用血分机获得 80ML浓缩血
2000g×20min ， 20℃
分离出富含白细胞的部分
PMNC 层
培养瓶内细 胞收集、离 心、洗涤回 输
第7天扩瓶后抽 样送检（细菌培 养和表型分析）
CIK培 养隔23天补 液扩瓶
第3天 扩瓶
培养
第2天加 混合细 胞因子
175cm2培养瓶 CIK培养液（
含IFN-γ）
•12
自体体细胞医疗技术的概念
自体体细胞治疗技术是应用病人自体的体细胞通过体外培养获 得免疫活性细胞作为治疗手段的医疗技术
•6
免疫细胞治疗
免疫细胞治疗主要技术
• 细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer cell, CIK）
1.1991年发现的，以共同表达CD3和CD56为特征； 2.增值速度快。经过2－3周左右的体外培养，细胞数量可增加400倍以上，占总细胞的 比例可达40%以上。 3.杀瘤活性高： 杀伤单位（TLU）为LAK细胞的73倍以上。 4.杀瘤谱广：CIK细胞虽然以CD3、CD56细胞为主要效应细胞，却没有T淋巴细胞杀 伤时的MHC限制性。 5.体外培养依赖CD3单抗和IFN-γ 。CD3单抗可作为丝裂原活性单位与T细胞表面的 CD3交联，诱导其活化，而IFN-γ则诱导IL-1等细胞因子的合成。 • 树突状细胞(dendritic cell，DC)是最有效的抗原递呈细胞。DC的目标在于诱导肿瘤特 异性和长期持久的免疫反应，这种效 应有助于防止微小残留病灶和肿瘤复发。 • LAK/TIL/CD3AK/CTL：自上世纪80年代以来先后应用于临床的自体免疫细胞，但 由于存在着扩增倍速较低、细胞来源困难、细胞毒力不高等诸多问题，该疗法在临床 应用上受到一定限制。 • 经基因改变的自体T细胞：自体T细胞体外经慢病毒转染表达识别CD19的嵌合受体， 该受体识别表达CD19的CLL肿瘤细胞后杀伤肿瘤细胞，这一基因改变的细胞在回输 后在体内增值1000倍以上。
•减少恶性肿瘤传统治疗后的复发 与转移；
•提高肿瘤综合治疗疗效；
•少数肿瘤及患者的主要治疗手段 （对放化疗不敏感或者无法耐受的 情况以及对免疫原性较强的的肿瘤 ）。
禁忌症
•孕妇；
•患者不能进行淋巴细胞 分离术或者少量多次抽血 者；
•器官功能衰竭者；
•有器官移植史的患者；
•不可控制的感染性疾病 ，如HIV阳性；
免疫监视学说的中心思想是：免疫系统具有一个十分完备的监视功能， 能准确地分辨“自己”和“非己”的成分；它不仅能清除外界侵入的各种 微生物，排斥同种异体移植物，而且还能消灭机体内突变的细胞，防止肿 瘤的生长，保护机体的健康。
每当免疫监视功能由于这种或那种原因被消弱时，便为肿瘤的发生提 供了有利条件；如果机体不具备免疫监视功能，人类的肿瘤发病率会大大 的提高。
免疫细胞治疗
DC-CIK细胞免疫治疗
80-100ml外周血
单个核细胞
NK 细胞, T细胞
成熟DC与自体CIK混合培 养，不加抗原
细胞培养达1×109以上 质控检测
细胞回输，6个疗程或结合放
化疗制定方案
•13
免疫细胞治疗
树突状细胞制备流程
留血浆50ML备用 淋巴细胞分离液
用血分机获得 80ML浓缩血
8. EAAL : 治疗肿瘤和慢性传染性病毒感染
………..
•10
免 INF-γ、IL-2、CD3诱导 细胞培养达1×109以上
质控检测
细胞回输，6个疗程或结合放 化疗制定方案
•11
免疫细胞治疗
免疫细胞治疗 CIK细胞制备培养
留血浆50ML备用 淋巴细胞分离液
细胞免疫理论的建立
肿瘤免疫理论的提出
肿瘤免疫的概念起源于上世纪初。1909年Ehrlich首先提出，免疫系统不 仅负责防御微生物侵犯，而且能从机体内清除改变了的宿主成分。并提出 了细胞免疫直接对抗肿瘤的概念，此后人们认识到癌细胞是改变了的宿主 成分。
免疫监视学说的提出
六十年代经Thomas、Burnet和Good等人将该观点系统化，提出了免疫 监视学说。
•有其它免疫缺陷疾病， 在4周内使用过大量免疫 抑制剂的患者；
•对本治疗中所用生物试 剂过敏者；
•T淋巴细胞瘤患者。 •8
免疫细胞治疗
治疗的基本流程
单个核细胞采集
细胞回输
细胞分离、扩增
疗效观察
细胞鉴定及无菌检测
•9
免疫细胞治疗
可以重点开展的免疫细胞治疗项目
1. NK：自然杀伤细胞治疗
2.CIK: 细胞因子诱导的杀伤细胞治疗 3.CIK+DC:CIK细胞+树突细胞治疗 4.TIL:肿瘤浸润性淋巴细胞 (来自于肿瘤组织、胸水、腹水 和转移淋巴结）治疗 5.TIL+ DC-肿瘤组织 6.DC-肿瘤组织+T细胞治疗4. 7. AAIC: 抗原活化的树突状细胞治疗
•5
免疫细胞治疗
免疫细胞治疗
肿瘤体细胞免疫治疗技术
向肿瘤患者输入具有抗肿瘤活性的免疫细胞，直接杀伤肿瘤细 胞或激发机体抗肿瘤免疫反应，从而达到治疗肿瘤的目的，这一过 程称为体细胞免疫治疗。
大量研究表明，肿瘤患者的外周血中存在癌细胞，是引发肿瘤 复发转移、导致患者死亡的重要原因之一。有效清除血循环中的癌 细胞，对预防肿瘤复发、改善肿瘤晚期患者的生存质量具有重要的 作用。
2000g×20min ， 20℃
PMNC 层
悬浮细胞 进行CIK培养方案
贴壁细胞进行 DC细胞培养方案
分离出富含白细胞的部分
细胞贴壁120min
6孔板1640培养液
•7
免疫细胞治疗
免疫细胞治疗的适用范围
优势
适应症
•可以调节和增强全身免 疫机能；
• 可有效的杀伤残余的肿 瘤细胞，防止肿瘤复发、 转移；
• 缓解晚期患者的临床症 状，延长生存期，创造更 多的 治疗机会，甚至 实现长期带瘤生存；
• 减轻放、化疗的毒副反 应，提高患者生存质量；
• 它特异性极强、无免疫 排斥反应，相对于其他三 种治疗 模式副作用小。
免疫细胞治疗课件
•1
免疫细胞治疗
细胞治疗服务
肿瘤治疗手段的发展
放疗
手术
化疗
• 暂免疫因子
生物治疗 • 重组抗体 • 基因疗法 • 细胞治疗
科学家重新探索，我们是否可以从肿瘤的发 生、发展的根源寻找到治疗肿瘤的新方法？
•2
免疫细胞治疗
细胞治疗的技术特点示意图
•3
免疫细胞治疗
免疫细胞治疗
•4
免疫细胞治疗