灰度CASA的特点
精子识别: 根据成像灰度识别精子,易将精液杂质误 识别为精子,需要人工干预帮助识别。
荧光CASA的特点
识别原理：
荧光色素与活精子（双链DNA）结合 后出现绿色荧光反应，而与死精子（单链 DNA）结合时则呈橙色荧光。除精子和极 少数非精子细胞外，精液中的其他细胞和 颗粒碎片均不发荧光。
临床意义:
精浆柠檬酸来自前列腺，其作用是 络合钙离子，通过与钙离子结合，而调 节精浆钙离子浓度，并影响射精后精液 液化过程的功能。
前列腺分泌功能指标:精浆酸性磷酸酶
临床意义：
前列腺炎患者精浆酸性磷酸酶含量降低, 前列腺肥大或早期前列腺恶性肿瘤者其含量 增高。
前列腺分泌功能指标:精浆锌
临床意义:
① 锌缺乏可引起性腺发育不良或性腺功能 减退。 ② 锌可调节雄激素代谢，锌含量降低时可 促进睾酮转变为双氢睾酮。
精子形态学分类标准(Kruger & menkfeld)
精子形态学计算举例
计数的精子数： 200 正常精子数： 78 正常精子百分比：（78/200×100%） 39% 缺陷精子数：（200-78） 122（61%） 头部缺陷精子数： 110（55%） 中段缺陷精子数： 18（9%） 尾部缺陷精子数： 16（8%） 缺陷总数：（110+18+16） 144 畸形精子指数(TZI) = (缺陷总数/ 缺陷精子数) =1.18 精子畸形指数(SDI) = (缺陷总数/所数精子总数) =0.72
人类射出的精液中，活性氧类物质是由中段带 有多残留细胞质的异常或不成熟精子精子和白 细胞产生的。 精浆中有抗氧化物清除剂和酶，某些病人的这 些物质可能不足。
在制备辅助受孕的精子时去除精浆，有可能使 精子更易受到氧化损害。
约40%不育门诊的男性患者和97%脊髓受到损伤 的男性，在他们的精液中存在可测浓度的ROS。
男性不育症现代实验诊断技术



精液计算机辅助分析 精子功能检测 精液免疫生化检验 细胞遗传学检查 分子生物学
尤以精液免疫生化检验发展得最快, 具有十分重要的诊断价值。
2.男性不育常用实验诊断指标 方法学及临床意义
精子质量
精子发生
精液在生殖管 道中的运输
生精功能评价指标： 血激素：FSH、LH、
临床意义：
活性氧类是氧的代谢产物，包括超氧阴离子、 过氧化氢、氢氧根、过氧化氢和一氧化氮。过 量存在可诱发细胞脂质、蛋白质和DNA的氧化 损伤而造成病理性损伤。
许多细胞具有酶性抗氧化剂系统（超氧化物歧 化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶）或 非酶性抗氧化剂系统（尿酸、维生素C、维生 素E）。当这些防御机制受制时，细胞功能将 受到影响。
精浆果糖
精浆锌、柠檬酸、ACP
感染性检测 精浆中性α葡糖苷酶
精液在生殖管道中运输检测指标
附睾分泌功能指标:精浆中性α-葡糖苷酶
Seminal plasma neutral alpha- glucosidase WHO推荐检测方法：Cooper法（PNPG法）
临床意义：
中性α-葡糖苷酶作为附睾分泌功能指标较左 旋肉毒碱和甘油磷酸胆碱更特异更灵敏。 结合精浆果糖、激素和睾丸其他指标,对远端 输精管阻塞有较好的诊断价值。
核蛋白组型转换缺陷或异常可引起男 性不育或胚胎早期夭折流产,其机理为:
① 使精子DNA不稳定，易受损伤而不能受孕; ② 一旦受精,由于核蛋白组型异常, 精子核不 能正常解聚，从而影响了雌雄原核的融合; ③ 胚胎不能正常发育,造成胚胎夭折而流产。
苯胺蓝染色
精子悬液活性氧类物质
Reactive oxygen species, ROS
背景知识:
精液圆细胞(rouud cell)： 生殖道上皮细胞、生精细胞和白细胞 统称之。
正常精液： 圆细胞数<5×106/ml; 白细胞数<1×106/ml。
病体原分离培养（四步法）：
精液白细胞过氧化物酶染色(正甲苯胺法)
精液白细胞群酶免组化定量检测图谱
精浆弹性蛋白酶研究进展
经ROC分析： 判定生殖道感染临界值(Cut-off): >290ng/ml 灵敏度：79.5% 特异性：74.4% (欧洲泌尿外科学会:Cut-off >690ng/ml) 292例不育病人，34% elastase>290ng/ml； 20例正常生育者，5% elastase>290ng/ml； 264例非白细胞精子症者,25% elastase>290ng/ml 60例阳性者经Norfloxacine治疗后: 25%<290ng/ml.
精子核蛋白组型转换
Spermatozoan Nucleoprotein Transition
临床意义:
正常情况下精子细胞阶段, 组蛋白将逐渐 被鱼精蛋白所取代。 鱼精蛋白能中和DNA电荷, 并能抑制RNA 的合成,也即抑制了基因表达。 受精前精子基因在鱼精蛋白特殊保护下,紧 密浓集,无任何DNA转录作用,无疑有重要生理 意义.
精子膜表面抗体检测的方法(WHO推荐)

混合凝集反应（mixedagglutination reaction,MAR）
特点：免疫性不育过筛试验，检测IgG型抗体。

免疫珠试验 (immunobead test, IBT)
特点：特异性较MAR更高,可进行IgG、IgA、IgM 抗体分型。

间接免疫珠试验
前列腺分泌功能指标（WHO推荐）
精浆柠檬酸定量（酶法）
（Seminal plasma citric acid ）
精浆酸性磷酸酶定量（PNPP法）
（Seminal plasma acid phosphatase ）
精浆锌定量（5-Br-PAPS法）
（Seminal plasma zinc ）
前列腺分泌功能指标:精浆柠檬酸
可选用下列任一标本组合方式进行AsAb检测： ①男配偶活动精子＋女配偶血清或宫颈粘液 ②供体活动精子(抗精子抗体阴性)＋待检精浆 ③供体活动精子(抗精子抗体阴性)＋待检宫颈粘液 ④供体活动精子(抗精子抗体阴性)＋待检血清
男性免疫性不育的确诊
a) MAR与IBT试验结果并非经常一致。
b) 男性免疫性不育的确证需要在MAR或IBT阳性 基础上附加其他试验，附加试验可以是前者的 重复试验、精子-宫颈粘液接触试验、精子-宫 颈粘液毛细管试验。 c) MAR: ≥10%为可疑，>50%有确定临床意义。 I BT: ≥20%为可疑, >50%有确定临床意义。
计算机辅助精子分析
Computer aided of semen analysis，CASA
CASA较人工方法具有以下优点： 高精确性； 提供精子动力学的量化数据。 根据识别精子原理分类,CASA分为: 灰度识别 荧光识别 比色识别 (880nm)
灰度CASA的特点
精子活力分级:
a级: 快速前向运动 (VAP≥26µm/s) b级: 中速前向运动 (16≤VAP<26µm/s) c级: 慢速前向运动 (6≤VAP<16µm/s) d级: 极慢或不动 (0≤VAP<6µm/s) 灰度CASA无法检测出“精子成活率”，需 进一 步作活体染色（如：HOS，伊红染色） 同一精液标本a+b+c值低于实际“精子成活率”。
不育男性
病因学诊断 治疗或偿试治疗 考虑ART助孕 选择最适ART助孕方式 辅助生殖技术 男科学
实验诊断
男性不育症诊疗标准化
实验诊断标准化 临床诊疗标准化
男性不育症实验诊断标准化的意义
保障诊断的准确性 实现诊疗(研究)数据共享
男性不育症实验诊断标准化的内容
检测指标标准化 检测方法标准化 检测质量合乎标准 病因分析标准化
检测方法：化学发光法
精子形态学染色
SpermMorphology Staining
吉姆萨染色------评价不同类型白细胞比评价精子更好 (改良)巴氏染色------经典方法 肖尔(Shorr)染色------常规精子形态分析 勃-利二氏(Bryan-Leishman)染色------适用于鉴定未成 熟生殖细胞和未成熟生殖细胞与白细胞的鉴别 Diff-Quik染色-------精子形态学分析
三种感染性检测方法比较
检测方法
过氧化物酶染色
被检测物质
分泌POX的 中性粒细胞 所有白细胞 检测粒细胞 抗炎效应物
优点
简单 快速 准确
不 足
检测效能低
酶免组化定量 弹性蛋白酶
操作稍复杂
准确 无明显不足 易批量检
精子质量评价
抗精子抗体
anti-sperm antibody (AsAb) ⑴血清AsAb检测指标的局限性 a) 男性特有的血睾屏障对精子施行封闭式保护; b) 精子抗原的复杂性给诊断试剂的制备带来困难. ⑵ 精子膜表面抗体（包被抗体）检测的意义 ① 避免精子膜内抗原释放,反应具特异性; ② 检测活力精子,更具临床意义.
临床意义:
测定精液 LDH-X并结合激素水平测定，可作为评 价生精上皮状态指标。精液 LDH-X活性低下，提 示精子分化受到损害或抑制。
可评价精子膜的完整程度 。不育组LDH-X可通过 膜破损处大量外漏到精浆。精浆/精子LDH-X: 生 育组=0.528;精液常规正常不育组=0.88;精液常规 不正常的不育组=2.85;少精症组=4.01;各不育组与 生育组间均有显著性差异。
精囊分泌功能指标:精浆果糖
Seminal plasma fructose WHO推荐检测方法：吲哚法或酶法
临床意义：
精囊分泌的果糖是精子能量的主要来源。 先天性精囊缺如果糖测定为阴性。 精囊炎、不完全射精或射精过频，果糖含量降低。 用于鉴别单纯性输精管阻塞所致的无精症（果糖含 量正常）和输精管、精囊发育不良引起的无精症。