当前位置:文档之家› 细菌内毒素 - 理论

细菌内毒素 - 理论

细菌内毒素测定
1:试验用的试剂为
1.1内毒素工作品,
1.3鲎试剂灵敏度:λ
1.4细菌内毒素检查用水
1.5 无热源原安剖瓶 5ml/支
2:内毒素限值的确定:
3:样品最大稀释倍数确定
注射液MVD=λCL =鲎试剂灵敏度
内毒素限值样品浓度⨯ (样品浓度按样品规格计算,单位换算为mg/ml )
大输液MVD=鲎试剂灵敏度内毒素限值⨯=1λ
CL (大输液的浓度都按1mg/ml 计算)
粉针样品稀释最大有限浓度=内毒素限值
鲎试剂灵敏度=L λ
(然后根据样品规格计算出应该稀释的倍数)
4:溶液稀释
4.1样品稀释
样品稀释为比最大稀释倍数的小一倍的样品溶液为T 0和最大稀释倍数的样品溶液为T 1
4.2内毒素工作品稀释:
内毒素工作品根据鲎试剂的灵敏度稀释S 0=4λ,S 1=2λ。

4.3样品阳性对照0.5mlS 0+0.5mlT 0混匀
5:操作步骤
5.1取鲎试剂8支(如有一批样品),分别加入100ul 的检查用水,复溶。

5.2 对照品和供试品
5.2.1阴性对照加入100ul 检查用水
5.2.2阳性对照加入100ulS 0溶液
5.2.3样品加入100ulT 1溶液
5.2.4样品阳性对照加入100ul 样品阳性对照溶液
每个管平行做2支。

6:培养
放入试管恒温仪中37℃,培养60min。

阴性对照、样品应无凝固。

阳性对照、样品阳性对照应凝固,轻轻倒立180°无滑脱。

注:1、安剖瓶用酒精棉将曲颈擦拭消毒后,沿易折点折断。

2、试验完成后,用酒精棉球擦拭工作台面。

3、培养过程中注意防止震动,以免出现假阴性。

4、S1=2λ、S0=4λ。

5、如果同时做几批样品,可以只做2个阳性对照,2个阴性对照。

6、空安剖瓶的最大容积为5ml,在稀释过程中要注意不能使稀释体积过大。

另外还要注意移液器的量程,尽量减少稀释次数。

相关主题