元件A(富含A/T的共有序列)：结合一个特异的蛋白 质复合物──复制起点识别复合物(ORC)
3个序列(B1、B2和B3)可以增加复制起点的效率， 其中B2的9个碱基与上述ARS共有序列相同
真核DNA复制叉主要蛋白质的功能
蛋白质
功能
RPA
单链DNA结合蛋白，激活DNA聚合酶，使解旋酶容易结合DNA
端粒酶（telomerase）是一种核糖核蛋白（RNP），由 RNA和蛋白质组成
端粒酶以自己的RNA组分作为模板，以染色体的3’端 ssDNA（后随链模板）为引物，将端粒序列添加于染色体 的3 端。这些新合成的DNA为单链
端粒酶催化作用的爬行和端粒的延长过程
五、真核生物染色体DNA在每个细胞周 期中只能复制一次
DNA连接酶Ⅰ 连接冈崎片段
DNA解旋酶 DNA双螺旋解链，参与组装引发体
TolⅠ和TolⅡ 拓扑异构酶，去除负超螺旋（使解旋酶容易解旋），去除复制叉前方产生的正 超螺旋
二、真核生物复制的延长发生DNA聚合酶转换
现在认为pol α主要催化合成引物，然后迅速被具 有连续合成能力的DNA pol δ和DNA pol ε所替 换，这一过程称为聚合酶转换。DNA pol δ负责 合成后随链，DNA pol ε负责合成前导链。
复制的起始需要DNA-pol α（引物酶活性）、 pol δ和pol ε参与。还需解螺旋酶活性、拓扑 酶和复制因子(replication factor, RF)
酵母复制起始点
酵母染色体含有多个复制起点。
酵母复制起点为自主复制序列（autonomously replicating sequences，ARS）：
3
5
+
5
3
3
端粒（telomeres）由富含TG的重复序列组成 人的端粒重复序列为5’-(TnGn)x-3 这些重复序列多为双链，但每个染色体的3’
端比5端长，形成单链ssDNA。这一特殊结构 可解决染色体末端复制问题
端粒酶(telomerase)
组成： 端粒酶RNA (human telomerase RNA, hTR) 端粒酶协同蛋白(human telomerase associated protein 1, hTP1) 端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTRT)
DNA合成期
G2
S
M 哺乳动物的 细胞周期
G1
细胞能否分裂，决定于进入S期及M期这两个关 键点。G1→S及G2→M的调节，与蛋白激酶活 性有关
蛋白激酶通过磷酸化激活或抑制各种复制因子 而实施调控作用
一、真核生物复制的起始与原核基本相似
真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制 子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式 激活而不是同步启动
ORC至少募集两种解旋酶加载 蛋白Cdc6和Cdt1
三种蛋白质一起募集真核细胞 解旋酶Mcm2-7
pre-RC的激活 和组装真核 DNA复制叉
CDK控制pre-RC的形成和激活
真核细胞通过依赖细胞周期蛋白的蛋白激 酶（cyclin-dependent kinases，CDK）严格 控制pre-RC的形成和激活
PCNA
激活DNA聚合酶和RFC的ATPase活性
RFC
有依赖DNA的ATPase活性，结合于引物-模板链，激活DNA聚合酶，
促使PCNA结合于引物-模板链
Pol /引发酶 合成RNA-DNA引物
Pol /
DNA复制，核苷酸切除修复，碱基切除修复
FEN1
核酸酶，切除RNA引物
RNAse H
核酸酶，切除RNA引物
DNA聚合酶/转换
前导链：出现在引发后期 后随链：发生于每个冈崎片段合成之际
发生DNA聚合酶转换的原因是Pol 不具备 持续合成能力
DNA聚合酶转换的关键蛋白是RFC
真核DNA聚 合酶转换和 后随链合成
三、真核生物DNA合成后立即组装成核小体
亲代DNA
5
3
5 3
引物 核小体
第四节
真核生物DNA复制过程
Eukaryotic DNA replication process
真核生物与原核生物DNA复制的差异： 真核生物复制子多、冈崎片段短、复制叉前进速度慢等 DNA复制从引发进入延伸阶段发生DNA聚合酶转换 切除冈崎片段RNA引物的是核酸酶RNAse H和FEN1等
3 5
前导链
后随链
3 5
四、端粒酶参与解决染色体末端复制问题
染色体DNA呈线状，复制在末端停止 复制中冈崎片段的连接，复制子之间的连接 染色体两端DNA子链上最后复制的RNA引物
，去除后留下空隙
切除引物的两种机制
线性DNA复制一次端粒缩短
5
3
3
553源自3553
真核所有染色体DNA复制仅仅出现在细胞 周期的S期，而且只能复制一次
前复制复合物在G1期形成而在S期被激活
复制基因（replicator）是指DNA复制起始 所必需的全部DNA序列
真核细胞DNA复制的起始分两步进行，即复 制基因的选择和复制起点的激活
前复制复合物（pre-RC）的形成
复制起点识别复合物（origin recognition complex， ORC）识别并结合复制基因
Cdk功能： 激活pre-RC，以起始DNA复制 抑制形成新的pre-RC
六、真核生物线粒体DNA按D环方式复 制
D-环复制（D-loop replication）是线粒 体DNA的复制形式
DNA-pol γ dNTP