染源。
3、菌种场设置要求菌种场应设原辅料仓库，原料处理场地，洗涤室，配料室，灭菌室，冷却室，接种室，培养室,质检室和菌种储藏室。
生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m4、菌种场的平面布局应根据微生物易于在空气中传播及其传播的特点规划厂房，布设流水线，以使制种的工艺流程既便于流水作业，节约劳力和投资，又有利于对微生物传播的控制，提高菌种生产的成品率。
下面分别介绍简易菌种厂和规范化菌种厂的平面布局。
生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m（二）制种基本设备及常用物品配制培养基设备：切片机、粉碎机、过筛机、拌料机、装瓶或装袋机灭菌设备：高压灭菌锅（手提式、立式、卧式）、常压灭菌灶接种设备：净化工作台、接种箱、接种室培养设备：培养箱（电热恒温、恒温恒湿）、培养室、培养架、空调菌种保藏设备：电冰箱、贮藏室（二、三级菌种）1、制种设备生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m2、基本器具玻璃器皿衡量器具基础设备3、基本药品生物秀-专心做生物w ww.b bi o o.c om注意事项！•配置必要的生产设备。
•生产能力与生产设备配套•选用质量合格、价格适宜的玻璃器皿、塑料袋、消毒药品等低值易耗品。
生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m复习思考题1．什么叫培养基？培养基可分为哪几种类型？2．什么叫菌种？菌种可分为哪几种类型？3．菌种为什么要经过三级逐步扩大培养？4．简述菌种生产的基本过程？生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m第二节一级菌种制作技术一、一级菌种的制作流程二、一级菌种培养基的配制三、一级菌种培养基的灭菌四、菌种分离及纯化五、出菇试验（鉴定）六、转管及培养七、菌种保藏生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m一、一级菌种制作流程1．概念一级菌种是第一次用孢子分离法、组织分离法或基内菌丝分离法获得的纯菌丝体及其经过转管扩大后的菌丝体。
2．用途及要求一级菌种是菌种生产的基础，一级菌种质量的优劣，直接关系到二级菌种和三级菌种的质量，对食用菌生产产生根本的影响。
3、制种过程：主要包括下列几个程序：培养基的配制à培养基的灭菌à菌种的分离à纯化（提纯）à转管扩大à培养à一级菌种生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m2、一级菌种培养基常用配方PDA 培养基PSA 培养基马铃薯（去皮）200g 马铃薯（去皮）200g 葡萄糖20g 蔗糖20g 琼脂18～23g 琼脂18～23g 水1000ml 水1000ml PDA 培养基和PSA 培养基是一级菌种最常用的培养基，适用于大部分食用菌菌种的分离、培养和保藏，既是一种广泛培养基，也是一种基础培养基。
注：一级菌种培养基配方众多，可参考课本或其他书籍。
生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m粉状条状生物秀-w w w .煮沸20min ，取定量滤液制马铃薯滤液滤液沸时加入，融后加余料融化琼脂调节pH 值勿污管口，控制装量分装试管准备灭菌包扎成捆1%NaOH 或HCl 3.一级菌种培养基的配制过程生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m三、一级菌种培养基的灭菌（一）灭菌与消毒的概念灭菌：是应用物理和化学方法杀灭物品表面和内部所有的微生物，是一种彻底的灭菌方法。
消毒：是应用物理和化学方法使欲消毒的物品表面和孔隙内绝大部分微生物致死，是一种不彻底的灭菌方法。
生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m（二）灭菌与消毒的方法1、常用的灭菌方法2、常用的消毒方法（三）一级菌种培养基的灭菌1．灭菌设备手提式高压灭菌锅2．灭菌要求1.1kg/cm 2，121℃保持20~30min手提式高压灭菌锅生物秀-专心做生物w ww .b b i o o .c o m3．操作过程加水ð装锅ð盖盖ð加热ð当压力升为0.5kg/cm2时排放冷空气ð正式升压ð保压（1.1kg/cm2，121℃，保持20-30min ）ð停止加热ð自然降压至零ð排放余汽ð开盖ð取出灭菌物品ð趁热摆斜面ð检验灭菌效果（32℃空白培养48h ）。
生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m四、菌种分离及纯化（一）菌种分离的概念菌种分离：用无菌操作的方法将所需要的食用菌从混杂的微生物群体中单独分离出来的过程。
通过菌种分离得到的纯菌丝体即为一级菌种。
（二）菌种分离的关键——无菌操作无菌操作：任何一个操作过程都要注意避免把其它任何无关的菌体带入到培养基中。
注意二点：1．严格树立无菌观念；2．严格遵循无菌操作规程。
生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m无菌操作要点接种环境消毒灭菌酒精棉球消毒双手操作器具消毒灭菌开启的管口、瓶口靠近灯焰拔出的棉塞勿触及任何地方动作快、准、稳要点必备生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m（三）菌种分离的设备1．接种箱：操作规程2．净化工作台：操作规程3．接种室：操作规程生物秀-专心做生物w ww.b bi o o.c om生物秀-专心做生物w ww.b bi o o.c om接种工具净化工作台操作示范选种菇外观典型、大小适中、无病虫害、八成熟、第1~2茬的子实体取组织块取组织块：纵剖（撕）菇体，在柄盖交界处取绿豆粒大的组织种菇消毒用75%的酒精棉球擦拭子实体接组织块培养移接至斜面中部25℃培养箱生物秀-专心做生物w ww.b bi o o.c om秀-专心做生物w w w.b bi o o.c om生物复习思考题1．什么是一级菌种？简述一级菌种制作的工艺流程。
2．一级菌种培养基常用的配方是什么？简述其制作过程3．名词解释：消毒、灭菌、提纯。
4．如何对一级菌种培养基进行灭菌？如何检验其灭菌效果？5．什么是菌种分离？菌种分离有哪几种方法？6．简述组织分离法的操作过程。
7．为什么要进行出菇试验？8．什么叫转管？为什么要转管？9．什么是无菌操作？怎样才能做到无菌操作？生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m第三节二、三级菌种制作技术一.二、三级菌种培养基的配制二.二、三级菌种培养基的灭菌三.二、三级菌种的接种四.二、三级菌种的培养五.二、三级菌种的质量鉴定生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m一.二、三级菌种培养基的配制（一）配制原则1．选择适宜的营养物质。
2．营养物质间配制的比例要恰当。
3．选择经济实用、来源广泛的原料。
4．适宜的pH 值和含水量。
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