组织石蜡包埋和切片技术
• 在制作切片或超薄切片时，由于组织是柔 软的，或局部的软硬不均，这样制作厚薄 均匀的切片是困难的。所以有必要用一定 物质浸透组织内部，整个组织一样硬化， 以利于切成薄片，这种物质叫做包埋剂。 一股用光学显微镜观察的切片，用石蜡、 火棉胶、炭蜡、明胶等作包埋剂；电子显 微镜则用环氧树脂、聚苯乙烯树脂、异丁 烯树脂及水溶性树脂。
• （八）切片 用切片机（如旋转切片机）将蜡块切成连 续的蜡带。切片时先把切片刀夹在刀架上， 再把载蜡器夹在固定装置上（注意安装切 刀的角度，刀口运行方向与材料切面平 行），然后调整好所需厚度，一般可在 7~14微米，视材料和所需观察对象而定， 转动切片机切片。
具体流程
• 1 脱水： • 多聚甲醛中取出组织，流水冲洗数分钟→70% 乙醇 （2h,可延长过夜）→85%乙醇(2h) →95%乙醇Ⅰ (1h)→95%乙醇Ⅱ(1h) →无水乙醇Ⅰ (30min)→无水乙 醇Ⅱ (30min)。 • 注：1若组织数量过多时，应分开脱水（20个组织 左右） • 2脱水的体积至少为组织体积的5倍 • 3乙醇纯度越高时，脱水的时间减少，否则引起 组织过硬 • 4 最好能搅拌，使脱水充分。
• （二）杀死与固定 利用药剂迅速把细胞杀死，以保持材料本 来的状态和结构。 • （三）脱水 脱水的目的是除去组织中的水分，便于透 明、浸蜡、包埋等步骤的进行，因为这些 程序中所用的药品都不能与水混合，所以 必须脱水。常用的脱水剂为酒精。脱水过 程应缓慢进行，不能操之过急或时间过长， 以免组织变硬变脆或发生收缩现象。脱水 采用等级脱水（系列脱水），即从较低浓 度酒精开始，逐渐替换到高浓度酒精。
程序
• （一）材料的采集与分割 采集材料应根据制片的目的和要求而定，材料 要有代表性，无病虫害或其它损伤，如要观察 病理解剖，则要取病斑、病症部位。采下的材 料应立即放在标本箱或湿布包起来带回实验室 进行分割固定（如有条件也可在试验地采集后 进行分割固定）。为使固定液能迅速的渗透材 料，材料要进行分割。分割时动作要迅速，以 防材料萎蔫。分割块的大小，宜小不宜大，一 般不超过1、沉床） 材料浸蜡后再换两次已熔融的纯蜡，然后 将材料和石蜡一起倒入提前叠好的包埋模 具中，用加热的镊子迅速将材料按一定的 间隔和所需的切面摆放整齐，同时用加热 的镊子赶走材料周围的气泡，待模具表面 的石蜡凝固后将纸盒平放入冷水中，使石 蜡迅速凝固。最后从模具中取出蜡块，以 便保存。注意将样品编号封于蜡块上，以 免样品混淆。
• 注：包埋时，切忌用手按石蜡盒中间，因 为冷凝后，中间仍较软。何师兄放到— 40℃冰箱使其快速凝固。 •
• （四）透明 透明的目的是将脱水剂从材料中除去，使 材料透明，增记折光系数；同时便于下步 的浸蜡和包埋等程序（因为究竟不能溶解 石蜡）。透明剂是一种既能与脱水剂混合， 又能与包埋剂混合的药剂。常用的透明剂 为二甲苯。
• （五）浸蜡 浸蜡的目的是逐渐除去透明剂,并为包埋剂 所代替。常用的包埋剂是石蜡。浸蜡过程 是使石蜡慢慢溶于浸有材料的透明剂中， 溶解在透明剂中的石蜡渐渐深入到材料的 细胞中去，最后使透明剂完全被石蜡取代， 以便切片。
• 2 透明： • 二甲苯Ⅰ → 二甲苯Ⅱ ，每步15min. • 注：在二甲苯的时间不宜过短或过长。时 间过短引起透明不充分，影响后面渗透包 埋；时间过长则引起组织变脆。 • 3 渗透： • 石蜡Ⅰ (15-20min)→石蜡Ⅱ (20-30min)→石 蜡Ⅲ(包埋),62℃。
• 4 包埋：
• 将组织放入盛有石蜡的模具中，摆好位置， 于石蜡包埋机的冷台上冷却。