植物组织培养实验报告一、实验目的1．掌握无菌操作的植物组织培养方法；2．通过配置ms培养基母液，掌握母液的配置和保存方法； 3．通过诱导豌豆根、茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法；4．通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法； 5．了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理解。
二、实验原理（一）植物组织培养植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。
这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。
（二）植物细胞的全能性植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。
（三）组织的分化与器官建成外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。
有些情况下，外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。
（四）培养基的组成培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。
营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。
三、实验器材高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。
四、实验材料豌豆种子五、实验药品药品、70% 酒精、 0.1% 升汞、ms培养基、蒸馏水、naoh、 84消毒液、蔗糖、琼脂等。
六、实验步骤（一）培养基母液的配制表1.ms培养基个成分的含量（单位：mg/l）表2.ms培养基所需母液以及扩大倍数名称大量元素微量元素 ca盐 mg盐 fe盐有机肌醇激素扩大倍数 50 50 50 50 50 100 100 100 定容体积(ml)500 500 500 500 500 200 200 50 吸取毫升数/l20 20 20 20 20 10 10 5（注：吸取毫升数为每升培养基所吸取的母液的体积）表3.配制母液所需的药品及称取量（注：根据表1与表2计算各物质的称取量）药品名称 nh4no3 kno3 kh2po4 称取量（mg）41250 47500 4250 药品名称 kina2mno4?2h2o cuso4?5h2o 称取量（mg）20.75 6.25 0.625 cacl2?2h2o 11000 cocl2?6h2o 0.625 mgso4?7h2o 9250 肌醇 2000 feso4?4h2o 695 甘氨酸 40 na-edta 932.5 盐酸硫胺素 8 mnso4?7h2o 557.5 盐酸吡哆醇 10 znso4?7h2o 215 烟酸 10 h3bo3 155 （1） ms大量元素母液的配制参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至500ml存放于冰箱中备用。
名称重量（mg）名称重量(mg)nh4no3 kno341250 47500kh2po4 cacl2·2h2o4250 11000 （2） ms微量元素母液参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至500ml存放于冰箱中备用。
名称 ki h3bo3 mnso4·7h2o znso4·7h2o 重量(mg) 20.75 155 557.5 215 名称 na2moo4·2h2o cuso4·5h2o cocl2·6h2o 重量(mg) 6.25 0.625 0.625 （3） ms有机母液参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至200ml存放于冰箱中备用。
名称肌醇烟酸盐酸吡哆醇重量(mg)名称盐酸硫胺素甘氨酸重量(mg)2000 10 108 40（4） ms铁盐母液的配制参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至500ml存放于冰箱中备用。
名称 edta二钠重量(mg)932.5名称 feso4·4h2o重量(mg)695 （5） ms钙盐母液的配制参考表3称取11000mg的cacl2?2h2o用蒸馏水溶解定容至500ml，保存于冰箱备用。
（6） ms镁盐母液的配制参考表3称取9250mg的mgso4?7h2o用蒸馏水溶解定容至500ml，保存于冰箱备用。
（7） ms肌醇母液的配制参考表3称取2000mg的肌醇用蒸馏水溶解定容至200ml，保存于冰箱备用。
（8） ms激素母液的配制各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的naoh溶解，细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解，然后再加蒸馏水定容。
一般取100mg配成100ml母液。
（二）培养基的配制以配制1l的ms培养基为例进行如下操作：（1）取1l的大烧杯，加入适量的蒸馏水在电磁炉上加热至沸腾；（2）分别取（一）中配制的8种母液放入小烧杯中，然后加入，边加边搅拌；（3）称取30g蔗糖加入，边加边搅拌；（4）称取8g琼脂加入，边加边搅拌，知之琼脂粉溶解；（5）定容至1l，加入激素母液，用naoh调ph6.0左右；（6）将培养基分别分装于洗好的三角瓶中，塞上棉塞包上牛皮纸用绳子扎紧；（7）放入消毒灭菌锅灭菌，灭菌20分钟左右；（8）灭菌后从灭菌锅中取出培养基，平放在实验台上令其冷却凝固。
（三）高压蒸汽灭菌锅的使用方法具体操作步骤：（1）高压锅放水至平把架；（2）把包扎好的培养基装入高压锅；（3）盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀；（4）然后接通电源；（5）压力计升至0.05mpa时，打开放气阀,排除冷空气(此步很重要)；（6）排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到0.11mpa位置时，开始计算灭菌时间，具体方法：当压力锅指针升至0.12mpa时，关闭电源，待指针下降至0.11mpa时接通电源，不断重复此操作过程，维持20分钟；（7）灭菌时间达到20分钟后，除去电源，打开放气阀(注意要逐渐放气)待篇二：组培实验报告植物组织培实验报告学院：生命科学技术学院班级：10级生物技术植物班学号：2010193042 姓名：高学深养植物组织培养实验报告实验一母液的配制与保存一、实验目的1.学习母夜的配制方法和母液的保存方式。
2.熟悉掌握制备母液的操作。
二、实验原理培养基中提供植物生长所需的营养成分，才能满足植物正常的生长发育的需求。
主要包括水分、有机物质、盐类，而配制母液时将其分为大量、微量、钙盐、镁盐、铁盐、有机和肌醇分别配制。
配置培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配置，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配置即可。
三、实验材料、试剂和仪器设备 1．试剂nh4no3 ,kno3 ,kh2po4 ,cacl2·2h2o ,mgso4·7h2o,feso4·7h2ona2-edta,mnso4·4h2o,znso4·7h2o,h3bo3,ki,na2moo4·2h2o cuso4·5h2o,cocl2·6h2o,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，蒸馏水。
2.仪器设备电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，移液管（10ml，5ml，1ml）试剂瓶，玻璃棒数支，药芍，称量纸等。
四、实验步骤1 、计算：计算各化学成分所需要的量。
大量、微量和盐类按扩大50倍，定容500ml的配制计算。
有机和肌醇按扩大100倍，定容200ml的配制计算。
计算后制成配方表。
2、制定标签：裁取7张适当大小的牛皮纸，用铅笔写上ms，种类，并标明此类母液所含物质，质量，定容体积，扩大倍数吸取量，制备人，制备日期。
以大量为例如图：3、大量元素母液的配制：先用量筒量取300ml蒸馏水放入 500ml 烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取： nh4no3 ,kno3 , kh2po4 , 待第一种化合物完全溶解后再加入第二种化合物，溶解过程用玻璃棒搅拌，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液转移至 500ml 容量瓶中，并用蒸馏水将烧杯和玻璃棒洗涤3次，每次约50ml，而后用蒸馏水定容至 500ml，然后转移至细口试剂瓶中，贴上标签，并置于冰箱中低温保存备用。
4、微量元素母液的配制按照配方表中用量用电子天平依次称取mnso4·4h2o,znso4·7h2o， h3bo3, ki, na2moo4·2h2o。
cuso4·5h2o和 cocl2·6h2o先稀释后用移液管吸取,按制备母液 i 的方法逐个溶解，转移至容量瓶中，洗涤烧杯，然后定容至 500ml，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。
5、铁盐母液的制备把 feso4·7h2o 和 na2-edta 分别置于适量蒸馏水中，加热搅拌使之完全溶解，保持加热，把 feso4 倒入 na2-edta 溶液中并搅拌，接近沸腾时停止加热，冷却后调 ph 到 5.5，将溶液转移至 500ml 容量瓶中，洗涤后用蒸馏水定容至 500ml，转入细口试剂瓶中，用力振荡 1～2min，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。
6、有机化合物母液的制备按配方表中用量依次称取：盐酸硫胺素,盐酸吡哆醇，烟酸, 甘氨酸，用蒸馏水溶解后，定容200ml转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。
7、植物生长物质母液制备 naa 母液:准确称取 10mg,用少量 1mol/l naoh 溶解后加蒸馏水定容至 100ml,即配制成 0.1mg/ml 的 naa 母液，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。
6–ba 母液配制方法相似，浓度为 2mg/ml五、试验结果分析及注意事项1、kh2po4是吸热溶解，可以把烧杯浸在温水中溶解。
2、制作标签时只能能用铅笔写。