2、制备土壤稀释液：
称取土壤1g，制备10－2 土壤稀释液，再取4只 无菌 试管稀释制备10－3 、10－4菌液。
3、倒平皿与平板涂布：
取已熔化的牛肉膏蛋白胨培养基，倒入平皿中， 冷却凝固。分别吸取 0.1 ml上述制备的10－3或10－4菌液 玻棒涂布，室温静置5－10 min，使菌液吸附进培养基， 倒置于37 0C恒温培养24 h。


37 0C恒温培养。
图4－8 穿刺接种：（a）水平穿刺接种；（b）垂直穿刺接种
五、实验任务
1、2人一组: 6只平皿稀释平板计数，做2个稀释度。24 h观察并计数。
2、每人： 做1支斜面接种（接放线菌或霉菌），1支 液体接种（接细菌），1支半固体穿刺接种 （接细菌）。
六、思 考 题
1. 结果 （1）将培养后菌落计数情况填如下表：
试管拔塞后过火灭菌和取菌
斜面划线法（a）和不同细菌直线接种长出的菌苔形态（b）
（2）液体接种法（1支试管/人）
使用牛肉膏蛋白胨液体培养基。
用接种环从平皿上挑取细菌单菌落，接入液体培养基。

放下环后，再将棉塞旋紧，在试管斜面上距试管口2～ 3cm处贴上标签。 37 0C恒温培养。

（在培养量比较大的情况下，液体接种宜采用移液管接种， 同时要求无菌操作。）

左手平托两支试管，拇指按住试管底部。外侧使是菌种试 管，内侧是待接的空白斜面。（两支试管的斜面同时向 上），右手将棉塞旋松，以便在接种时容易拔出。 右手拿接种环，在火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可 能伸入试管的其余部位也过火灭菌。 将两支试管的上端并齐，靠近火焰，用右手小指和掌心将 两支试管的棉塞一并夹住拔出，棉塞仍夹在手中，然后让 试管口缓缓过火焰。
2. 为什么融化后的培养基要冷却至45 0C左右才能倒平板？
3. 要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键？为什么？
结
束
4、观察细菌菌落形态以及计数菌落： 培养24 h后，取出培养皿数菌落数，算出同一稀释度 三个平板上的菌落平均数，并按下列公式进行计算： 每ml 中菌落形成单位（cfu）＝同一稀释度三次重复的平
均菌落数×稀释倍数×10
5、计算出每g土壤中细菌的数量： 即用某一培养皿内细菌的菌落数乘以该培养皿接种液 的稀释倍数即得。








将已灼烧过的接种环伸入外侧的菌种试管内。先冷却，而 后再用环沾取一定量的菌苔，将沾有菌苔的接种环抽出试 管。 迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管的底部， 轻轻向上划线（直线或曲线）。 接好种的斜面试管口再次过火焰，棉塞底部过火焰后立即 塞入试管内。 将沾有菌苔的接种环在火焰上烧红灭菌。先在内焰中烧灼， 使其干燥后，再在外焰中烧红，以免菌苔骤热，使菌体爆 溅，造成污染。 放下环后，再将棉塞旋紧，在试管斜面上距试管口2～ 3cm处贴上标签。 280C恒温培养。
（3）穿刺接种（1支试管/人）
使用牛肉膏蛋白胨半固体培养基。用接种针从平皿上挑取 细菌单菌落，接入半固体培养基。

用接种针经火焰灭菌后，沾取少量菌种，垂直地穿入试管 固体培养基中心至底部，然后沿着原接种线将针拔出，要 做到手稳、动作轻巧迅速，最后塞上棉塞。再将接种针上 残留的菌体在火焰上烧掉。 在试管斜面上距胞。统计菌落数，根据其
稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。 为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已趋向使 用菌落形成单位(cfu)，而不以绝对菌落数来表示样品的活 菌含量。
三、实验材料

样品：取土 试剂和仪器： 无菌水、无菌培养皿、无菌吸管、记号 笔、接种环、接种针、酒精灯、标签纸、水浴锅 2人/组：
微生物学实验七——
平板菌落计数与接种
一、目的要求 二、实验原理 三、实验材料 四、实验过程 五、实验任务 六、思考题
一、目的要求

学习平板菌落计数的基本原理和方法

练习微生物接种和培养的基本技术，掌握无
菌操作技术
二、实验原理
将待测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散成 单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养， 由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单

稀释平板计数用：6只平皿、2根三角玻棒、2支装9ml无 菌水的试管、 4根无菌吸管、牛肉膏培养基；
接种用： 2支液体牛肉膏蛋白胨培养基、2支半固体牛 肉膏蛋白胨培养基、2支黄豆饼粉固体斜面培养基。
四、实验过程
（一）平板菌落计数 （二）微生物的接种
（一）稀释平板菌落计数
1、 编号与稀释: 每组取无菌平皿6只，一个稀释度做3只。标明10－3 和10－4各3只。
图－1
菌液逐级稀释过程示意图
（二）微生物的接种

接种方法： 常用的有斜面接种法、平板接种法、液体接种法、 试管深层固体培养基的穿刺接种法。

接种工具：
常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接
种铲或接种锄、玻璃涂棒等。
（1）斜面接种法（1支试管/人）
使用黄豆饼粉斜面培养基，用接种环从平皿上挑取放线菌 或霉菌单菌落。