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严重后果
❖院长、副院长及相关医务主管负责人撤职 ❖卫生部通报批评，严令整改 ❖医院营业量一落千丈，“百佳医院”名声
外毒素的检测：待检菌的鉴定，并区分
产毒株与非产毒株
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鲎试验
一种海洋无脊椎动物 蓝色的血液
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鲎试验的发现
❖1956年Johns Hophins 大学动物学家 Frederik Bang发现革兰阴性细菌的粗制 品能使鲎的血细胞凝聚。
❖1963～1964年 Jack.Levin和Bang对细菌 引起鲎血凝聚进行研究，用内毒素和鲎 血细胞溶解物证明鲎血凝聚机制是一种 酶反应。
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核酸杂交在临床微生物检测中的应用
❖细菌分类鉴定 ❖细菌快速鉴定 ❖细菌耐药性的检测 ❖细菌毒素的检测 ❖细菌流行病学调查
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聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）
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PCR扩增产物的分析
❖凝胶电泳分析法 ❖斑点杂交法 ❖酶谱分析法 ❖序列分析法
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PCR产物的分析
特点：高通量、高集成、微型化、平行化、 多样化和自动化
发展迅速，应用日益广泛
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基因芯片的优点
❖短时间分析大量的核酸序列 ❖可25
分子生物学检测应用发展
❖传统方法目前不可替代 ❖快速简便的分子诊断技术越来越普及
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细菌毒素的检测
内毒素的检测：G-细菌感染（鲎试验）
❖已知抗原检测抗体的存在：效价 （或滴度）的升高
❖诊断血清
▪ 多价血清 ▪ 单价血清
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一、链球菌感染
（一）化脓性链球菌 免疫学检查
生物学性状
是引起化脓性疾病的常见细
菌 A群链球菌有较强的侵袭力 可产生多种酶和外毒素
✓ 抗链球菌溶血素“O” ✓ 抗链激酶试验 ✓ 抗透明质酸酶（ADH） ✓ 抗DNA酶B（DNA-B） ✓ 抗链球菌多糖体（ASP）
一）类脂抗原试验 1、性病研究实验室试验（ venereal disease
research laboratory，VDRL） 2、不加热血清反应素试验（unheated serum
reagin，USR） 3、快速血浆反应素试验（ rapid plasma reagin，
RPR） （4）TRUST(甲苯胺红不加热血清试验)
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二）密螺旋体抗体试验 1、荧光密螺旋体吸收试验（fluorenscent
treponemal antibody-absorption， FTAABStest） 2、梅毒螺旋体血凝试验（ treponemal pallidum hemagglutination test，TPHA) 3、ELISA：区分IgM和IgG，判断先天性梅毒 或活动性神经梅毒。
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PCR在临床微生物检验中的应用
❖细菌的快速检测 ❖细菌毒素的检测 ❖细菌的耐药性的检测 ❖细菌流行病学调查
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基因芯片技术
最早的生物芯片
概念源于计算机芯片
1998年度世界10大科技进展之一
基本原理：微阵列技术，核苷酸固定到固体支持物上， 将处理好的样品与其进行杂交，以实现对所测样品基 因的大规模检验。
疗效检验
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医院内感染
医院内感染“西安事件”
事件经过
– 2008年8月28 日至9月16日期间,西安交通大学医学院第一附 属医院新生儿科收治的94名新生儿患者中,有8名新生儿从9月5 日至15日先后死亡 – 临床表现：自9月3 日起相继出现发热、心率加快、肝脾肿 大等临床症状，其中8名新生儿于9月5 日—15 日间发生弥漫性 血管内凝血相继死亡，1名新生儿经医院治疗好转。 –卫生部于9月23 日接到关于该事件的举报信息后，立即组织 专家调查组赶赴该院，与陕西省专家调查组共同开展实地调查。 –经专家组调查，认为该事件是一起严重医院内感染事件。
❖多位学者对鲎血细胞溶解物（LAL）进行 研究，阐释了凝聚机制
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凝胶法鲎试剂与内毒素的反应机理
——复杂的酶促反应过程
内毒素 二价阳离子
C因子
活化的C因子
B因子
活化的B因子
（旁路反应）
β(1,3)-D-葡聚糖或LAL-RM
活化的G因子
G因子
凝固酶原
凝固酶
凝固蛋白（凝胶）
凝固蛋白原
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动物实验
❖分离和鉴定病原微生物 ❖测定细菌的毒力 ❖制备免疫血清 ❖建立致病动物模型 ❖取动物的血清配制培养基 ❖用于生物制品或一些药物的安全、毒性、
酶联免疫吸附 试验 (ELISA）
检测伤寒杆菌 的抗原和抗体
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三、结核分枝杆菌感染
生物学性状
分枝杆菌科分枝杆菌属 人型和牛型是人类的主要致病 菌 可诱导抗感染细胞免疫和体液 免疫反应
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免疫学检测方法
✓ 分枝杆菌抗原检测 ✓ 结核特异性IgG的检 测 ✓ 特异性免疫复合物
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梅毒螺旋体
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调查发现
❖儿科建筑布局和工作流程不合理，人流与物流相 互交叉;对部分新生儿使用的物品和器具采用了错误 的消毒方法;医务人员没有规范地进行手卫生; 用于 新生儿的肝素封管液无使用时间标识等。 ❖对部分医务人员的手、病房物体表面、新生儿使 用的奶瓶和奶嘴、新生儿暖箱注水口等进行检测， 发现细菌超标严重，有金黄色葡萄球菌、肺炎克雷 伯菌的明显污染。
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ASO的临床检测
胶乳凝集 试验
免疫散射 比浊法
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ASO检测的临床意 义
ASO增高常见于： ➢ 急性咽炎等上呼吸道感染
➢ 风湿性心肌炎 ➢ 心包炎 ➢ 风湿性关节炎 ➢ 急性肾小球肾炎等 ➢ 免疫功能不全ASO可不增高
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二、伤寒沙门氏菌感染
免疫学检测方法
肥达氏凝 集试验
凝集时抗体效 价≥1:80为阳性
细菌非培养检测方法
非培养方法极大节约检验时间
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主要方法
❖免疫学检测 ❖分子生物学检测 ❖细菌毒素检测 ❖动物实验
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免疫学检测
Ag+Ab
AgAb
用已知抗体或抗原来检测未知抗原抗体
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抗原检测
❖凝集试验 ❖免疫荧光技术 ❖ELISA
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抗体检测
❖临床常用于：TB、梅毒、肺炎支 原体、肺炎衣原体检测
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细菌感染的分子生物学检测
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细菌感染的分子生物学检测
❖核酸杂交 ❖聚合酶链反应（PCR） ❖生物芯片技术
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核酸杂交
❖核酸探针：带有标记物、能与特定核酸序 列发生特异性互补的已知序列核酸片段。
❖核酸杂交方法：
1.斑点杂交 2.菌落原位杂交 3.Southern印迹 4.Northern印迹