组织免疫荧光步骤：
1） 取出切片，用0.01 M PBS冲洗5minx 3
次；

2） 滴加10%正常山羊血清37C封闭45 min
;

3） 吸去多余液体，加入抗TSHR的一抗（1:100）,放入湿盒中，37C
孵

育1h后置于4 C冰箱中过夜（保持在湿盒中）；
4） 0.01 M PBS冲洗 5minx 3
次；

（至下一步开始要适度避光操作，防荧光淬灭！）
5） 在黑暗条件下 加入山羊抗兔IgG-FITC （1: 200） , 37C温育45
min
;

6） 在黑暗条件下吸弃二抗（注：不再冲洗），加入DAPI
染液

（2.5⑷/ml）,室温作用20 min;
7） 在黑暗条件下0.01M PBS冲洗5min x 6
次；

8
） 在黑暗条件下防荧光淬灭剂圭寸片，荧光显微镜下观察，用合适波

段激发，照相保存实验结果。
核实好下边的问题你就可以操作了：
1、
准备0.01 M PBS 500 ml，冲洗时动作既要轻柔防脱片，又要保证
冲洗彻底；
2、
抗TSHR的一抗用1: 100,用抗体稀释液稀释；
3、
实验室有没有山羊抗兔IgG-FITC，使用浓度是1: 200；
4、
DAPI染液（2.5卩g/m
）实验室有吗？

5、
防荧光淬灭剂封片实验室有吗？