结核病实验室诊断
检验科任易
1. 结核病背景资料 2. 结核病常规检验 3. 结核病实验室诊断 4.体外r-干扰素释放试验 5.小 结
背景—结核病流行现状
全球有三分之一人口（20亿） 感染了结核杆菌
我国现患肺结核病人达500万， 占全球病人总数的1/4
背景—结核病感染、传播、发病过程
播散
空洞的结核病人以及健康人显著升高。但是CRP正常不能 排除结核病。
——Infection.17(1):13-4,1989 Jan-Feb
• 辅助治疗检测：肝功能、肾功能、血脂、血糖。。。。 • NSE 、AFU等指标用于鉴别诊断。 • CA 125标志的使用，可以作为结核病疗效判断指标。结核病与肺部
• 在微生物分类中，结核分枝杆菌属于 放线菌门、放线菌纲、放线菌目、分 枝杆菌科、分枝杆菌属
• 分枝杆菌复合群共包括人型、牛型、 非洲型和田鼠型，而人型结核分枝杆 菌是人类主要的致病菌
背景—结核分枝杆菌基础
• （1）结核杆菌可经多途径感染，由呼吸道、消化道和破损皮肤侵入 机体，最常见为经呼吸道感染引起肺结核。
1.结核抗体 2.结核蛋白 芯片
3.体外r-干 扰素试验
4.结核杆菌 分泌抗原
1.实时荧光 定量PCR
2.DNA
3.RNA 4.耐药基因 突变 5.菌型鉴定 6.测序
1.HPLC 2.质谱技术 3.流式技术
结核分枝杆菌形态学检测
涂片
染色
镜检
1.直接抹片法 2.离心制片法
1.抗酸染色 2.荧光染色
1.普通显微镜 2.荧光显微镜 3.自动阅片技术
结核杆菌离心制片技术
2015年7月至2015年11月，对本院257例痰液和纤维支气管镜灌洗液进行 直接涂片法和离心制片法比对验证试验，结果如下：
直 接
离心制片法
涂
合计
片
阳性
阴性
法
阳 性
41
0
41 (15.9%)
阴 性
17
199
216 (84.1%)
合
58
199
计 （22.6%） (77.4%)
257
的肺结核患者血清PCT水平并不会明显增高，故可用于PTB和CAP的鉴别诊
断，但当PCT水平大于正常值时，其预后价值较差。可作为肺结核和肺结核
伴感染诊断的辅助指标。
——[Eur Respir J 2011; 37(2):371]
结核病实验室诊断技术简介
细菌学
免疫学
分子生物学
其他
1.涂片 2.培养 3.药敏 4.菌型鉴定
JID 2012:205 (Suppl 2), S147.
背景—结核分枝杆菌基础
• 结核分枝杆菌（M. tuberculosis） 简称为结核杆菌（tubercle bacilli）。早在1882年，德国细菌 学家柯赫（Robert Koch）就已证明 结核分枝杆菌是结核病的病原菌。 本菌可侵犯全身各组织器官，但以 肺部感染最多见。
诊断
Disseminates Diagnosis
康复
发作
治疗 Recovery
Onset Treatment
细菌在人 体复制
潜伏感染 染
肺病或其他疾病
≥ 2 个月（months）
时间表Time
痊愈
复发
背景—当前结核病的研究
新型抗结核药物(50%) 新型快速诊断技术(40%) 新型结核疫苗(10%)
• （2）结核杆菌无内毒素和外毒素，也不产生侵袭性酶，其致病性主 要与其细胞壁内含大量脂质有关。主要包括：
• ①磷脂：可刺激单核细胞增生，与结核结节和干酪样坏死形成有关 • ②分枝菌酸：与抗酸染色性有关 • ③索状因子：可破坏细胞线粒体膜，与慢性肉芽肿形成有关 • ④硫酸脑苷酯：抑制吞噬溶酶体形成，具有抗吞噬作用 • ⑤ 蜡质D，可刺激机体的迟发型超敏反应。 • （3）结核杆菌主要引起细胞免疫反应，属于传染性免疫
药物 RFP INH SM EMB CPM OFX ETH PAS LVF MOF RFB AMI KAN CLO
耐药 例数
80 146 94
58 50 61 41 49 53
62
60 11 13 87
耐药率 %
15.7
28.6
18.4
11.4
9.8
11.9
8.0
9.6
结核病患者的常规检验
• 三大常规（血常规、尿常规、大便常规）
• 血沉
• 血流变检测
• 肺结核患者血液粘滞性、凝固性、聚集性 均增高，血流缓慢，易于促成肺内微血栓 形成
常规检测，无特异性。
——《微循环学杂志》
结核病患者的常规检验
• 腺苷脱氨酶（ADA）:其血清/浆膜腔积液比值更有意义。 • C反应蛋白 （CRP）: X线提示有空洞的结核病人比没有
结核分枝杆菌体外药敏试验
1
挑取菌落 磨菌、稀释
2
接种菌液
3
孵育7-10天
4
显色， 读取结果
结核分枝杆菌液体微量药敏
结核分枝杆菌体外药敏试验
结核分枝杆菌液体微量显色法药敏试验
收集我院2015年8月至11月的临床分离菌株511例， 使用液体微量显色法进行了利福平、异烟肼、链霉素、 乙胺丁醇、卷曲霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺对氨基水 杨酸、左氧氟沙星、莫西沙星、利福布丁、阿米卡星、 卡那霉素、氯苯吩嗪等十四种抗结核药物的体外药敏试 验 。其中MDR-TB菌株75例（14.7%）。
结论：离心制片法的确能提高结核杆菌涂片检测的阳性率。
结核杆菌自动阅片技术
• 2016年2月至2016年3月，本院对308例涂片进行人工阅片 和计算机自动阅片比对试验；结果符合的为286例，总符 合率为92.58%。
结核分枝杆菌体外药敏试验
固体 培养法
结核杆菌体外 药敏试验
MIC 测定法
液体 仪器法
液体 微量法
结核分枝杆菌体外药敏试验
Drug free Isoniazid Ethambutol
Inoculum media 0.2 mcg/ml 2.0 mcg/ml
10-3
++++
++
3
10-5
26
9
0
% resistant
34.6
0.1Biblioteka Interpretation
Resistant Susceptible
肿瘤患者均升高。
——《中国实用内科杂志》2003年 第2期
结核病患者的常规检验
• 超敏C反应蛋白：肺结核是结核分枝杆菌感染导致机体细胞免疫功能下降的
慢性呼吸道传染病，患者血清中HS—CRP、免疫球蛋白、补体可发生改变。
• 降钙素原（PCT）
——《中国实验诊断学》 2009年01期
• 肺结核患者血清PCT水平明显低于社区获得性肺炎（CAP）患者，HIV阴性