①药液与孢子悬浮液混合后定量置于玻片上
水溶性药剂、乳油稀释液或稳定的悬浮液（胶悬剂的稀释液）可用此
法，而WP由于是悬浮性差，不宜采用。 优点：操作简单迅速，无需特殊设备
缺点：药剂和孢子始终充分接触，与病害防治的实际相差很大，测得
的毒力往往偏高。
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
二、杀菌剂温室植株测定方法
针刺法测定农药对番茄灰霉病防治效果的活体试验
二、杀菌剂温室植株测定方法
对照（3d）
40%多菌灵WP1500×（3d）
一种植物精油1000×
针刺法测定农药对番茄灰霉病防治效果的活体试验
二、杀菌剂温室植株测定方法
盆栽法测定农药对小麦白粉病的防治效果
二、杀菌剂温室植株测定方法
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （一）孢子萌发法
3、孢子悬浮液的准备
菌种
无菌水，搅匀
菌种悬浮液
二层纱布过滤 除去菌丝体及破碎培养基
离心 无菌水洗
洗净的孢子
调至浓度5000个/mL（10×10倍，35个孢子）
Байду номын сангаас
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （一）孢子萌发法
3、孢子悬浮液的准备
菌种应是标准菌种，供试菌种应符合以下条件： ①菌种纯粹，在一般培养基上易大量产生孢子； ②多代繁殖不易产生变异； ③孢子个体较大，易于在显微镜下观察萌发情况；
④在分类上有一定的代表性，而且是重要的植物病害病原菌。
2、生长速率法
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （二）含毒介质培养法
3、最低抑制浓度法
基本原理：药剂按等比或等差数列配制成系列浓度，与培养基混合
后接入供试菌，培养一段时间，找出终点浓度（明显抑制供试菌生长
发育的稀释倍数，即最低浓度） ，即为最低抑制浓度。
一、杀菌剂皿内生物测定 （一）孢子萌发法 4、高温、保湿培养
温度、湿度、pH、氧气
5、结果检查及表示
一定时间后检查孢子萌发率，一般在低倍镜下，随机检查200个孢子
标准：孢子芽管大于孢子的短半径时，即算萌发，否则不算萌芽
抑制孢子萌发率（%）＝ 对照孢子萌发率－处理孢子萌发率 对照萌发率 ×100
马铃薯茎线虫（Citylenchus destructor Thorne）
葱线虫（Ditylenchus allil (Beijerinck)） 菊线虫（Aphelenchoides ritzemabosi (Schwartz)）
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
四、 杀线虫剂的生物测定 （二）测定方法 1、非熏蒸的生物测定 2、熏蒸剂的毒力测定
优点：精确度高，操作简单，很快可得到结果。 缺点：测定结果受药剂溶解后和扩散能力影响很大，有一定局限性， 另外，对严格的寄生菌不适合。
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （二）含毒介质培养法 2、生长速率法 基本原理：将不同浓度的药液和培养基混合，用这种培养基培育病
（四）发病条件的创造
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
二、杀菌剂温室植株测定方法 （五）施药 1、测定药剂的保护效果，先喷药后接菌。


2、测定药剂治疗效果，先接菌后喷药（传染后1~2d）。
3、测定药剂的内吸效果：植株上，先喷药后接菌；土壤中，
前施药后接菌）。
4、测定药剂药效期：一次施药，1，2，4，6，8d后接菌。
菌，以病菌的生长进度快慢来判定药剂毒力的大小。
病菌生长速度表示方法
（1）药剂达到一定大小所需时间； （2）一定时间药剂直径的大小。
优点：操作比较简单；重现性好；病菌易于培养。
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （二）含毒介质培养法 2、生长速率法 步骤：
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
二、杀菌剂温室植株测定方法
利用盆、钵培育幼嫩植物进行生测，是研究杀菌剂有效方法之一。 盆栽试验法克服了在离体条件下对病菌无效而在活体条件下有效的
化合物的漏筛。同时，也更接近大田实际，对实践有指导价值。另
外，材料易得、易控制。
因此，在当前的杀菌剂测定研究中，越来越重视盆栽试验法，有些
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 二、杀菌剂温室植株测定方法
三、植物病毒防治剂药效测定方法
四、杀线虫剂的生物测定
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （一）孢子萌发法
是历史最悠久而被广泛利用的杀菌剂毒力测定方法。 基本原理：将供试药剂附着在载玻片上或其它平面上，然后将供试 病菌孢子悬浮液滴在上面（或将孢子悬浮液与药液混合后滴在玻片 上），在保温、保湿条件下培养一定时间后镜检以孢子萌发力判断 杀菌剂毒力。 优点：快速、试验当天即可得结果
1、配制药液 2、制备带毒培养基 3、打制菌饼 4、移菌饼 5、培养（定时间或定半径） 6、结果检查
生长抑制率（%）＝ 对照的菌落直径－处理的菌落直径 对照菌落直径 ×100
2、生长速率法
2、生长速率法
2、生长速率法
2、生长速率法
2、生长速率法
2、生长速率法
2、生长速率法
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （二）含毒介质培养法 1、水平扩散法（又叫抑菌圈法或平面法）
基本原理：病菌先接于培养基表面，再使用多种方法使药剂和培养基 接触，定量培养一定时间，因药剂的渗透扩散作用，施药部位病菌被
杀死或生长受到抑制，从而产生了抑菌圈。
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （一）孢子萌发法
1、萌发表面的处理
③使用凹玻片 适于：宜滴加孢子悬浮液和杀菌剂的混合液，后再加孢子悬浮液。 不适于：喷粉或喷雾，造成药剂在凹处较多的沉积
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （一）孢子萌发法 2、药剂在玻片上的附着
分类：液体培养基稀释法；固体培养基稀释法。
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （三）叶碟法
简易，能在室内进行，较孢子萌发和含毒介质培养接近生产实际 可看做是盆栽试验的过渡阶段。
基本原理：
将易染病的植物叶片（蚕豆叶片）经不同浓度的药剂处理，放于培 养皿内；再将一块培养好的供试菌菌丝体（如纹枯病菌）放在叶片 上；保湿培养一段时间后，检查其病斑面积，以此测定药剂毒力。
二、杀菌剂温室植株测定方法 例：小麦白粉病分级标准
0级：叶面无病斑。 1级：叶片上只有少量有限菌丝体，无孢子。 2级：叶面菌丝体量中等，有一些孢子，组织轻微坏死和褪绿。 3级：菌丝体量较多，孢子产生量有限，组织轻微坏死和褪绿。 4级：孢子堆很大，产生大量孢子，组织大面积坏死。 病情指数=∑（各级病叶数×相对级数值）/（调查总叶数×最高分级数） ×100 防治效果（%）=（对照病指增长率－处理病指增长率）/对照病指增长率 ×100
一、杀菌剂皿内生物测定 （一）孢子萌发法
1、萌发表面的处理
①普通的载玻片 蒸馏水洗 洗液10min 自来水冲洗干净 供试验用
防尘条件下干燥
缺点：供试菌的孢子悬浮液（或与药剂混合后）滴在载玻片上形成的 液滴展布面积很小，呈球状，作“悬滴”时易失落，此外，液滴间的
展布面积相差较大，试验误差也较大。
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （一）孢子萌发法
1、萌发表面的处理
②火棉胶薄膜法 5%火棉胶
无水乙醚
0.25%火棉胶
方法：用镊子夹取清洁干燥的玻片浸入火棉胶乙醚溶液后立即取出， 待多余的流去，无尘条件下室温干燥10h以上。 特点：处理过的玻片上覆盖一层透明均匀膜，滴上的孢子悬浮液滴在 玻板上展布较大的面积，而且面积大小比较均匀。
玉米线虫病病症
本章重点
杀菌剂生测的内容及应用范围 何谓之杀菌剂生物测定 试从杀菌剂毒杀作用方式及其使用方法，分析杀菌剂生物测 定技术基本类型 掌握杀菌剂生物测定中的一些技术：孢子萌发法、生长速率 法、杀菌剂盆栽药效试验法等
公司在进行活性筛选时，甚至只用盆栽法，而淘汰离体试验法。
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
二、杀菌剂温室植株测定方法 （一）供试植物
1、应是易栽培，生长迅速，且是国内主要农作物； 2、植物发病是盆栽试验的基础，应选感病品种。
（二）供试病菌 （三）接菌
据主要传播方式和侵染途径，确定接菌方式。低倍镜20~30个孢子
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （一）孢子萌发法
1、萌发表面的处理
萌发表面是孢子萌发的场所，必须符合以下条件： A.对孢子的萌发即无抑制作用又无促进作用； B.能使承受的液滴展布面积一致。
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
二、杀菌剂温室植株测定方法 （六）效果调查 1、调查发病普遍率 以病害发生普遍与否来表示药剂的防效。 2、计数法 适于叶斑类病害，调查每叶病斑数，以此比较计算防效。 3、分级计数法