Q/JCSWW 甘露聚糖酶桂林精成生物科技有限公司发布前言本标准按GB/T 1.1- 2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》进行编写。
本产品适用于作饲料添加剂用。
本标准由桂林精成生物科技公司提出。
本标准起草单位：桂林精成生物科技公司。
本标主要起草人：李志双、王海珍、梁艳本标准于2007年3月10日首次发布。
甘露聚糖酶1 范围本标准规定了饲用甘露聚糖酶的要求、试验方法、检验规则、以及标志、包装、运输、贮存、保质期。
本标准适用于本公司生产的作饲料添加剂用的甘露聚糖酶。
2 规范性引用文件下列文件中的条文通过本标准中的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准。
然而，鼓励根据本标准大成协议的各方研究是否使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB／T 601 化学试剂滴定分析用标准溶液的制备GB／T 602 化学试剂杂质测定用标准溶液的制备GB/T 5917 配合饲料粉碎粒度测定法GB/T 6435 饲料水分的检测GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB 10648 饲料标签GB 13078 饲料卫生标准GB/T 14699.1 饲料采样方法GB/T 18823 饲料检测结果判定的允许误差NY/T722 饲料用酶制剂通则QB/T1803 工业酶制剂通用试验方法国家质检总局[2005]75号令：定量包装商品计量管理办法3 定义3.1 甘露聚糖酶活力单位定义在37℃、pH值为5.5的条件下，每分钟从浓度为3mg/ml的甘露聚糖溶液中降解释放1 mol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位u。
4 要求4.1外观和性状粉酶为浅黄色粉末状；颗粒酶为浅黄色均匀颗粒状。
4.2 水份含量：粉酶≤12.0% ；颗粒酶≤12.0%4.3 粒度: 粉酶：95％以上通过孔径为420μm40目的分析筛；颗粒酶：95％以上通过孔径为420μm 30-80目分析筛。
粗灰分：≤8%4.4 产品成分分析保证值: 见表1表1 产品分析成分分析保证值4.5 卫生指标符合GB 13078和NY/T722的有关规定。
4.6 净含量应符合国家质量监督检疫总局令第75号《定量包装商品计量管理办法》的规定。
5试验方法本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682中规定的三级水，所用试液中的标准溶液，在没有注明其他要求时均要求按GB/T601，GB/T602制备。
5.1 外观的测定取样品置于白色瓷盘中，目测、鼻嗅检查。
5.2粉酶、颗粒酶水分的测定按GB/T 6435-2006 规定进行检测。
5.3 粗灰分的测定按GB/T 6438-1992的规定进行。
5.4 粉酶、颗粒酶粒度的测定按GB/T 5917 规定进行检测。
5.5 卫生指标的测定按GB 13078和NY/T722规定的方法执行。
6 甘露聚糖酶活力的测定6.1 甘露聚糖酶活力单位定义在37℃、pH值为5.5的条件下，每分钟从浓度为3mg/ml的甘露聚糖溶液中降解释放1 g还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位u。
6.2 测定原理甘露聚糖酶能将甘露聚糖降解成寡糖和单糖。
具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与DNS试剂发生显色反应。
反应液颜色的强度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中甘露聚糖酶的活力成正比。
因此，通过分光比色测定反应液颜色的强度，可以计算反应液中甘露聚糖酶的活力。
6.3 试剂与溶液：6.3.1甘露糖溶液，c（C6H12O6）为10.0mg/ml：称取无水D-甘露糖1.000g，加水溶解，定容至100ml。
6.3.2乙酸溶液，c（CH3COOH）为0.1mol/L：吸取冰乙酸0.60ml。
加水溶解，定容至100ml。
6.3.3 乙酸钠溶液，c（CH3COONa）为0.1mol/L：称取无水乙酸钠0.82g。
加水溶解，定容至100ml。
6.3.4 氢氧化钠溶液，c（NaOH）为200g/L：称取氫氧化鈉20.0g。
加水溶解，定容至100ml。
6.3.5乙酸——乙酸钠缓冲溶液，c（CH3COOH—CH3COONa）为0.1mol/L，pH值为5.5：称取无水乙酸钠16.4g，加入冰乙酸1.70ml。
再加水溶解，定容至2000ml。
测定溶液的pH值。
如果pH值偏离5.5，再用乙酸溶液（6.3.2）或乙酸钠溶液（6.3.3）调节至5.5。
6.3.6甘露聚糖溶液：0.6%（w/v）称取甘露聚糖（Sigma G0753）0.30g，加入40ml乙酸—乙酸钠缓冲溶液（6.3.5）。
磁力搅拌，同时缓慢加热，直至甘露聚糖完全溶解（注：在搅拌加热的过程中可以补加适量的缓冲液，但是溶液的总体积不能超过50ml。
）。
然后停止加热，继续搅拌至冷却，用乙酸—乙酸钠缓冲溶液（6.3.5）定容至50ml。
甘露聚糖溶液能立即使用，使用前适当摇匀。
4℃避光保存，有效期为3～5天。
6.3.7 DNS试剂称取3,5-二硝基水杨酸3.15g（化学纯），加水500ml，搅拌5s，水浴至45℃。
然后逐步加入100ml氢氧化钠溶液（6.3.4），同时不断搅拌，直到溶液清澈透明（注意：在加入氢氧化钠过程中，溶液温度不要超过48℃。
）。
再逐步加入四水酒石酸钾钠91.0g、苯酚2.50g和无水亚硫酸钠2.50g。
继续45℃水浴加热，同时补加水300ml，不断搅拌，直到加入的物质完全溶解。
停止加热，冷却至室温后，用水定容至1000ml。
用滤纸过滤，取滤液储存在棕色瓶中，避光保存。
室温下存放7天后可以使用，有效期为6个月。
6.4 仪器与设备6.4.1实验室用样品粉碎机或碾钵。
6.4.2分样筛：孔径为0.25mm（60目）。
6.4.3分析天平：感量0.001g。
6.4.4 pH计：精确至0.01。
6.4.5磁力搅拌器：附加热功能。
6.4.6电磁振荡器。
6.4.7 烧结玻璃过滤器：孔径为0.45μm。
6.4.8离心机：3000r/min。
6.4.9恒温水浴锅：温度控制范围在30—60℃之间，精度为0.1℃。
6.4.10秒表：每小时误差不超过5s。
6.4.11分光光度计：能检测350—800nm的吸光度范围。
6.4.12 移掖器；精度为1μl。
6.5 标准曲线的绘制吸取缓冲液（6.3.5）2.0ml，加入DNS试剂（6.3.7）2.5ml，沸水浴加热5min。
用自来水冷却至室温，用水定容至12.5ml，制成标准空白样。
分别吸取甘露糖溶液（6.3.1）1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00和7.00ml，分别用缓冲液（6.3.5）定容至100ml，配制成浓度为0.10—0.70mg/ml D-甘露糖标准溶液。
分别吸取上述浓度系列的甘露糖标准溶液各1.00ml（做二个平行），分别加入到刻度试管中，再分别加入1ml水和2.5mlDNS试剂（6.3.7）。
摇匀，沸水浴加热5min。
然后用自来水冷却到室温，再用水定容至12.5ml。
以标准空白样为对照调零，在540nm处测定吸光度OD值。
以甘露糖浓度为Y轴、吸光度OD值为X轴，绘制标准曲线。
每次新配制DNS试剂均需要重新绘制标准曲线。
6.6 试样溶液的制备固体试样应粉碎或充分碾碎，然后过60目筛（孔径为0.25mm）。
称取试样两份，精确至0.001g。
加入100ml乙酸—乙酸钠缓冲溶液（6.3.5）。
磁力搅拌30min，在4℃条件下避光保存24h。
吸取适量上清液，再用缓冲溶液（6.3.5）做二次稀释（稀释后的待测酶液中甘露聚糖酶活力最好能控制在0.04—0.08 u/ml之间）。
液体试样可以直接用乙酸—乙酸钠缓冲溶液（6.3.5）进行稀释、定容（稀释后的酶液中甘露聚糖酶活力最好能控制在0.04—0.08 u/ml之间）。
如果稀释后酶液的pH值偏离5.5，需要用乙酸溶液（6.3.2）或乙酸钠溶液（6.3.3）调节、校正至5.5，然后再用缓冲溶液（6.3.5）做适当定容。
6.7 测定步骤吸取 1.00ml经过适当稀释的酶液（已经过37℃平衡），加入到刻度试管中，再加入2.5mlDNS试剂（6.3.7），摇匀。
然后加入1.0ml甘露聚糖溶液（6.3.6），37℃保温30min，沸水浴加热5min。
用自来水冷却至室温，加水定容至12.5ml，摇匀。
以标准空白样为空白对照，在540nm处测定吸光度A B。
吸取1.0ml经过适当稀释的酶液（已经过37℃平衡），加入到刻度试管中，再加入1.0ml 甘露聚糖溶液（6.3.6）（已经过37℃平衡），摇匀，37℃精确保温30min。
加入2.5mlDNS 试剂（6.3.7），摇匀。
沸水浴加热5min，用自来水冷却至室温，加水定容至12.5ml，摇匀。
以标准空白样为空白对照，在540nm处测定吸光度A E。
6.8试样酶活力的计算[（A E - A B）×K + C O]X D = × 1000 （1）t·150式（1）中：X D—试样稀释液中的甘露糖聚酶活力，u/ml；A E—酶反应液的吸光度；A B—酶空白样的吸光度；K —标准曲线的斜率；C O—标准曲线的截距；t —酶解反应时间，min；150 —木糖分子量（μg/mol）；1000 —转化因子，1mmol = 1000 μmol。
X D值应在0.04—0.08 u/ml之间。
如果不在这个范围内，应重新选择酶液的稀释度，再进行分析测定。
X = X D·D f（2）式（2）中：X—试样甘露聚糖酶的活力，u/g；D f—试样的总稀释倍数。
酶活力的计算值保留三位有效数字。
6.9 重复性同一样品两个平行测定值的相对误差不超过8.0%，二者的平均值为最终的酶活力测定值（保留三位有效数字）。
7检验规测7.1 组批以一次投料生产的产量为一批。
7.2 采样按GB/T 14699.1—2005的规定进行采样。
将采得的样品充分混合均匀按四分法缩分至250g，分装入两个清洁得具塞广口瓶中密封，贴好标签，注明产品名称、批号、采样日期、采样人，一瓶用于检验，另一瓶保存备查。