点样处
+
+
—
—
—
—
薄膜 点样端
醋酸纤维薄膜电泳图谱
滤纸桥
电泳槽示意图
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电泳装置
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点样
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实验二 双缩脲测定蛋白质含量
一、实验目的
掌握双缩脲测定蛋白质的方法和原理
二、实验原理 双缩脲在碱性溶液中与Cu2+产生紫色的络合物,
这一反应称“双缩脲反应”。蛋白质分子中肽键， 也能与Cu2+ 发生双缩脲反应，溶液紫色的深浅与蛋 白质含量在一定范围内成正比，而与蛋白质的氨基 酸组成及分子量无关。该紫色的络合物在580nm处 有最大吸收值。
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三、实验步骤
1、标准曲线制作（已制好） 2、样品测定
编号 豆粉（g）
1
2
3
0.16 0.14 0.12
0.1 0.08 0.06 0.04 0.02
0 0
标准曲线上查得蛋白质含量（g）
豆粉（g）
y = 0.163x R2 = 0.994
×100
0.2
0.4
0.6
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0.8
1
OD580
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实验三 血液葡萄糖的测定
0
0.1000
0.1000
碳酸铜（g）
1.00
1.00
1.00
无水乙醇（ml）
20
20.00
20.00
10%KOH（ml）
20
20.00
20.00
振荡10min，静置片刻，将上清过滤后580nm测定吸光值
OD540 标线上查出的Pr的量
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3、结果计算
样品蛋白质 含量（%）
=
酪蛋白克数
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三、步骤：
pH8.6 巴比妥缓冲液
滤纸吸去膜上液体
醋酸 ——————————→ 浸泡——————————→点样
纤维薄膜 10min
沾血清点在无光泽面上
2mA/条膜
染色液
漂洗液
—————→ 电泳—————→ 染色———————→ 漂洗
40min
5min
浸泡漂洗数次
——→ 观察电泳谱带
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3、计算
（V1－V2）×K×V X=
W×V3
×100
X ：100克样品所含维生素C毫克数 W ：称取样品毫克数 V1：滴定样品所用染料毫升数 V2：滴定空白所用染料毫升数 V3：样品测定时所用滤液毫升数（即10毫升） V ：样品提取液稀释至总体积（即50毫升） K ：1毫升染料所能氧化维生素C之毫克数，可由标定 算出
一、实验目的 学习和掌握Folin-吴宪法测定血糖的方法
二、实验原理
碱性 G ＋Cu2+
氧化亚铜 ＋ 磷钼酸
钼蓝
420nm处有大吸收峰
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三、实验步骤
血糖 试剂（ml）
无蛋白血滤液 蒸馏水 标准葡萄糖应用液 碱性铜试剂
空白管 低浓度标准管 高浓度标准管 测定管
—
—
2.0 1.0
—
1.0
生物化学实验
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生物化学实验内容
1、 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白质 2、双缩脲测定蛋白质的含量 3、 血液葡萄糖的测定 4、 牛乳酪蛋白提取与鉴定 5、 维生素C的提取与含量的测定 6、 琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制 7、 酶的基本性质 要求：课前预习，试验中做记录，课后写实验报告。
两人一组，离开实验室时签字。
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2、滴定
（1）标定染料（标准维生素C液滴定）：准确吸取标准维 生素C溶液10毫升（含1.0毫克维生素C）置100毫升锥形瓶 中，用微量滴定管以0.1%2，6一二氯酚靛酚滴至淡红色出 现，15秒钟不退色即为滴定终点。记录所用染料体积计算 出1毫升染料相当于多少毫克维生素C（K值），即1/染料 ml。 (2)样液滴定:准确吸取滤液10毫升放人100毫升锥形瓶内， 滴定方法同前(做两次平行试验)，记录染料体积。 (3)空白液滴定：准确吸取10毫升2%草酸溶液，放入100毫 升锥形瓶中，用上述方法滴定至终点，记录所用染料体积。 （滴定过程宜迅速，一般不超过2分钟）
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实验五 维生素C的定量测定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法）
一、实验目的 掌握滴定法测定Vc含量的原理和操作。
二、实验原理
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三、实验步骤
1.提取: 2.0克松针（2份）+少量 2%草酸
匀浆
过滤后用2%草酸定容到50毫升 （也可先定容后过滤或离心）
2ml
2ml
2ml
酪蛋白 少许 少许
少许
少许
少许
少许
溶解情况
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2.米伦反应：
少许酪蛋白+lml H2O+米伦试剂10滴， 振摇，加热
观察其颜色变化
3.含硫 (胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸)测定:
少量酪蛋白+lmlO.1M NaOH+ 5%醋酸铅1-3滴
煮沸
观察现象
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2.0 2.0
—
1.0
—
1.0
2.0
—
2.0
2.0
混匀，置沸水浴中煮8分钟，取出，用流动的自来水冷却3分钟 （切勿摇动血糖管）
磷钼酸试剂
2.0
2.0
2.0
2.0
1：4磷钼酸溶液加 至
25
25
25
25
OD420
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四、计算
高标准管：
测定管光密度
100
× 0.2 ×
=葡萄糖mg/100ml
生物化学实验Biblioteka 品实验一 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
一、目的： 了解电泳技术基本原理，掌握醋酸纤维薄膜电泳操作技
术。 二、原理：
蛋白质是两性电解质，在非等电点状态下在电场中会向 一定电极移动。在碱性条件下多数蛋白质带负电荷，在电 场中向正极移动 ， 不同蛋白质由于大小、所带电荷及形 状不同，在电场中的迁移率不同，经过电泳可将其分开， 结果经染色、漂洗，得电泳图谱。 材料 ：血清
冷却至室温，继续放置5分钟
离心3000r/5min
清液（乳清） 加热观察现象
沉淀
沉淀
醇醚混合物洗2次
清液
晾干，鉴定
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弃掉
2、酪蛋白的性质鉴定
（1）溶解度观察
溶液
H2O 10%NaCl 0.5%Na2CO3 0.1M NaOH 0.2%HCl 饱和Ca(OH)2
试剂量 2ml 2ml
2ml
标准管光密度
0.1
低标准管：
测定管光密度
100
× 0.1 ×
标准管光密度
0.1
=葡萄糖mg/100ml
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实验四 牛奶中蛋白质的提取与鉴定
一、实验目的 学习从牛奶中制备酪蛋白的方法并
进行鉴定试验 二、实验原理
蛋白质等电点 沉淀 三、实验步骤
1、酪蛋白的制备
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鲜牛乳3Oml（40℃）+3Om醋酸缓冲液（40℃） 边加边摇动