SPE结合 结合LC-MS/MS技术对日本肯定列表规定食品中残留的农 结合 技术对日本肯定列表规定食品中残留的农 业化学品进行多残留监测美国瓦里安公司摘要2006年5月29日，日本卫生、劳动和福利部 (MHLW，相当于美国 FDA）在食品中引入 农业化学品残留物肯定列表制度，即禁止农药化学品含量超过最大残留限量标准 （MRLs）的食品销售。
这些农药化学品包括农药，饲料添加剂，兽药 。
该法规适用于所 有的日本本土生产和进口的食品。
肯定列表中涉及的化学品近800种 。
西太平洋/澳 大利亚与日本一样也是最大的农产品进口国，因此在这些地区内对食品的检测也基本依 照此标准，其它一些国家也倾向于以此为指导进行检测。
法规中规定的分析方法草案使 用SPE结合LC/MS 或者 GC/MS 技术对这些化学品进行检测。
为了应对日本肯定列表，Varian的科学家们开发了一种食品中农业化学品的多残留检测 方法。
方法中包括67种中性、碱性和酸性的化合物，采用两种不同的分析方法，最后结 合LC/MS/MS检测技术进行分析。
将复杂的酸性化合物混为一组， 使用高分辨Pursuit® XRs C18 柱结合串联质谱检测技 术，达到了很好的色谱和质谱分离效果。
针对日本肯定列表中所涉及的食品种类给出了 极具挑战性的化学品的检测方案21介绍3日本肯定列表使用的分析方法基于样品基质和分析模式的不同而选 取不同的分析方法： 取不同的分析方法： 农业化学品多残留GC/MS分 农业化学品多残留GC/MS分 GC/MS 析方法（农产品） 析方法（农产品） 农业化学品多残留LC/MS分析 农业化学品多残留LC/MS分析 LC/MS 方法Ⅰ 农产品） 方法Ⅰ(农产品） 农业化学品多残留LC/MS分析 农业化学品多残留LC/MS分析 LC/MS 方法Ⅱ 农产品） 方法Ⅱ(农产品） 农业化学品多残留GC/MS GC/MS分析方法 农业化学品多残留GC/MS分析方法 (畜禽产品和水产品) 畜禽产品和水产品) 兽药多残留HPLC分析方法Ⅰ 兽药多残留HPLC分析方法Ⅰ(畜 HPLC分析方法 禽产品和水产品) 禽产品和水产品) 兽药多残留HPLC分析方法Ⅱ 兽药多残留HPLC分析方法Ⅱ HPLC分析方法 畜禽产品和水产品) (畜禽产品和水产品)42基质试验和农业化学品监测基质试验： 基质试验： 蔬菜，水果 （高湿，低脂肪） 1. 蔬菜：西红柿（高水分含量 西红柿(高水分含量） 2. 水果：柠檬（低pH） 农业化学品监测: 农业化学品监测: 日本肯定列表中的799种化合物之中 ，其中67种化合物可以用 LC/MS分析方法LC/MS 方法I涉及42种化合物； LCMS方法II涉及25种化合物Cyazofamid氰霜唑 Cyclanilide环丙酸酰胺 Cyflufenamid Dichlorprop 2，4-滴丙酸 Diclosulam 双氯磺草胺 Dimethirimol 甲菌定 Fenoxycarb 双氧威 Ferimzone (E) 嘧菌腙(E) Ferimzone(Z) 嘧菌腙(Z） Florasuram Flumetsulam 唑嘧磺草胺 Fluroxypyr 氟草烟 Fomesafen 氟磺胺草醚 Forchlorfenuron 吡效隆 Furathiocarb 呋线威 5 Gibberellin 赤霉素 Haloxyfop 氟吡甲禾灵 Imazaquin灭草喹 Imidacloprid 吡虫啉 Indoxacarb 茚虫威 Ioxynil碘苯腈 Iprovalicarb 异丙菌胺 Isoxaflutole 异恶唑草酮 Lactofen 乳氟禾草灵 MCPB 二甲四氯丁酸 Mecoprop (MCPP)2,4,5-三氯苯氧基乙酸 Mecoprop (MCPP-P) 对2,4,5-三氯苯氧基乙酸 Methoxyfenozide 甲氧虫酰肼 Milbemectin A3 密灭汀 Tridemorph (isomer 1)克啉菌 Naproanilide 萘丙胺 Oryzalin 黄草消 Oxycarboxin 氧化萎莠灵 Phenmedipham苯底草 Pyrazolynate Pyriftalid环酯草醚 Quizalofop-ethyl喹禾灵 Simeconazole硅氟唑 Thiabendazole涕必灵 Thiacloprid噻虫啉 Thiamethoxam噻虫嗪 Thidiazuron噻苯隆 Thifensulfuron-methyl磺隆 Tralkoxydim (isomer 1)三甲苯草酮1 Tralkoxydim (isomer 2)三甲苯草酮2 Triclopyr氯草定 Milbemectin A4 弥拜菌素 A4 Tridemorph (isomer 2) 克啉菌 Triflusulfuron-methyl胺磺隆 Triticonazole灭菌唑试验步骤 : 液-液萃取方法 I & II水果、蔬菜、草药样品, 称取 20.0 g；茶叶和蛇麻草称取5g样品并加入20mL水，静 置15min； 加入50mL乙腈，进行匀浆，抽滤，用20mL乙腈淋洗滤纸上的残留物，合并滤 液，最后用乙腈定容至100mL；方法一量取20mL滤液，加入10g. NaCl和20mL 0.5 mol/L的磷酸缓冲液(pH7.0)，充分振 摇，静置使溶液分层，弃去水相层；将 乙腈层溶液过装有无水硫酸钠的漏斗，并 用适量乙腈淋洗漏斗，收集全部滤液；方法二量取20mL滤液，加入10g NaCl和20mL 0.01mol/L的 盐酸溶液，充分振摇，静置使溶液分层，弃去水相 层；将乙腈层溶液过装有无水硫酸钠的漏斗，并用适 量乙腈淋洗漏斗，收集全部滤液；低于40℃温度条件下，浓缩近干，用 2mL的乙腈/甲苯(3:1)重新溶解，待净化。
6低于40℃温度条件下，浓缩近干，用2mL丙酮/三 乙胺/正己烷 (20:0.5:80）重新溶解，待净化。
3步骤2: (方法 步骤2: Bond Elut Carbon/NH2 (方法 I) 和 Si( II)净化 Bond Elut Si(方法 II)净化方法 I 方法 II用5ml甲醇，5ml丙酮和10ml正己烷分别预淋洗硅 用10mL的乙腈/甲苯(3:1)淋洗Bond Elut Carbon/NH2 (500 mg/500mg, 6 ml, Catalog 胶SPE柱 (Bond Elut Si, 500 mg, 10ml, #: 12252202)柱 ，进行活化；将上述2mL样 Catalog #: 14113036)；上样。
品溶液，加入到Carbon/NH2.SPE柱中；用 20.mL的乙腈/甲苯(3:1)淋洗SPE柱； 用 10ml丙酮/三乙胺/正己烷 (20:0.5:80), 洗 脱液弃之； 收集所有上样流出液和洗脱液；低于40℃ 温度条件下，浓缩近干，再加入5mL丙酮重新 用 20ml丙酮/甲醇 (1:1)洗脱，收集全部洗脱 溶解后并浓缩近干； 液；40°C 以下温度浓缩近干，重新用甲醇定溶至 4ml，待测。
用甲醇定容至4ml ，待测。
7LC 色谱条件色谱柱: Pursuit XRs C18 (方法I), Pursuit C18 (方法 II) 规格: 150 x 2.0 mm, 3μ (PN. A6001150X020, A3001150X020) 流动相： A：水 + 3mM 乙酸铵, B：甲醇 + 3mM 乙酸铵 梯度： 时间: %A %B 流速 流速： 0.2 ml/min 0:00 85.0 15.0 0.2 柱温 室温 (方法 I), 1:00 60.0 40.0 0.2 40°C (方法 II) 3.50 60.0 40.0 0.2 离子源 : ESI 6:00 50.0 50.0 0.2 8:00 45.0 55.0 0.2 离子化模式： 正/负 17:50 5.0 95.0 0.2 碰撞气： 氩气 30:00 5.0 95.0 0.2 质谱仪： Varian 320 30:06 85.0 15.0 0.2 LC/MS/MS 40:00 85.0 15.0 0.284MS方法 I: MS-MS 条件化合物 Abamectin Bla 阿维菌素 Anilofos 谷硫磷 Azinphos-methyl 甲基谷硫磷 Azamethiphos 甲基吡恶磷 Benzofenap 吡草酮 Butafenacil 氟丙嘧草酯 Chloridazon 氯草敏 Chromafenozide 环虫酰肼 Clomeprop 氯甲酰草胺 Clonquintcet-mexyl 解毒喹 Clothianidin 噻虫胺 Cyazofamid 氰霜唑 Cyflufenamid Dimethirimol 甲菌定 Fenoxycarb 双氧威 嘧菌腙(E) Ferimzone (E) 嘧菌腙 嘧菌腙(Z） Ferimzone (Z) 嘧菌腙 ） Furathiocarb 呋线威 Imidacloprid 吡虫啉 Indoxacarb 茚虫威 9 Iprovalicarb 异丙菌胺 母离子 891 368 318 325 431 492 222 395 324 336 250 413 325 210 302 255 255 383 256 528 321 子离子1 子离子 305 199 160 183 105 331 92 175 120 238 169 295 108 71 116 132 124 252 209 150 119 子离子 2 567 125 77 112 119 180 77 147 105 192 132 241 261 140 88 91 91 195 175 203 203 ESI 模式 (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) 碰撞能量 (V) 25 12 10 15 25 20 23 18 15 15 11 12 9.5 28 10 20 25 15 10 18.5 20MS条件（ 方法 I: MS-MS 条件（续）化合物 Isoxaflutole 异恶唑草酮 Lactofen乳氟禾草灵 Methoxyfenozide 甲氧虫酰肼 Milbemectin A3密灭汀 A3 MilbemectinA4 密灭汀A4 Naproanilide 萘丙胺 Oryzalin 黄草消 Oxycarboxin 氧化萎莠灵 Phenmedipham 苯底草 Pyrazolynate Pyriftalid 环酯草醚 Quizalofop-ethyl喹禾灵 Simeconazole 硅氟唑 Thiabendazole 涕必灵 Thiacloprid 噻虫啉 Thiamethoxam 噻虫嗪 Tralkoxydim肟草酮(isomer 1) Tralkoxydim肟草酮(isomer 2) Tridemorph十三吗啉 (isomer 1) 母离子 360 479 -367 551 565 292 -345 268 301 439 319 373 294 202 253 292 -328 -328 298 298 318 子离子 1 251 344 -149 343.8 337 171 -281 175 168 91 139 299 70 175 126 211 -254 -254 130 130 70 子离子 2 144 223 -105 240 240 120 -78 147 136 229 93 85 73 131 90 181 -66 -66 98 98 125 ESI 模式 (+) (-) (+) (-) (-) (-) (-) (-) (+) (+) (-) (+) (-) (-) (+) (+) (-) (-) (+) (+) (+) 碰撞能量 (V) 11 16 9.5 13 13 10 36 21.5 11 18 15 38 12 15 15 9.5 22 22 15 15 12Tridemorph十三吗啉 (isomer 2) 10 riticonazole灭鼠优5方法II: 方法 MS-MS 条件化合物 4-Chlorophenoxyacetic acid 对氯苯氧乙酸 Acifluorfen 三氟羧草醚 Bromoxynil 溴苯腈 Cloprop调果酸 Cloransulam-methyl 氯酯磺草胺 Cloransulam-methyl 氯酯磺草胺 Cyclanilide环丙酸酰胺 Dichlorprop 2，4-滴丙酸 Diclosulam 双氯磺草胺 Florasuram Flumetsulam唑嘧磺草胺 Fluroxypyr氟草烟 Fomesafen氟磺胺草醚 Forchlorfenuron吡效隆 Gibberellin赤霉素 Haloxyfop氟吡 氟吡甲禾灵 氟吡 Imazaquin灭草喹 Ioxynil碘苯氰 MCPB二甲四氯丁酸 Mecoprop (MCPP) 2,4,5-三氯苯氧基乙酸 Mecoprop (MCPP-P)对2,4,5-三氯苯氧基乙酸 Thidiazuron噻苯隆 母离子 -185 -185 -359.8 -276 -199.1 430 -272 -233 406 360 326 -252.7 -437 248 -345 362 312 -370 -227 -213 -213 -219 388 -255.7 493 子离子 1 -140.7 -126.7 -315.8 -81 -127 398 -159.9 161 378 129 129 -197.7 -195 129 -239 -316 267 -126.9 -140.9 -140.9 -140.9 -99.8 167 -197.7 264 -128.7(-187) -112.9 -79 -70.9 370 -227.9 -125 160.9 360 109 -233 -285.9 93 -143 288 199.1 -214.9 -227 -70.9 -70.8 -70.8 205 -218 96 子离子 2 ESI 模式 (-) (-) (-) (-) (-) (+) (-) (-) (+) (+) (+) (-) (-) (+) (-) (+) (+) (-) (-) (-) (-) (-) (+) (-) (+) 碰撞能量 (V) 9.5 13 7 22 10.5 16.5 23 15 9.5 15 15 12 38 15 18 11 21.5 36 10 13 13 9.5 16 11 7.511Thifensulfuron-methyl磺隆 Triclopyr氯草定 Triflusulfuron-methyl胺磺隆净化样品: 使用 Bond Elut Carbon/NH2净化样品: 可 净化样品 以有效地去除色素类干扰物Bond Elut Carbon 是由类似石墨的碳原子组成均匀的表面排列，吸附剂表面的极少的氧复合物所 产生的的极性吸附位点却会对极性化合物产生很强的作用，因此这种吸附剂对疏水性化合物是一 种非特异性吸附剂；同时，在某种程度上又是一种阴离子交换吸附剂。