生物化学实验报告
姓名：李燚
学号： 3180100093
专业年级： 2018级护理学本科
组别：第五实验室
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量操作考试
实验日期2019-12-24 实验地点第XX实验室
合作者张怡君指导老师李某某
评分XX 教师签名李某某批改日期2013-06-03
格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。

需强调的地方请用蓝颜色标出。

不得出现多行、多页空白现象。

一、实验目的
1.掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项；
2.熟练运用溶液混匀的各种方法；
3.正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器；
4.了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定的原理和注意事项，掌握其操作方法。

二、实验原理
三、材料与方法：以流程图示意
（一）实验材料
1.样品：鸡肝
2.试剂：
（1）95%乙醇；
（2）0.31mol╱L（5%）三氯醋酸溶液：称取未潮解的三氯醋酸（CCl3COOH）5g，加蒸馏水溶解至100ml；
（4）12mol ╱L HCl ：浓HCl 原液（36%-38%）；
（5）12.5mol ╱L （50%）NaOH ：称取NaOH 50g ，用蒸馏水溶解至100ml ； （6）碘试剂：碘100mg 和KI 200mg 溶于50ml 蒸馏水中；
（7）班氏试剂：称取柠檬酸钠（C5H5NaO7 •5H2O ）173g 和无水碳酸钠（Na2CO3）100g 溶于蒸馏水700ml 中，加热促溶。

冷却，慢慢倾入17.3%硫酸铜（CuSO4•5H2O ）100ml ，边加边摇。

再加蒸馏水至1000ml ，混匀，如混浊可过滤取滤液。

此试剂可长期保存。

3.仪器和器材：
（1）普通离心机，室温至100℃恒温水浴箱（×2），723型可见光分光光度计，精度为10mg 级电子天平（×1）；（2）剪刀（×1），镊子（×1），研钵（×1）；（3）试管架（×1），10ml 离心管（×2），(15㎜×100㎜)试管（×6）；（4）刻度吸量管（2ml ×1，5ml ×2），1000μl 微量可调取液器（×1）； （二）实验方法
1.肝糖原的提取与鉴定的实验的流程图：
＋
5%CCl3COOH 1 ml
＋5%CCl3COOH 3 ml
沉淀（弃去）
2.
（1）
（2）
3注意事项
四、结果与讨论：①结果：实验数据、现象、图谱；②讨论：以结果为基础的逻辑推论，并得出结论。

（一）实验现象
图一为肝组织乳状时形态图2为肝组织为匀浆状形态
（二）实验结果讨论与思考
（三）误差分析
实验2 肝糖原的定量测定
一、实验目的
1. 掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项；
2. 了解蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法；
3. 正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器；
4. 熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）；
5. 正确掌握溶液转移的操作；
二、实验原理
糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糖醛衍生物-5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。

该物质在620nm处有最大吸收。

糖含量在10-100μg，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量呈正比。

利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。

糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其他成分，而保留肝糖原。

三、材料与方法：
1．实验材料：
（1）样品：鸡肝。

（2）试剂：
①5.35 mol/L（30%）KOH溶液：称取KOH 30g，加蒸馏水溶解至100ml；
②标准葡萄糖溶液（50mg/L）：称取已干燥恒重的无水葡萄糖25mg，加蒸馏水溶解至500ml；
③17 mol/L（90%）H2SO4：量取蒸馏水30ml，加浓H2SO4 500ml；
④蒽酮显色剂：称取蒽酮0.20g，用17 mol╱L H2SO4溶解至100ml。

此试剂不稳定，以当日配制为宜，冰箱保存可用4-5d。

（3）仪器和器材：
①普通离心机，室温至100℃恒温水浴箱（×2），723型可见光分光光度计，称量所用的为托盘天平（×1）；②剪刀（×1），镊子（×1）；③试管架（×1），100㎜×15㎜试管（×3）；
④刻度吸量管（2ml×1,5ml×2），1000μl微量可调取液器（×1）；⑤100ml容量瓶（×1）。

（1）实验流程：
2.操作步骤 （1）糖原提取
在试管中用吸量管加入30% KOH 1.5ml ,再称取0.15g 鸡肝组织放入试管中，置沸水浴中15min 。

取出后冷却，将内容物全部移入100ml 容量瓶中，加水至刻度，仔细混匀。

（2）糖原的测定 取3支试管，按下表操作 试剂（ml ） 空白管 标准液 样品管 蒸馏水 1.0 标准葡萄糖溶液 1.0 糖原提取液
1.0
+30%KOH1.5ml （用吸量管）
0.2%蒽酮溶液（用吸
2.5 2.5 2.5
量管）
注：混匀，沸水浴10分钟，冷却。

在分光光度计260 nm波长处，用空白管溶液调零，测定各管溶液的吸光度（A）。

（3）注意事项：
四、结果与讨论
（一）实验现象
1.将0.15g鸡肝加入装有KOH溶液的试管沸水水浴15min后溶液呈现棕红色悬浊液体。

现象如下图所示：
（二）实验结果
此表格为比色所得实验数值
（各管吸光值A260）
测定次数空白管标准管样品管
1 0
2 0
3 0
各管平均值0
实验数据分析：
（2）
（3）
3.计算：参考公式：
肝糖原(g/100 g肝组织) = A样品
×0.05 ×
100
×
100
×1.11 A标准肝组织重(g) 1000
代入数据有：
肝糖原(g/100 g肝组织) = ×0.05 ×100
×
100
×1.11= 0.15 1000
由上式结果可以得出，每100g组织中肝糖原含量为肝组织。

(三)误差分析
（四）感悟与反思。