粗蛋白质= V2 − V1 × c × 0.0140 ×
6.25 m×
V′ ������
× 100%
式中：V2——滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL； V1——滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL； c——盐酸标准溶液浓度，mol/L； m——试样质量，g V——试样分解液总体积，mL V ’——试样分解液蒸馏用体积，mL； 0.0140——与 1.00mL 盐酸标准液【c（HCL）=1.000mol/L】相当的、以 克表示的氮的质量。
（8） 锥形瓶 150、250mL； （9） 容量瓶 100mL； （10） 消煮管 250mL； （11） 定氮仪 以凯氏原理制造的各类型半自动、全自动蛋白质测定仪。 四、分析步骤 （一）仲裁法 1. 试样的消煮 称取试样 0.5-1g（含氮量 5-80mg） （精确至 0.0002g） ，放入凯式 烧瓶中，加入 6.4g 混合催化剂，与试样混合均匀，再加入 12mL 硫酸和 2 粒 玻璃珠， 将凯式烧瓶置于电炉上加热， 开始小火， 待样品焦化、 泡沫消失后， 再加强活力（360-410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，消化全过 程至少 2h。 2. 氨的蒸馏 （1） 常量蒸馏法 将试样消煮液冷却，加入 60-100mL 蒸馏水，摇匀，冷却。将 蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有 25mL 硼酸吸收液和 2 滴混合指示剂的锥 形瓶内。然后小心地向凯式烧瓶中加入 50mL 氢氧化钠溶液，轻轻摇动凯 式烧瓶，使溶液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体体积为 100mL。降下锥 形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏 1-2min，并用蒸馏水冲洗冷凝 管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。 （2） 半微量蒸馏法 将试样消煮液冷却，加入 20mL 蒸馏水，转入 100mL 容量 瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，作为试样分解液。将半微量蒸馏装 置的冷凝管末端浸入装有 20mL 硼酸吸收液和 2 滴混合指示剂的锥形瓶内。 蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴， 在蒸馏过程中保持此液为橙 红色， 否则需补充硫酸。 准确移取试样分解液 10-20mL 注入蒸馏装置的反 应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加 10mL 氢氧 化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处 加水密封， 防止漏气。 蒸馏 4min 降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面， 再蒸馏 1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停 止蒸馏。 注：两种蒸馏法测定结果相近，可任选一种。
6.25——氮换算成蛋白质的平均系数。 七、 重复性 当粗蛋白质含量在 25%以上时，允许相对偏差为 1%。 当粗蛋白质含量在 10%-25%以上时，允许相对偏差为 2%。 当粗蛋白质含量在 10%以下时，允许相对偏差为 3%。
浙江紫香糖业使用的定氮仪是上海新嘉
型号：KDN-AZ 智能型定氮仪蒸馏器 KDN-AZ 智能型定氮仪是我公司根据用户对仪器自动化的需求进行改进的一款半自动凯氏测定 装置，在 A 型的基础上安装了自动蒸馏控制元件，使原本繁琐的蒸馏控制更为简便，提升了工 作效率，保证了样品测定的精准性，并且加装了自动排水系统，用户不用担心因蒸发炉水未排尽 而造成下次开机出现烧保险丝的烦恼。 测定范围：0.1-200mg 氮（0.05%~95%） 重现性：1%相对误差（包括消化步骤） 回收率：99.5%-100%（1~200mg 氮） 耗能：800W 外形尺寸：380*330*750 重量（KG） ：26 （可根据需要搭配消化炉）
蛋白质的检测（参考 GB/T6432-94）
一、原理 凯氏定氮法测定试样中的含氮量， 即在催化剂作用下， 用浓硫酸破坏有机物， 使含氮物转化为硫酸铵。 加入强碱进行蒸馏使氮溢出， 再用酸滴定， 测出氮含量， 将结果乘以换算系数 6.25，计算出粗蛋白含量。 二、试剂 （1） 硫酸 蒸馏步骤的检验 精确称取 0.2g 硫酸铵， 代替试样， 选仲裁法或推荐法 “氨 的蒸馏”中的步骤进行操作，测得硫酸铵含量为 21.19%±0.2%，否则应 检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。 （二）推荐法 1. 试样的消煮 称取 0.5-1g 试样（含氮量 5-80mg） （精确至 0.0002g） ，加入消化 管中，加 2 片消化片（仪器自备）或 6.4g 混合催化剂，与 420℃下在消煮炉 上消化 1h。取出冷却后加入 30mL 蒸馏水。 2. 氨的蒸馏 采用全自动定氮仪时，按仪器本身常量程序进行测定。 采用半自动定氮仪时，将带消化液的管子插在蒸馏装置上，以 25mL 硼酸为 吸收液，加入 2 滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的 锥形瓶内，然后向消煮管中加入 50mL 氢氧化钠溶液进行蒸馏。蒸馏时间以 吸收液体积达到 100mL 为宜。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液 均流入锥形瓶内。 3. 滴定 用 0.1mol/L 的盐酸标准溶液滴定吸收液， 溶液由蓝色变成红色为终点。 五、空白测定 称取蔗糖 0.5g，代替试样，进行空白测定，消耗 0.1mol/L 盐酸溶液的体积不 得超过 0.2mL。消耗 0.02mol/L 盐酸标准溶液体积不得超过 0.3mL。 六、分析结果的计算和表述 计算见下式：
（2） 混合催化剂 0.4g 硫酸铜，含 5 个结晶水，6g 硫酸钾或硫酸钠，均为化学 纯，磨碎混匀； （3） 氢氧化钠 化学纯，40%水溶液（m/V） ； （4） 硼酸 化学纯，2%水溶液（m/V） ； （5） 混合指示剂 甲基红 0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿 0.5%乙醇溶液，两溶液等体 积混合，在阴凉处保存期为 3 个月； （6） 盐酸标准溶液 基准无水碳酸钠法标定； a) 0.1mol/l 盐酸标准溶液：8.3mL 盐酸注入 1000mL 蒸馏水中。 b) 0.02mol/l 盐酸标准溶液：1.67mL 盐酸注入 1000mL 蒸馏水中。 （7） 蔗糖 分析纯； （8） 硫酸铵 分析纯，干燥； （9） 硼酸吸收液 1%硼酸水溶液 1000mL，加入 0.1%溴甲酚绿乙醇溶液 10mL， 0.1%甲基红乙醇溶液 7mL，4%氢氧化钠水溶液，混合，置阴凉处保存期 为 1 个月（全自动程序用） 。 三、仪器设备 （1） 实验室用样品粉碎机或研钵； （2） 分样筛 孔径 0.45mm（40 目） ； （3） 分析天平 感重 0.0001g； （4） 消煮炉或电炉； （5） 滴定管 酸式，10、25mL； （6） 凯氏烧瓶 250mL； （7） 凯氏蒸馏装置 常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式；