男性不育检查与规范指标一、男性不育症实验诊断概况●男性不育症的实验诊断方法过去长期停留在较低水平，不育症病因临床诊断困难。

●WHO制定了多项男性不育实验和临床诊断技术规范。

二、男性不育常用实验诊断指标方法学及临床意义血清抑制素B inhibin B （ELISA法）临床意义：精子发生的血清标志物；非阻塞性无精症病人睾丸精子抽取(TESE)预测；青春期性腺功能评估；卵巢储备功能评价。

附睾分泌功能指标精浆中性α-葡糖苷酶Seminal plasma neutral alpha- glucosidase WHO推荐检测方法：Cooper法（PNPG法）临床意义：中性α-葡糖苷酶作为附睾分泌功能的指标，较左旋肉毒碱和甘油磷酸胆碱对附睾更特异更灵敏。

结合激素和睾丸其他指标，对远端输精管阻塞有较好的诊断价值。

果糖结合中性α-葡糖苷酶检测，可大大提高其诊断阻塞性无精子症的价值精囊分泌功能指标精浆果糖 Seminal plasma fructoseWHO推荐检测方法：吲哚法或酶法临床意义：●精囊分泌的果糖是精子能量的主要来源。

●先天性精囊缺如果糖测定为阴性。

●精囊炎时，果糖含量降低。

●不完全射精或射精过频，果糖含量亦降低。

●用于鉴别单纯性输精管阻塞所致的无精症（果糖含量正常）和输精管、精囊发育不良引起的无精症精浆柠檬酸Seminal plasma citric acid临床意义柠檬酸来自前列腺，其作用是络合钙离子，通过与钙离子结合，而调节精浆钙离子浓度，并影响射精后精液液化过程的功能。

精浆酸性磷酸酶 Seminal plasma acid phosphatase临床意义：前列腺炎患者精浆酸性磷酸酶含量降低,前列腺肥大或早期前列腺恶性肿瘤者其含量增高。

精浆锌 Seminal plasma zinc临床意义①锌缺乏可引起性腺发育不良或性腺功能减退。

②锌可调节雄激素代谢，锌含量降低时可促进睾酮转变为双氢睾酮。

③锌直接参与精子生成、成熟、激活和获能过程。

可使精子免于男女生殖道对其潜在的损伤。

锌可帮助抑制细胞膜发生脂质过氧化反应，保证精子的形态结构和功能正常。

④锌是前列腺功能指标之一，与抗细菌感染有关。

精液白细胞过氧化物酶染色Semen Leukocytes Peroxidase StainingWHO推荐检测方法：正甲苯胺法[原理]多形核粒细胞特有的过氧化物酶可将H2O2分解，产生新生态氧，使正甲苯胺被氧化成正甲苯胺蓝，后者进而形成棕色物使细胞着色。

精液白细胞群定量 Semen Leukocyte SubpopulationsWHO推荐检测方法------ 酶免组化法[原理]CD45为精液白细胞群共同抗原。

通过CD45单克隆抗体与精液白细胞结合后，再经一系列的酶免放大反应，最终指示精液中白细胞的存在及数量。

精浆粒细胞弹性硬蛋白酶Seminal plasma PMN-elastase检测方法：ELISA定量[原理]包被于固相载体的抗弹性硬蛋白酶单抗可与精浆中弹性硬蛋白酶相结合，结合的待测物再与特异性酶标记物反应，最后通过底物显色，其吸光度大小与精浆标本中弹性硬蛋白酶浓度相关。

抗精子抗体 anti-sperm antibody⑴血清AsAb检测指标的局限性a) 男性特有的血睾屏障对精子施行封闭式保护;b) 精子抗原的复杂性给诊断试剂的制备带来困难.⑵精子膜表面抗体（包被抗体）检测的意义①避免精子膜内抗原释放,反应具特异性;②检测活力精子,更具临床意义.⑶精子膜表面抗体检测的方法(WHO推荐）混合凝集反应（mixedagglutination reaction,MAR）特点：免疫性不育过筛试验，检测IgG型抗体。

免疫珠试验 (immunobead test, IBT)特点：特异性较MAR更高,可进行IgG、IgA、IgM抗体分型。

间接免疫珠试验特点：可取女性宫颈粘液或血清标本，与正常活体精子预孵育，间接检测标本是否存在AsAb;可用于检测精浆AsAb;也可进行夫妻协同试验。

可选用下列任一标本组合方式进行AsAb检测：①男配偶活动精子＋女配偶血清或宫颈粘液②供体活动精子(抗精子抗体阴性)＋待检精浆③供体活动精子(抗精子抗体阴性)＋待检宫颈粘液④供体活动精子(抗精子抗体阴性)＋待检血清⑷男性免疫性不育的确诊a) MAR与IBT试验结果并非经常一致。

b) 男性免疫性不育的确证需要在MAR或IBT阳性基础上附加其他试验，附加试验可以是前者的重复试验、精子-宫颈粘液接触试验、精子-宫颈粘液毛细管试验。

c) MAR: ≥10%为可疑，>50%有确定临床意义。

I BT: ≥20%为可疑, >50%有确定临床意义。

精子低渗膨胀试验(HOS)Sperm Hypo-Osmotic, HOS临床意义◆WHO不主张将HOS作为精子功能试验予以应用.◆是一种检查精子存活力的补充试验方法.◆有研究表明：HOS与去透明带地鼠卵穿透试验之间有较好的符合率,对继发性不育者更有价值.乳酸脱氢酶同工酶X(LDH-X)SemenLactateDehydrogenase X-isoenzyme，LDH-X临床意义①测定精液 LDH-X并结合激素水平测定，可作为评价生精上皮状态指标。

严重少精症者，精液 LDH-X活性很高,而不育患者精子计数正常，精液 LDH-X活性低下，提示精子分化受到损害或抑制。

②可评价精子膜的完整程度。

不育组LDH-X可通过膜破损处大量外漏到精浆。

精浆/精子LDH-X: 生育组=0.528;精液常规正常不育组=0.88;精液常规不正常的不育组=2.85;少精症组=4.01;各不育组与生育组间均有显著性差异。

精子顶体酶 acrosin临床意义顶体酶是受精过程中不可缺少的蛋白水解酶。

顶体酶活性可反映精子质量，顶体酶活力不足可导致不育。

临床精子成活率低、死精子症以及严重生殖系统感染，特别是溶脲支原体严重感染时可造成精子顶体酶活性降低。

顶体酶活性是判断男性精子功能和生育力强弱的重要评价指标。

精子核蛋白组型转换Spermatozoan Nucleoprotein Transition临床意义:正常情况下精子细胞阶段, 组蛋白将逐渐被鱼精蛋白所取代。

鱼精蛋白能中和DNA电荷, 并能抑制RNA的合成,也即抑制了基因表达。

受精前精子基因在鱼精蛋白特殊保护下,紧密浓集,无任何DNA转录作用,无疑有重要生理意义.核蛋白组型转换缺陷或异常可引起男性不育或胚胎早期夭折流产,其机理为:①使精子DNA不稳定，易受损伤而不能受孕;②一旦受精,由于核蛋白组型异常, 精子核不能正常解聚，从而影响了雌雄原核的融合;③胚胎不能正常发育,造成胚胎夭折而流产。

精子悬液活性氧类物质(ROS) reactive oxygen species, ROS临床意义1．活性氧类是氧的代谢产物，包括超氧阴离子、过氧化氢、氢氧根、过氧化氢和一氧化氮。

当过量存在时，这些活性氧类物质通过诱发细胞脂质、蛋白质和DNA的氧化损伤而造成病理性损伤。

2．许多细胞具有酶性抗氧化剂系统（超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶）或非酶性抗氧化剂系统（尿酸、维生素C、维生素E）。

当这些防御机制受制时，细胞功能将受到影响。

3．人类射出的精液中，活性氧类物质是由中段带有多残留细胞质的异常或不成熟精子精子和白细胞产生的。

4．精浆中有抗氧化物清除剂和酶，某些病人的这些物质可能不足。

5．在制备辅助受孕的精子时去除精浆，有可能使精子更易受到氧化损害。

6．约40%不育门诊的男性患者和97%脊髓受到损伤的男性，在他们的精液中存在可测浓度的ROS。

7．产生过多的ROS有可能引起过氧化损害和丧失精子功能。

精子形态学染色SpermMorphology Staining吉姆萨染色------评价不同类型白细胞比评价精子更好(改良)巴氏染色------经典方法肖尔(Shorr)染色------常规精子形态分析勃-利二氏(Bryan-Leishman)染色------适用于鉴定未成熟生殖细胞和未成熟生殖细胞与白细胞的鉴别Diff-Quik染色-------精子形态学分析精浆定量检测结果的计算及意义WHO推荐附性腺分泌功能评价指标检测结果采用“量/1次射精”作为结果报告方式。

采用此种报告形式的检测项目有:精浆果糖精浆锌精浆柠檬酸精浆酸性磷酸酶精浆中性α-葡糖苷酶计算举例:已知精浆果糖测定浓度为12.2mmol/L，该病人此次射精总量为3.1ml，则该病人精浆果糖一次射精量=精浆果糖浓度（mmol/L）×一次射精总量（ml）=12.2 mmol/L × 3.1ml=12.2umol/ml × 3.1ml=37.82 umol/1次射精三、男性不育实验诊断思路男性不育实验诊断指标有着自身的特点：大多数指标间（尤其是精液检测指标）可相互影响或存在一定的逻辑关系，不受其他因素制约可直接从检测值高低判定病因的实验指标不是很多。

如果不注重对关键指标可靠性的分析，就可能导致病因分析出现偏差甚至错误。

造成关键指标出现问题的原因总体分为两类:1．标本留取。

2．某些实验指标可因故发生改变。