免疫荧光染色法
原理
用荧光素标记已知抗体或抗原，检查细胞或组织标本相应的抗原或抗体。

在荧光显微镜下，抗原抗体特异性结合部位的荧光素受激发光照射而发出明亮的荧光。

根据荧光物存在的位置和数量，可确定抗原抗体在组织细胞中的位置和分布。

用于标记的荧光素有异硫氰酸（FITC )和四乙基罗丹明(RB200），前者发射的荧光波长为490~619nm（黄绿色荧光），后者发射的荧光波长为540~660nm（橙红色荧光）。

染液配制
0.5%伊文思蓝液：0.5g伊文思蓝溶于89mL pH7.2~7.4的PBS液中，再加11mL 1%NaN，过滤，4°保存。

荧光素标记抗体用0.02%伊文思蓝溶液稀释，伊文思蓝液将细胞背景染成蓝色荧光，与细胞特异性荧光（如异硫氰酸荧光素）形成鲜明的对比，并减少了飞特异性荧光。

染色步骤
用间接荧光法染色
（1）用95%酒精固定单层细胞培养物10~30min，或用冷丙酮固定5~10min
（2）PBS洗三次，每次5min，边洗边振荡
（3）滴加未标记的Ⅰ抗液，置37°湿盒中30min
（4）PBS洗三次，每次5min，边洗边振荡。

以除去飞特异性吸附的抗体，减少背景染色（5）滴加荧光标记Ⅱ抗，置37°湿盒中30min
（6）PBS洗三次，每次5min，边洗边振荡
（7）揩干玻片周围水分并甩掉材料上的水分
（8）荧光显微镜下观察。