实验五酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
一、目的要求
学习和掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法；了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。

二、实验原理
酵母核酸中RNA含量较多。

RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。

核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。

加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。

三、器材与试剂
1〉材料
酵母粉。

2〉器材
乳钵、150ml锥形瓶、水浴锅、量筒、吸管、洗耳球、漏斗、滴管、试管、试管架、烧杯、离心机、滤纸、试管夹。

3〉试剂
(1)
0.04mol/L氢氧化钠溶液。

(2)酸性乙醇溶液：将0.3ml浓盐酸加入30ml的乙醇中。

(3)95%乙醇。

(4)乙醚。

(5)
1.5mol/L硫酸溶液。

(6)浓氨水。

(7)
0.1mol/L硝酸银溶液。

(8)三氧化铁-浓盐酸溶液：
将2ml 10%三氧化铁溶液(用FeCl
3·6H
2O配制)加入到400ml浓盐酸中。

(9)苔黑酚乙醇溶液：
溶解6g苔黑酚于100ml 95%乙醇中。

(10)定磷试剂。

a.17%硫酸溶液：
将17ml浓硫酸(比重
1.84)缓缓加入到83ml水中。

b.
2.5%钼酸铵溶液：将2.5g钼酸铵溶于100ml水中。

c.10%抗坏血酸：
将10g抗坏血酸溶于100ml水中，储于棕色瓶保存。

溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄色或棕色则失效。

临用时将上述3种溶液与水按比例混合：17%硫酸溶液︰
2.5%钼酸铵溶液︰10%抗坏血酸︰水=1︰1︰1︰2(体积分数)。

四、实验步骤
1〉RNA提取
将10g酵母悬浮于90ml
0.04mol/L氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀。

将悬浮液转移至150ml 锥形瓶中。

在沸水浴上加热30min后，冷却。

(3000r/min)离心10分钟，将上清液缓缓倾入30ml酸性乙醇溶液中。

注意要一边搅拌一边缓缓倾入。

待核糖核酸沉淀完全后，(3000r/min)离心5分钟。

弃去上清液。

用95％乙醇洗涤沉淀两次，每次10ml。

乙醚洗涤沉淀一次后，再用乙醚将沉淀转移至漏斗中过滤。

沉淀即为粗RNA，可在空气中干燥。

作鉴定或测定含量用。

2〉鉴定
取200mg提取的RNA，加入
1.5mol/L硫酸溶液10ml，在沸水浴中加热10min制成水解液并进行组分的鉴定。

(1)嘌呤碱：
取水解液1ml加入过量浓氨水，然后加入约1mL
0.1mol/L硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。

(2)核糖：
取一支试管加入水解液1mL、三氯化铁浓盐酸溶液2ml和苔黑酚乙醇溶液
0.2ml。

放沸水浴中10分钟。

注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。

(3)磷酸：
取一支试管，加入水解液1ml和定磷试剂1ml。

在沸水浴中加热10min，观察若溶液变成蓝色，说明有磷酸存在。

五、结果处理
记录现象并解释。

现象：
(1)与硝酸银反应生成了少量的银化合物沉淀。

(2)反应后沸水浴，溶液变成绿色。

(3)反应后沸水浴，溶液变成蓝色。