35
吞噬细胞功能测定
趋化功能测定（Boyden 小室） 吞噬功能测定（硝基蓝四氮唑 NBT、荧光标记 的生物颗粒）
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三、免疫学检测方法的应用
疾病的诊断：
感染性疾病 超敏反应性疾病 自身免疫病 免疫缺陷病 肿瘤 免疫学监测：
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第二十三章 免疫学防治
Immunoprophylaxis and immunotherapy
体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。 它将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作用相结合，通 过酶作用于底物后显色来判定结果。
双抗体夹心法 检测待测抗原 间接法 检测待测抗体 BAS-ELISA （生物素-亲和素系统-ELISA） 酶联免疫斑点试验(ELISPOT) 免疫组化技术
16
17
3
抗原抗体反应的影响因素：
亲和力（affinity)
亲合力 (avidity）
Keq =
104
Affinity
106 Avidity
1010 Avidity
4
抗原抗体反应的影响因素：
抗原抗体比例合适 温度 酸碱度 电解质
5
（二）、检测抗原或抗体的方法
1.凝集反应（agglutination)：颗粒性抗原与相应抗 体结合形成凝集团块
光素标记的二抗染色
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直接免疫荧光
Fluorochrome Labeled Ab
Ag Tissue Section
14
间接免疫荧光
Unlabeled Ab
Fluorochrome Labeled Anti-Ig
Ag Tissue Section
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酶免疫测定：酶标记抗体进行的抗原抗体反应
酶联免疫吸附试验(ELISA)：将已知的抗原或抗
细胞形态： 琼脂糖电泳 FACS TUNEL
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细胞因子的检测 生物活性检测法 CTLL 细胞株—— IL-2 依赖 免疫学检测：ELISA ELISPOT
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B细胞功能测定 Ig定量：单向琼脂扩散、免疫比浊法、ELISA B细胞增殖试验
抗体形成细胞测定：溶血空斑实验 ELISPOT
p241-251
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一、免疫预防
自然免疫：机体感染病原体后建立的特异性免疫，包括胎儿 或新生儿经胎盘或乳汁从母体获得抗体。
疫苗（vaccine）：一些能够诱导机体产生特异性免疫的
人工主动免疫制剂如细菌性制剂、病毒性制剂以及类毒素等 统称为疫苗。
人工主动免疫: 用疫苗接种机体使之产生特异性免 疫,从而预防感染的措施。
直接凝集反应：颗粒性抗原+相应抗体
间接凝集反应：可溶性抗原+颗粒载体+相应抗 体
6
7
2.沉淀反应(precipitation)：可溶性抗原与相应抗体结 合出现沉淀物
单向免疫扩散：可用于检测血清中Ig的含量 双向免疫扩散：抗原抗体的定性分析 免疫电泳：常用于血清蛋白种类分析 免疫比浊：
8
Ab in gel
分离方法：密度梯度离心 单个核细胞 磁珠分离：抗体与磁珠交联 免疫吸附分离法：将已知抗体包被培养皿，加入淋巴细胞 悬液 荧光激活细胞分选仪分离法（FACS） 抗原肽-MHC分子四聚体技术
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磁珠分离法
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流式细胞分选仪（FACS）
24
流式细胞仪
Number of Cells Green Fluorescence Intensity
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T细胞功能测定
T细胞增殖试验 细胞毒试验 细胞因子检测 皮肤试验
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1. 3ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ-TdR 掺入法： 氚标记的胸腺嘧啶核苷
2. MTT法 3-（4，5-二甲基-2-噻唑）2， 5-二苯基溴化四唑
淋巴细胞转化，镜下观察
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细胞毒实验：
细胞形态：台盼蓝染色 51Cr的释放 LDH释放
凋亡细胞检测法：
Unstained cells Green Fluorescence Intensity
Green Fluorescence Intensity
Two Parameter Histogram
Red Fluorescence Intensity
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（二）、免疫细胞功能测定：
T细胞功能测定 B细胞功能测定 吞噬细胞功能测定
人工被动免疫：给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞 因子等制剂，以治疗或紧急预防感染的措施。
疫苗的基本要求:
安全 有效 实用
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疫苗的种类
灭活疫苗：狂犬病、伤寒、流感疫苗 减毒活疫苗：脊髓灰质炎、麻疹、风疹、腮腺炎疫苗 类毒素：细菌的外毒素经0.3%-0.4%甲醛处理
白喉、破伤风 亚单位疫苗：重组乙型肝炎病毒表面抗原疫苗 结合疫苗：b型流感杆菌疫苗、脑膜炎球菌疫苗、肺炎球菌疫苗 DNA疫苗： 重组载体疫苗：麻疹、疱疹、肿瘤疫苗、甲乙型肝炎
Coating
E EEE
Blocking E
E
After blocking
Without blocking
Effect of Blocking
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二、免疫细胞的测定
分析免疫细胞的数量和功能，评价病人的 免疫功能包括CD分子测定、淋巴细胞转化、 吞噬实验、细胞毒实验等
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（一）、淋巴细胞的分离与类型鉴定
单
Ag
Ag
Ag
Ag
向
免
疫
扩
散
Diameter2
Ag Concentration
9
双向免疫扩散
10
Ag
免疫电泳
+ Ag Ab
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4. 用标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应
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免疫荧光法：荧光素与抗体连接 荧光抗体
直接免疫荧光：荧光素标记的抗体直接作标本染色 间接免疫荧光：一抗与标本中的抗原结合，再用荧
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许多疾病无有效疫苗：
病毒：HIV， 疱疹病毒 细菌：葡萄球菌，A组链球菌 真菌：假丝酵母 原生动物：疟疾，利什曼病 蠕虫感染：血吸虫病
免疫诊断
Immunodiagnosis p229-240
1
免疫诊断(Immune diagnosis)
概念
利用免疫学原理进行临床疾病的诊断 或辅助诊断
2
一、抗原或抗体的检测 （一）、抗原抗体反应的特点
抗原抗体反应的特异性
抗原抗体反应的可见性 利用已知抗体检测病人的未知抗原，如HBVsAg 利用已知抗原检测病人的抗体，如抗HIV抗体、抗核抗体 等
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新型疫苗
合成肽疫苗： 疟疾疫苗、肝癌疫苗处于临床试验阶段
转基因植物疫苗： 将编码有效免疫原的基因导入可食 用的植物细胞基因组中，使其在植 物的可食用部分稳定表达，通过摄 取食物达到免疫接种的目的。
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疫苗的现状：
常规使用的疫苗的成功率：
脊髓灰质炎、麻疹、风疹、腮腺炎疫苗 BCG 百日咳疫苗