大肠菌群检测方法
• MPN(Most Probable Number)法
最大可能数法
• 直接计数法
3MTMPetrifilmTM法 VRB(Violet Red Bile)培养基法
Microbiology
国标MPN 法
乳糖胆盐发酵 24 ± 2 h
EMB琼脂平板 18 – 24 h
乳糖发酵管 18 – 24 h
Microbiology
3MTM PetrifilmTM细菌总数测试片
Microbiology
平板法和 Petrifilm纸片法的对照试验
表 琼脂平板法和 PetrifilmTM纸片法对6类试样对比试验结果的差异检验
Samples
肉与肉制品 奶和奶制品 饮料 糕点 调味品 冷荤制品
No
29 17 14 30 27 21
细菌总数检测标准
• 国标 (GB 47892—94)
我国
• FDA平板法
美国 (FDA，l986) 日本 (日本食品卫生协会，1993) 台湾 (Marin，1978)
• PetrifilmTM纸片法
美国AOAC, 美国公共健康协会，法国AFNOR, 日本卫生部等
Microbiology
影响平板法检测结果的因素
Microbiology
3M微生物产品
有效控制食品工业中的微生物危害
Microbiology
3M微生物产品
Microbiology
检测方法概述
1. 食品卫生细菌的检测
细菌总数、大肠菌群
2. 食品中病原菌的检测
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌
3. 食品中霉菌酵母菌的检测
霉菌酵母菌
Microbiology
• 培养基制备
培养基质量 培养基灭菌时间、加热时间 倾注时的培养基温度控制
• 菌落计数
样品干扰 菌落小 菌落成片
Microbiology
菌落指示剂
TTC
(Tri-phenyl Tetrazolium Chloride, 氯化三苯基四氮唑) 原理 细菌具有脱氢酶能使相应的底物脱氢而释放出氢离子， 培养基中的 TTC作为氢离子的受体，在接受氢离子后会 被还原为红色非溶解性产物－三苯甲 (Formazan)，从而 使细菌着色，达到易观察便计数的效果。
食品微生物检测技术
陆苏飚
技术工程师/硕士 3M 技术中心
Microbiology
全
球
¾ 3M产品远销200多个国家
¾ 在60多个国家设有分支机构 拥有29个国际研究所和开发实验室 建立41家工厂
Microbiology
Welcome
Microbiology
Microbiology
创意全为你
¾ 3M为全球市场生产创新 产品 ¾ 3M具有发现顾客需求， 发明核心技术，提供价 值服务的独特能力
－大肠菌群的检测
大肠菌群的定义： 需氧及兼性厌氧、在37 °C能分解乳糖产 酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
*国家1994年颁布的食品卫生检验方法微生物学部分
Microbiology
大肠菌群
• • • •
埃希氏菌属
大肠埃希氏菌
肠杆菌属
阴沟肠杆菌
枸橼酸杆菌属
弗劳地枸橼酸杆菌
克雷伯氏菌属
产气克雷伯氏菌
Microbiology
p3 3
− 0.001λ p3
) (e
− 0.001λ 3− p3
)
Microbiology
最大可能数 ≠ 最大数
2-0-0 (90 MPN/100g) Pmax = 31.9% 50 45 40 35 Probability (%) 30 25 20 15 10 5 0 0 25 50 75 100 125 150 175 200 225 250 275 300 325 350 375 400 425 450
) (e
−0.1λ 3− p2
)
) (e
− 0.01λ 3− p3
)
接种量为 0.1,0.01,0.001 ml(g)时的概率：
P = C (1 − e
p1 3
−0.1λ p1
) (e
−0.1λ 3− p1
)
+ C (1 − e
p2 3
−0.01λ p2
) (e
−0.01λ 3− p2
)
+ C (1 − e
GB
3.97 2.13 2.13 2.68 3.43 5.04
Petrifilm
3.96 2.22 2.16 2.70 3.55 5.06
P > t
0.8481 0.2848 0.2093 0.5462 0.2062 0.2100
*卫生部食品卫生监督检验所
Microbiology
食品卫生细菌的检测
)
阴性管: 阳性管:
1− e
e
− vλ
− vλ
Microbiology
概率公式
3×3管
接种量பைடு நூலகம் 1,0.1,0.01 ml(g)时的概率：
P = C3p1 (1 − e ) p1 (e ) 3− p1 + C3p2 (1 − e + C3p3 (1 − e
− 0.01λ p3
−λ
−λ
−0.1λ p2
Microbiology
MPN 原理
k (k=0,1,2…) 个菌落出现在每个试管中的概率服从泊松 (Poisson) 分布:
Pn = e
− vλ
(vλ ) k!
k
Microbiology
MPN 原理
细菌存在的概率：
P = ∏ C (1 − e
i =1 pi ni
k
− vi λ pi
) (e
− vi λ ni − pi
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FDA MPN法
LST肉汤
24 – 48 h
煌绿乳糖胆汁肉汤(BGLB)
48 ± 2 h
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MPN 法
• 1915发表 • 估算菌落浓度 • 使用置信区间
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30 MPN/100 g = ?
A: X = 30 cfu/100g B: X <= 30 cfu/100g C: X >= 30 cfu/100g D: above all
Microbiology
3MTM PetrifilmTM测试片的结构
例：3MTM PetrifilmTM细菌总数测试片 薄膜 粘合剂＋指示剂 冷水可溶性凝胶 标准培养基 粘合剂 印有格子纸片
Microbiology
3MTM PetrifilmTM细菌总数测试片
z z z z z z z
标准培养基 添加TTC菌落指示剂 培养时叠放片数小于20 培养时间为48 h 合理计数范围 25~250 方格设计便于计数 AOAC Official Method
10~360
Concentration (cfu/100g)
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